王雪芬，周守長，李小慶，許金朋，盧 婷，劉 喆，劉 洋

（華裕農(nóng)業(yè)科技有限公司 057151）

大腸桿菌病是由埃希氏大腸桿菌的某些致病株所引起的一類疾病，各種年齡的雞均可感染，大腸桿菌病可以單獨(dú)發(fā)病也可以通過其他疾病的繼發(fā)感染，由于近年來抗菌藥物的濫用，大腸桿菌耐藥株日益增多，使得該病呈蔓延趨勢。 所以本次針對臨床分離的三種大腸桿菌菌群，進(jìn)行牛津杯藥敏試驗，同時對比標(biāo)準(zhǔn)藥敏片。 結(jié)果顯示成品牛津杯藥敏結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)藥敏片結(jié)果一致性較高，可通過藥敏結(jié)果來指導(dǎo)現(xiàn)場用藥防止耐藥產(chǎn)生。

1 試驗?zāi)康?/h2>

為了現(xiàn)場出現(xiàn)大腸桿菌引起的心包炎、肝周炎、腹膜炎等原發(fā)和繼發(fā)感染，防止耐藥對成品藥品的使用篩選，選用三個分離的大腸桿菌進(jìn)行牛津杯藥敏試驗。

2 實驗材料

大腸桿菌分離株A 菌株、B 菌株、C 菌株、藥敏片、牛津杯、成品藥、離心管、超純水、生理鹽水、涂布棒、珠子、酒精燈、取菌環(huán)、MH 培養(yǎng)基等。

表1 產(chǎn)品信息

3 試驗方法

3.1 培養(yǎng)基制備

將121℃高壓滅菌的MH 瓊脂培養(yǎng)基， 冷卻至50℃～60℃后， 在超凈臺中酒精燈火焰旁， 倒在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)， 每皿約25mL，凝固后備用。

3.2 菌懸液制備

在超凈臺內(nèi)，用酒精燈外焰灼燒接種環(huán)，待接種環(huán)冷卻后接將三個場區(qū)純化的單個菌落到裝有3mL 無菌生理鹽水的樣品瓶中，制成菌懸液。

3.3 藥品稀釋

將10 種產(chǎn)品進(jìn)行按照推薦量稀釋，并縮小10 倍，擴(kuò)大10倍做三個梯度備用。

3.4 菌液涂布

在超凈臺內(nèi)，吸取0.1mL 菌液到平板表面，用涂布棒或珠子5 顆將菌液涂布均勻。

表2 稀釋比例

3.5 擺放牛津杯

在超凈臺內(nèi)，在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯，輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙，每個平皿放置6 個牛津杯。

3.6 加入藥液

在超凈臺內(nèi)往牛津杯中加入不同濃度的藥液200uL。

3.7 貼藥敏片

選與本次試驗同類的標(biāo)準(zhǔn)藥敏片進(jìn)行對比。

3.8 培養(yǎng)

將做好的培養(yǎng)皿放置在37℃培養(yǎng)16～18h， 取出觀察結(jié)果，進(jìn)行分析對比。

4 實驗結(jié)果

4.1 通過三種細(xì)菌5 種抗生素的三種濃度進(jìn)行抑菌對比結(jié)果如下

4.1.1 A 菌株牛津杯藥敏結(jié)果

縮小10 倍濃度結(jié)果：多西環(huán)素、桿特、痢康、復(fù)方阿莫西林為極敏，普得康為中敏；

推薦濃度結(jié)果：桿特、痢康、復(fù)方阿莫西林為高敏，多西環(huán)素為中敏，普得康為不敏；

擴(kuò)大10 倍濃度結(jié)果：桿特、痢康為中敏，普得康、多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為不敏。

4.1.2 B 菌株牛津杯藥敏結(jié)果

縮小10 倍濃度結(jié)果：多西環(huán)素、桿特、復(fù)方阿莫西林為極敏，普得康、痢康為高敏；

推薦濃度結(jié)果：桿特為極敏，多西環(huán)素、痢康、復(fù)方阿莫西林為高敏，普得康為不敏；

擴(kuò)大10 倍結(jié)果：桿特為高敏，痢康為中敏，普得康、多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為不敏。

4.1.3 C 菌株牛津杯藥敏結(jié)果

縮小10 倍濃度結(jié)果：多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為極敏，普得康為高敏，痢康為不敏；

推薦濃度結(jié)果：桿特為極敏，多西環(huán)素、復(fù)方阿莫西林為中敏，普得康、痢康為不敏；

擴(kuò)大10 倍濃度結(jié)果：桿特為中敏，普得康、多西環(huán)素、痢康、復(fù)方阿莫西林為不敏。

表3 成品藥牛津杯藥敏結(jié)果

備注： 以下藥敏結(jié)果圖示編號代表意義，A 開始的均為A菌株，A1 的1、2、3 標(biāo)記代表1 號普得康縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍，A1 的4、5、6 標(biāo)記代表2 號產(chǎn)品多西環(huán)素50%，縮小10倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍；A2 的1、2、3 代表3 好產(chǎn)品桿特，縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍；A2 的4、5、6 代表4 號產(chǎn)品痢康，縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍；A3 的1、2、3 代表5 號產(chǎn)品復(fù)方阿莫西林縮小10 倍、推薦劑量、擴(kuò)大10 倍；A3 的4、5、6 代表6號產(chǎn)品，因為沒有同樣的藥敏片所以不進(jìn)行分析。

圖1 A 菌株牛津杯藥敏結(jié)果

圖2 B 菌株牛津杯藥敏結(jié)果

圖3 C 菌株牛津杯藥敏結(jié)果

4.2 通過標(biāo)準(zhǔn)藥敏片試驗結(jié)果顯示如下

4.2.1 A 菌株：黏菌素、環(huán)丙沙星、慶大霉素高敏，阿莫西林/克拉維酸中敏，氟苯尼考低敏，多西環(huán)素和氯霉素不敏；

4.2.2 B 菌株：慶大霉素極敏，環(huán)丙沙星、黏菌素高敏，氟苯尼考、阿莫西林/克拉維酸、多西環(huán)素中敏，氯霉素不敏；

4.2.3 C 菌株耐藥：環(huán)丙沙星高敏，氟苯尼考低敏，慶大霉素、多西環(huán)素、氯霉素、粘菌素、阿莫西林/克拉維酸不敏；

4.2.4 ABC 混合菌株與C 菌株耐藥的結(jié)果基本一致。

表4 藥敏片藥敏結(jié)果

圖4 A 菌、右B 菌株藥敏片結(jié)果

圖5 C 菌株、三個混合菌藥敏片結(jié)果

5 實驗結(jié)論

通過本次實驗牛津杯成品藥敏結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)藥敏片一致性較高，且成品藥更方便現(xiàn)場的選擇優(yōu)勢。 本次實驗三種菌株均顯示環(huán)丙沙星敏感性最高，其次是粘菌素、復(fù)方阿莫西林，且C 菌株都表現(xiàn)有一定程度的耐藥情況。 根據(jù)本次實驗結(jié)果顯示，牛津杯藥敏試驗配成品藥的濃度建議使用推薦劑量。 臨床獸醫(yī)可以根據(jù)牛津杯藥敏的結(jié)果開具處方，選擇敏感的藥物進(jìn)行治療，防止耐藥菌株的產(chǎn)生。 牛津本實驗操作簡單方便使用，有條件的實驗室均可以操作。 為現(xiàn)場臨床提供有效的指導(dǎo)意義。