柴利萍 苗培果

(河南護理職業(yè)學院，河南 安陽 455000)

現(xiàn)代社會，藥品對維持和保證人體健康起著舉足輕重的作用。因此，保證藥品的安全、有效、高品質，是藥學工作者的神圣使命。藥品質量過關是藥品安全性和有效性的重要保證，直接影響到用藥者的健康和安危。為了控制藥品的質量，需要從藥品的生產、使用及儲存、運輸?shù)雀鱾€環(huán)節(jié)進行全面嚴格把控，藥物分析就是其中的重要方面。藥品分析是運用化學、物理學、生物學以及微生物學的方法和技術來研究藥物的化學檢驗、藥物穩(wěn)定性、生物利用率、藥物臨床監(jiān)測、中草藥有效成分的定性和定量等的一門學科。它包括藥物成品的化學檢驗、儲存過程中的質量考察、藥物病理毒理分析、生產過程的質量控制、藥物體內代謝分析等等工作。藥物分析在新藥的研發(fā)、生產過程及臨床應用中發(fā)揮著極其重要的作用。另外，國家經濟的發(fā)展和人民生活水平及健康意識的逐步提高，使得人們對藥物分析提出了更高的要求。

1 分光光度法原理

分光光度法是以物質對光的選擇性吸收及光的吸收定律為基礎，通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度來對物質進行定性和定量分析的方法。按測定時所用的光源不同，分光光度法分為可見、紫外及紅外分光光度法。

許多物質的溶液都具有顏色，有色溶液所呈現(xiàn)的顏色是由于溶液中的物質對光的選擇性吸收所致。不同的物質有其特有的吸收光譜，這是因為不同的分子結構，對不同波長光的吸收能力不同。在18世紀和19世紀，朗伯(Lambert)和比爾(Beer)分別研究了有色溶液的液層厚度L和溶液濃度c與吸光度A的定量關系，共同奠定了分光光度法的理論基礎，被稱為光的吸收定律或朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。

朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律指：當一束平行的單色光通過均勻、無散射的含有吸光性物質的溶液時，在入射光的波長、強度及溶液的溫度等條件不變的情況下，溶液的吸光度A與溶液的濃度c及液層厚度L的乘積成正比，其數(shù)學表達式為：

A=KcL

(1)

式中，A為吸光度，K為吸光系數(shù)，c為溶液的濃度，L為液層厚度。

朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外光；不僅適用于均勻、無散射的溶液，而且也適用于均勻、無散射的固體和氣體。它是各類分光光度法進行定量分析的理論依據(jù)。

朗伯-比爾定律的提出，使分光光度分析法得到了快速發(fā)展。特別是以分子吸收光譜為基礎的紫外-可見分光光度法，因其具有靈敏度高、準確度高、操作簡便、測定快速、應用范圍廣等特點，在食品，醫(yī)學，環(huán)境，能源，材料，地質等領域得到廣泛的應用并發(fā)揮了重要的作用。近年來隨著各種新型顯色劑的出現(xiàn)和發(fā)展，特別是各種聯(lián)用技術的應用，使得分光光度法在藥物分析中的應用更加廣泛。新試劑、新方法的發(fā)現(xiàn)和使用使得分光光度法在藥物分析中的可靠性可媲美色譜法，但其簡單的操作步驟、低廉的設備價格和易普及的特點卻是色譜法無法比擬的，所以分光光度法現(xiàn)已成為應用極為普遍的分析方法之一，是一種相當重要的常規(guī)分析手段。

2 分光光度法在藥物分析中的應用

作為一種重要的常規(guī)分析手段，分光光度法廣泛應用于各個領域。而其較高的精密度和靈敏性、較小的測量誤差，使得其在藥物分析領域也得到普遍應用，且吸收峰比較平緩、簡單，故在藥物分析中主要用于定量分析。特別是近幾年，各種新試劑新技術的發(fā)展應用，更是拓寬了分光光度法的應用范圍。

2.1 利用藥物本身基團吸收的直接分光光度法

有些藥物分子本身結構中具有能吸收紫外光的基團，選擇合適的溶劑作吸收光譜，如果溶劑和其他包括賦形劑在內的共存組分在λmax處無吸收或吸收很小，則對該藥物可利用λmax直接測定。例如，測定溫泉水中硒的含量，以鄰苯二胺為顯色劑，333 nm波長測定，硒質量濃度在0.05～0.40 μg/mL范圍內呈良好線性關系，回歸方程為Y=1.598x+0.099 5，回收率為98.5%～101.6%[1]。又如橄欖油中葉綠素銅的測定，對特征波長653 nm進行校正測量，校正曲線y=0.032x+0.024，對同一橄欖油回收率為81%～97%，檢出限為0.62 mg/kg，成功進行了葉綠素銅的含量測定，大大降低了測定成本[2]。其他還如，W135群腦膜炎奈瑟菌在450 nm處菌體吸光度受培養(yǎng)基影響小，測量準確度高，可用標準曲線法測定W135群腦膜炎奈瑟菌含量[3]。抗氧化劑2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚在278 nm處有最大吸收，可用于測定聚四氫呋喃中抗氧化劑含量的測定[4]。用乙醇溶解的傘形花內酯在323 nm有最大吸收峰，可用于瑞香狼毒涂搽劑中傘形花內酯的含量測定[5]。

