李春來/河北省張家口市赤城縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局畜牧工作站 075599

王利麗 劉暢 史秋梅/河北科技師范學(xué)院 066600

早在 19 世紀(jì)的歐洲就有一系列報(bào)告發(fā)現(xiàn)了?；加信c地方性牛白血?。‥BL）相關(guān)的臨床癥狀。BLV 是逆轉(zhuǎn)錄病毒可科腫瘤病毒亞科成員之一，該病毒感染?？沙霈F(xiàn)不同的臨床癥狀，但絕大多數(shù)感染 BLV 的動(dòng)物（約 70%）是該病毒的無癥狀攜帶者。在這些動(dòng)物中，既沒有臨床癥狀也沒有證明總淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的改變。因此，只能通過抗 BLV 抗體和/或前病毒 DNA 的存在來識(shí)別。大約1/3 的 BLV 感染牛會(huì)出現(xiàn) B 細(xì)胞的良性多克隆增殖，稱為持續(xù)性淋巴細(xì)胞增多癥（PL）。這種臨床狀況的特點(diǎn)是外周血循環(huán) B 淋巴細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量增加，與 B/T 淋巴細(xì)胞比值倒置有關(guān)。盡管有這些血液生化指標(biāo)出現(xiàn)了變化，但大多數(shù)PL 動(dòng)物不出現(xiàn)任何明顯的臨床癥狀。PL 通常穩(wěn)定數(shù)年，但也可以進(jìn)展到持續(xù)性淋巴細(xì)胞增多癥。

1 牛白血病的流行病學(xué)

BLV 主要是通過感染細(xì)胞的轉(zhuǎn)移進(jìn)行水平傳播。由于游離的病毒非常不穩(wěn)定，血液或牛奶中存在的BLV 感染細(xì)胞（B 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞等）似乎是自然傳播的最佳載體。由于感染的動(dòng)物含有大量受感染的細(xì)胞，因此患有 PL 的動(dòng)物在傳播病毒方面特別有效。在畜群中，醫(yī)源性操作在很大程度上是感染傳播的原因。涉及轉(zhuǎn)移受感染血液的牛管理程序（即去角、刺耳、直腸觸診，以及使用病牛用過的針頭）被認(rèn)為是一種常見的傳播方式。此外，受感染動(dòng)物和健康動(dòng)物之間的長(zhǎng)期直接接觸也被認(rèn)為是 BLV 傳播的危險(xiǎn)因素。受感染血液的轉(zhuǎn)移也可能發(fā)生在吸血昆蟲密度高的地區(qū)。患病牛在圍產(chǎn)期或產(chǎn)后可傳播BLV，子宮內(nèi)的傳播率在 4%～ 18% 之間變化，其中患 PL 的奶牛所生小牛的風(fēng)險(xiǎn)最高。雖然 BLV 傳播被假定通過牛奶從奶牛到小牛發(fā)生，但這種感染途徑僅在實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。受感染奶牛的初乳和牛奶中存在 BLV 前病毒 DNA，但由于初乳中存在的母體抗體的保護(hù)作用，犢?？梢栽诤荛L(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)保持未感染狀態(tài)。

2 牛白血病病毒疫苗的研究進(jìn)展

雖然現(xiàn)如今仍未有商品化的牛白血病病毒疫苗上市，但在過去的幾十年，牛白血病病毒疫苗的研發(fā)工作一直在持續(xù)當(dāng)中，并已取得了一定的成績(jī)。

2.1 滅活疫苗早期研究評(píng)估了從持續(xù)感染的細(xì)胞系（胎羊腎或 FLK、LK15、Bat2Cl1 細(xì)胞系）中獲得的滅活BLV 疫苗。通過用不同的化學(xué)試劑（N-乙酰乙烯亞胺、0.1% Triton X-100、0.1%福爾馬林、甲醛、氨甲基化化合物）處理病毒來獲得滅活。這些滅活病毒疫苗誘導(dǎo)了強(qiáng)烈的特異性中和體液反應(yīng)，并部分保護(hù)了綿羊和牛免受低劑量病毒攻擊。保護(hù)與疫苗誘導(dǎo)強(qiáng)烈中和體液反應(yīng)的效率大致相關(guān)。然而，接種疫苗的動(dòng)物在高攻擊劑量下仍被感染。

2.2 細(xì)胞衍生疫苗幾種試驗(yàn)性疫苗基于以下細(xì)胞裂解物：從BLV 腫瘤質(zhì)膜或細(xì)胞提取物、用 3% 戊二醛固定的BLV 感染的 FLK 或 SF-28 細(xì)胞、不產(chǎn)生綿羊病毒的 NP2 細(xì)胞僅合成 BLV 的env 基因產(chǎn)物（gp51 和 gp30）和衣殼蛋白（p24）。盡管其中一些試驗(yàn)結(jié)果顯示上述物質(zhì)可提供部分保護(hù)，但這種策略具有傳播感染的內(nèi)在風(fēng)險(xiǎn)。因此，還需進(jìn)一步試驗(yàn)測(cè)試上述物質(zhì)的保護(hù)效果和安全性。

