吳丹亞，潘潔

(寧波市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，浙江 寧波 315012)

氯蟲(chóng)苯甲酰胺是從鄰氨基苯甲二酰胺類化合物中篩選出來(lái)的具有新型結(jié)構(gòu)的廣譜型殺蟲(chóng)劑[1]，近年在生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。吡蟲(chóng)啉、多菌靈、除蟲(chóng)脲與滅幼脲也是在糧食、蔬菜與果樹(shù)生產(chǎn)上普遍使用的低毒性農(nóng)藥。農(nóng)藥使用帶來(lái)的農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留問(wèn)題一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。GB 26763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對(duì)不同食品基體中的這5種農(nóng)藥的殘留量均設(shè)定了限量標(biāo)準(zhǔn)。除氯蟲(chóng)苯甲酰胺外，其他4種農(nóng)藥的殘留測(cè)定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中都有涉及，但液相色譜法都是針對(duì)單個(gè)農(nóng)藥的測(cè)定，尚無(wú)同時(shí)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。目前對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺的測(cè)定和多農(nóng)藥殘留測(cè)定，大都采用液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法[2-5]。本文結(jié)合已有的方法，利用現(xiàn)有的試驗(yàn)條件，建立了一種乙腈提取、氨基小柱固體萃取、液相色譜-紫外檢測(cè)器檢測(cè)蔬菜中這5種農(nóng)藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

供試蔬菜樣品為大白菜與番茄；供試藥劑吡蟲(chóng)啉、多菌靈、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、除蟲(chóng)脲與滅幼脲均為標(biāo)準(zhǔn)品，濃度均為100 μg·mL-1(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所)；甲醇、乙腈(默克，HPLC級(jí))，氯化鈉(國(guó)藥，分析純)，二氯甲烷(國(guó)藥，分析純)，試驗(yàn)用水為屈臣氏純凈水。

1.1.2 儀器

Dionex U3000液相色譜儀(熱電公司，配紫外檢測(cè)器)，Dionex Acclaim 120 C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；氮吹儀(Organomation E-EVAP 112)，數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-6，國(guó)華)，高速分散均質(zhì)機(jī)(IKA T18)，離心機(jī)(SIGMA 4-16)，Agela Cleanert NH2小柱(500 mg/6 mL)。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

提取。在25.0 g蔬菜樣品(大白菜、番茄)中加入50 mL乙腈，高速勻漿2 min后，加入7～8 g氯化鈉，繼續(xù)高速勻漿2 min，3 000轉(zhuǎn)·min-1離心5 min。吸取上清液10 mL，放入50 mL燒杯中，于70 ℃水浴鍋上蒸發(fā)至近干，加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)，蓋上鋁箔，待凈化。

凈化。將NH2柱用4.0 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)混合液充分活化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)吸附層表面時(shí)，立即加入上述待凈化溶液，用5 mL具塞刻度試管收集洗脫液，用2 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)洗燒杯后過(guò)柱，并重復(fù)1次。將具塞刻度試管置于氮吹儀上，水浴40 ℃，氮吹蒸發(fā)至近干，用甲醇準(zhǔn)確定容至2.5 mL。旋渦混勻，過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.2.2 色譜條件優(yōu)化

柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。針對(duì)波長(zhǎng)、流動(dòng)相及流速等方面進(jìn)行優(yōu)化，以200～400 nm范圍內(nèi)的波長(zhǎng)掃描結(jié)果確定檢測(cè)波長(zhǎng)；選擇甲醇+水、甲醇+乙腈+水2種流動(dòng)相，進(jìn)行洗脫，根據(jù)色譜結(jié)果來(lái)確定最佳色譜條件。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確吸取0.8 mL吡蟲(chóng)啉、多菌靈、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、除蟲(chóng)脲、滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10 mL，配成8 μg·mL-1的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確吸取50、100、150、200、250 μL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別定容至10 mL，配成0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。按最佳色譜條件進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 波長(zhǎng)選擇