就目前的發(fā)展來看，直接分光光度法測定占比日漸減少，原因是藥物中的共存組分對主成分的測定多會產生較大影響，因此新技術和分光光度法的聯(lián)用是目前發(fā)展很快也應用較多的分析方法。

2.2 基于絡合反應的分光光度法

一些藥物分子在合適的溶劑中可以和某些金屬離子發(fā)生絡合，因此對這類藥物可以用絡合反應的分光光度法進行測定。例如，測定藥物中維生素B1含量時，在NaOH堿性介質中，維生素B1能將K3[Fe(CN)6]還原為K4[Fe(CN)6]，由于Fe(Ⅲ)與K4[Fe(CN)6]反應能生成可溶性普魯士藍，其吸光度數(shù)值可測得維生素B1的含量[6]。又如，鹽酸異丙腎上腺素的測定，利用在pH 為3.0時，鹽酸異丙腎上腺素可使Fe(Ⅲ)還原為Fe(Ⅱ)，反應生成的Fe(Ⅱ)能和K3[Fe(CN)6]發(fā)生絡合反應生成可溶性普魯士藍，鹽酸異丙腎上腺素在0.03～5.00 μg/mL濃度范圍內與吸光度呈現(xiàn)良好線性關系[7]。安乃近能與Fe3+發(fā)生氧化還原反應，F(xiàn)e3+能與顯色劑二安替吡啉甲烷反應顯酒紅色，因而可用分光光度計在451 nm處測定安乃近的含量[8]；在酸性介質中，氧氟沙星、諾氟沙星與Fe(Ⅲ)形成的黃色配合物最大吸收波長為436 nm，氧氟沙星和諾氟沙星的濃度分別在2.24～192 mg/L和8.0～248 mg/L范圍內與體系的吸光度符合朗伯-比爾定律，可用于氧氟沙星和諾氟沙星含量的測定[9]。

與直接分光光度法相比，這種方法可排除干擾，使吸收波長發(fā)生紅移，能直接用于藥物成分的分析。

2.3 基于顯色反應的分光光度法

一些藥物和某些顯色劑能發(fā)生顯色反應生成有色締合物質，這個性質用來測定此類藥物可以避免其它雜質的干擾，是一種選擇性好、干擾小的分光光度分析法。例如，格拉司瓊的測定，在弱堿性條件下，格拉司瓊與氯酚紅發(fā)生褪色反應后生成的新物質具有兩個明顯的負吸收峰592 nm和544 nm，格拉司瓊在0～3.1 mg/L范圍內服從比爾定律，方法可用于鹽酸格拉司瓊藥物中格拉司瓊的測定，結果滿意[10]。又如，異煙肼的測定，選擇水合紅菲繞啉二磺酸鈉作為異煙肼還原Fe3+產物Fe2+的顯色劑，建立了可見分光光度法測定異煙肼的新方法，可用于異煙肼片劑和尿樣中異煙肼含量的測定[11]。再如，在弱酸性條件下，F(xiàn)e(Ⅲ)被鹽酸氯丙嗪定量還原生成Fe(Ⅱ)，F(xiàn)e(Ⅱ)在堿性條件下可與紫尿酸反應生成不穩(wěn)定的藍色配陰離子，該配陰離子與鹽酸氯丙嗪形成最大吸收波長為635 nm的性質穩(wěn)定的藍色離子締合物，鹽酸氯丙嗪的質量濃度在0.5～10.0 mg/L之間時，與體系的吸光度呈良好的線性關系，可用于片劑中鹽酸氯丙嗪含量的測定[12]。硝普鈉分光光度法測定卡托普利時，兩者作用可形成一種淡黃色產物，最大吸收波長為397 nm，卡托普利濃度在1.3～3.3 mg/L范圍內有良好的線性關系[13]。

這類方法雖操作略顯繁瑣，但如顯色劑選擇恰當，測定的選擇性強，干擾少，故在分光光度法中仍很常用。

3 結語

綜上所述，分光光度法現(xiàn)已成為一種常用的藥物分析方法，它準確度高、靈敏性較好、操作簡單、設備低廉易普及，在科學研究和生產實踐過程中作用非凡、意義重大。近年來，隨著新試劑和新技術的發(fā)現(xiàn)，如金屬離子增敏、膠束增敏、化學計量學、流動注射技術、毛細管電泳等，使得分光光度法的選擇性更好、靈敏度和準確度更高。隨著電路技術的發(fā)展，分光元器件的不斷更新，計算機和微處理器等新技術的應用，使得分光光度計的性能更加穩(wěn)定和靈敏，且向更加智能化、自動化的方向發(fā)展。

現(xiàn)代社會科學技術發(fā)展迅速，計算機技術應用廣泛，新型的試劑和方法相繼出現(xiàn)，分光光度法與其他技術的聯(lián)用已成為發(fā)展的方向，也有了聯(lián)用的可能，現(xiàn)在分光光度法已廣泛用于藥物的研制和分析，這將會大大拓寬分光光度法的發(fā)展方向，給分光光度法以新的生命力。