2.3 亞單位疫苗第一個(gè)亞單位疫苗是根據(jù)牛白血病病毒表面包膜糖蛋白gp5 設(shè)計(jì)的。gp51 序列在 BLV 分離株中非常保守，并攜帶至少3 個(gè)中和表位。用 0.01% N-乙酰乙亞胺滅活的 FLK 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中獲得的純化 gp51 的亞單位疫苗具有免疫原性，但不能持續(xù)性的提供中和抗體使動(dòng)物免受 BLV 感染。用 Al（OH）3從FLK 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中獲得的天然病毒 gp51 糖蛋白也不能防止小牛的 BLV 感染。對(duì) p24 蛋白進(jìn)行了類似的試驗(yàn)也已失敗告終。

基于抗BLV 抗體在初乳，以防止感染的能力，通過用來自 BLV 感染的綿羊的免疫球蛋白 G 對(duì)羔羊進(jìn)行成功免疫，獲得了支持體液反應(yīng)作用的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證據(jù)。應(yīng)該強(qiáng)調(diào)的是，這些早期的疫苗接種試驗(yàn)只包括少數(shù)動(dòng)物，而且是在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行的。更重要的是，這些實(shí)驗(yàn)的主要關(guān)注點(diǎn)是確定在真實(shí)畜群條件下遇到的正確攻擊劑量。另一方面，這些疫苗的一個(gè)主要問題是保護(hù)性抗體滴度的快速下降。因此，這些疫苗接種策略在畜群條件下的重要性仍然值得懷疑。

上述研究表明，體液反應(yīng)很快似乎不足以實(shí)現(xiàn)對(duì) BLV 感染的全面保護(hù)。此外，接種動(dòng)物抗體滴度快速下降表明其不能提供長(zhǎng)時(shí)間的保護(hù)力。由于這些針對(duì) BLV 的疫苗研發(fā)試驗(yàn)的失敗更強(qiáng)調(diào)了細(xì)胞免疫在抗BLV 中的重要性。

2.4 重組痘病毒疫苗重組痘病毒（RVV）可用作針對(duì) BLV 抗原的免疫載體。RVV 是一種活的重組載體，具有廣泛的宿主范圍特異性，能夠攜帶大量遺傳信息，最重要的是，能夠引發(fā)體液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫。使用單獨(dú)編碼gp51 的 RVV 進(jìn)行的初步研究既不會(huì)在綿羊或兔子中誘導(dǎo)體液反應(yīng)，也不會(huì)針對(duì) BLV 提供保護(hù)。相比之下，RVV 包含編碼 gp51 和 gp30 糖蛋白的完整env基因（RVV-env），在兔和綿羊中產(chǎn)生中和體液反應(yīng)。在兩項(xiàng)研究中，類似的 RVV-env 疫苗誘導(dǎo)了強(qiáng)烈的體液和CD4+T 細(xì)胞反應(yīng)，并防止 BLV 攻擊。不幸的是，RVV-env 疫苗對(duì)奶牛無效。值得注意的是，接種 RVV-env 在牛導(dǎo)致增加這可能表明有2 型應(yīng)答IgG1 的抗體滴度。表達(dá)gag、pol和env基因的RVV 載體在攻擊后也未能保護(hù)牛。

2.5 DNA 疫苗

DNA 疫苗可以誘導(dǎo)持久的免疫反應(yīng)，該免疫反應(yīng)包括體液免疫和細(xì)胞免疫。含有受巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子控制的env 基因的DNA 疫苗不會(huì)誘導(dǎo)強(qiáng)烈的抗體反應(yīng)，但會(huì)刺激接種疫苗的小牛的細(xì)胞介導(dǎo)免疫，在BLV 攻擊后實(shí)現(xiàn)了部分保護(hù)。另一種DNA 疫苗被設(shè)計(jì)用來表達(dá)Tax 反式激活蛋白。Tax 載體可能通過涉及 CTL 活性的 Th1 細(xì)胞反應(yīng)抑制免疫綿羊中的 BLV 復(fù)制。然而，最近的一項(xiàng)研究表明，Tax DNA 疫苗在感染的早期階段引發(fā)了細(xì)胞毒性反應(yīng)，但不能預(yù)防后期感染。

3 結(jié)語(yǔ)

現(xiàn)階段牛白血病的防控主要通過加強(qiáng)病毒的監(jiān)測(cè)、病牛及時(shí)淘汰以及防止引入病牛等生物安全措施，尚無可用的疫苗。但隨著對(duì)BLV 的病毒學(xué)、傳染病學(xué)以及免疫相關(guān)機(jī)制的不斷完善，牛白血病病毒疫苗的研發(fā)工作定會(huì)得到突破性進(jìn)展。