對(duì)5種農(nóng)藥在200～300 nm進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明，吡蟲(chóng)啉最大吸收波長(zhǎng)為270 nm，多菌靈在286 nm附近有較大吸收，除蟲(chóng)脲與滅幼脲在254 nm處有較大吸收，氯蟲(chóng)苯甲酰胺在210～300 nm無(wú)明顯吸收峰，且隨著波長(zhǎng)的增加吸收減弱(圖1)。鑒于254 nm干擾相對(duì)較大，而在270 nm處5種農(nóng)藥都有較大的吸收，因而選擇270 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 5種農(nóng)藥紫外光譜掃描曲線

2.2 流動(dòng)相選擇

首先考慮常用的甲醇+水系統(tǒng)，但試驗(yàn)結(jié)果表明，甲醇+水系統(tǒng)在峰型、分離度上不是十分理想，當(dāng)加入乙腈之后，采用梯度洗脫，充分利用乙腈與甲醇在分離選擇性上的差異，明顯改善了峰型、提高了分離度，達(dá)到比較理想的分離效果。

2.3 流速選擇

流速大雖能縮短分析時(shí)間，但會(huì)影響分離效果；流速過(guò)小則會(huì)使分析時(shí)間變長(zhǎng)并影響峰型；因而從分析時(shí)間、分離情況與峰型等方面綜合考慮，1 mL·min-1的流速能達(dá)到較滿意的結(jié)果。由此確定最佳的色譜條件：柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，流速為1 mL·min-1，流動(dòng)相為水+甲醇+乙腈，采用梯度洗脫，具體見(jiàn)表1。保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖2，供試大白菜與番茄的色譜圖見(jiàn)圖3～5。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

圖2 5種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液色譜(0.2 μg·mL-1)

圖3 大白菜樣品色譜

圖4 番茄樣品色譜圖1

圖5 番茄樣品色譜圖2

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍及最低檢出限

在最佳色譜條件下，對(duì)系列濃度的混合工作液進(jìn)行測(cè)定，確定其回歸方程與相關(guān)系數(shù)。從表2可知，5種農(nóng)藥在40～200 μg·L-1范圍內(nèi)，線性良好，相關(guān)系數(shù)都大于0.999，符合農(nóng)殘分析要求[6]。計(jì)算40 μg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液中各農(nóng)藥的的信噪比，以其3倍信噪比來(lái)確定各農(nóng)藥的最低檢出限。

表2 5種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 回收率與精密度

對(duì)大白菜與番茄樣品進(jìn)行回收率試驗(yàn)。在蔬菜樣品中分別添加2個(gè)濃度水平的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法進(jìn)行樣品處理與測(cè)定，每處理6個(gè)平行。

對(duì)大白菜樣品，當(dāng)添加量為0.05 mg·kg-1時(shí)，吡蟲(chóng)啉、多菌靈、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、除蟲(chóng)脲與滅幼脲的平均回收率分別為100.8%、108.6%、82.5%、109.8%、91.6%；當(dāng)大白菜中添加量為0.2 mg·kg-1時(shí)，吡蟲(chóng)啉、多菌靈、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、除蟲(chóng)脲與滅幼脲的平均回收率分別為104.1%、104.8%、98.2%、105.7%、103.5%。對(duì)番茄樣品，當(dāng)添加量為0.05 mg·kg-1時(shí)，吡蟲(chóng)啉、多菌靈、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、除蟲(chóng)脲與滅幼脲的平均回收率分別為74.3%、108.4%、94.5%、90.6%、98.2%；在番茄中添加0.2 mg·kg-1時(shí)，吡蟲(chóng)啉、多菌靈、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、除蟲(chóng)脲與滅幼脲的平均回收率分別為90.4%、88.1%、101.7%、101.3%、102.9%。(具體見(jiàn)表3)。大白菜與番茄回收率試驗(yàn)中，回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差符合農(nóng)藥殘留分析要求。

表3 大白菜和番茄中5種農(nóng)藥的回收率和變異系數(shù)

3 小結(jié)

采用乙腈提取、氯化鈉鹽析、NH2小柱凈化，建立了蔬菜中氯蟲(chóng)苯甲酰胺等5種農(nóng)藥的殘留液相色譜檢測(cè)方法，并在大白菜與番茄上進(jìn)行了驗(yàn)證，其中大白菜的加標(biāo)平均回收率為82.5%～109.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%～12.4%，番茄的加標(biāo)平均回收率為74.3%～108.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%～12.2%，其結(jié)果符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)分析要求。