王麗麗，朱詩(shī)君，金樹(shù)權(quán)

(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315040)

甜瓜根腐病是由真菌半知菌亞門(mén)瓜類腐皮鐮孢菌[1]侵染植株而引起的土傳病害，是甜瓜生產(chǎn)上的常見(jiàn)病害；西瓜枯萎病是由真菌鐮孢屬引起的土傳病害，在各地發(fā)生均較為嚴(yán)重，在重茬地發(fā)病率為30%以上，嚴(yán)重地塊可達(dá)到80%以上，甚至造成絕產(chǎn)[2]，是西瓜生產(chǎn)中危害最為嚴(yán)重的病害之一。甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌均可長(zhǎng)期在土壤中存活，因此，防治十分困難。

利用1種或多種微生物來(lái)抑制病原菌生命活力和繁殖能力的方法稱之為生物防治，其中利用拮抗菌株防治土傳病害是生物防治的重要研究方向，也是農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的主要防治措施之一。路曉萌等[3]從甜瓜根際土壤中篩選得到2株根腐病拮抗菌F22和T5b，這兩株菌株對(duì)瓜類腐皮鐮孢菌均有較好的拮抗效果；岳菊等[4]篩選得到的枯草芽孢桿菌對(duì)真菌鐮孢屬菌絲生長(zhǎng)的抑制作用較為明顯，且對(duì)西瓜枯萎病的田間防控效果較好；葛慈斌等[5]篩選出的枯草芽孢桿菌對(duì)真菌鐮孢屬的抑制作用很明顯，室內(nèi)抑制效果能達(dá)到80.6%；孫立軍等[6]從中藥植物金銀花的組織中分離到1株具有廣譜抗菌活性的多粘芽孢桿菌，對(duì)真菌鐮孢屬具有很強(qiáng)的抑制作用，對(duì)田間防治西瓜枯萎病有一定的效果。

本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室之前篩選分離到的1株具有拮抗作用的芽孢桿菌菌株15進(jìn)行深入研究，研究其對(duì)其他土傳病害(甜瓜根腐病、西瓜枯萎病)的室內(nèi)和田間防控效果，為菌株15的更廣泛應(yīng)用提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 供試菌株和培養(yǎng)基

菌株15為實(shí)驗(yàn)室前期從黃瓜枯萎病發(fā)病嚴(yán)重地區(qū)的健康土壤中分離到的1株芽胞桿菌，甜瓜根腐病病原菌和西瓜枯萎病病原菌來(lái)自寧波市農(nóng)科院蔬菜研究所。

PDA培養(yǎng)基。20%馬鈴薯浸出液1 000 mL (200 g馬鈴薯煮沸騰15 min，定容至1 000 mL)、蔗糖20 g、瓊脂20 g，121 ℃下滅菌20 min。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g，自來(lái)水1 000 mL，pH值為7.2～7.4，121 ℃滅菌20 min。

1.2 菌株15對(duì)甜瓜根腐病病原菌和西瓜枯萎病病原菌的室內(nèi)拮抗效果

將甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌活化，然后用打孔器打取直徑6 mm的菌苔置于平板中央，于28 ℃下培養(yǎng)2 d，將菌株15菌落點(diǎn)接于病原菌菌片周圍，以單獨(dú)接種病原菌菌苔的平板作為對(duì)照，于28 ℃恒溫培養(yǎng)3 d，觀察病原菌生長(zhǎng)情況及有無(wú)抑菌圈出現(xiàn)。挑取拮抗效果好的菌株進(jìn)行純化，將純化后的菌株連續(xù)多次進(jìn)行平板對(duì)峙試驗(yàn)，觀察其抑菌效果。

1.3 菌株15對(duì)甜瓜根腐病的田間防控效果

田間試驗(yàn)在寧波市鄞州區(qū)寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院東錢湖基地內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)材料為菌株15發(fā)酵液，試驗(yàn)設(shè)置：1.0×106(T1)、1.0×107(T2)、1.0×108(T3)、1.0×109(T4)mL-14個(gè)濃度梯度，于甜瓜移栽后50 d開(kāi)始施用菌株15的發(fā)酵液，每隔7 d施用1次，共計(jì)3次。每株甜瓜澆灌10 mL，每處理3次重復(fù)，以施用等量清水為對(duì)照。

病情調(diào)查。甜瓜根腐病病情指數(shù)考查甜瓜根腐病。分為5個(gè)級(jí)別：0級(jí)，全株無(wú)病，外部無(wú)癥狀；1級(jí)，全株葉片總數(shù)的1/4以下葉片發(fā)病，或莖內(nèi)維管束1/4以下變褐色；2級(jí)，全株葉片總數(shù)的1/4～1/2葉片發(fā)病，或莖內(nèi)維管束1/4～1/2變褐色；3級(jí)，全株葉片總數(shù)的1/2以上葉片發(fā)病，或莖內(nèi)維管束3/4以上變褐色；4級(jí)，整株因病枯死。計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

1.4 菌株15對(duì)西瓜枯萎病的田間防控效果

田間試驗(yàn)在寧波市鄞州區(qū)寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院東錢湖基地內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)材料為菌株15發(fā)酵液，試驗(yàn)設(shè)置：1.0×106(T1)、1.0×107(T2)、1.0×108(T3)、1.0×109(T4)mL-14個(gè)濃度梯度，于西瓜出苗后10 d開(kāi)始施用拮抗菌株的發(fā)酵液，每隔7 d施用1次，共計(jì)3次。每株西瓜苗澆灌10 mL，每處理重復(fù)3次，以施用等量清水為對(duì)照。

病情調(diào)查。西瓜枯萎病發(fā)病程度分為5個(gè)級(jí)別：0級(jí)，植株正常生長(zhǎng)；1級(jí)，葉片或莖蔓萎焉。萎焉面積由下而上占全株的1/4或不到1/4；2級(jí)，葉片或莖蔓萎焉，萎焉面積由下而上占全株的1/2，莖蔓上有樹(shù)脂狀琥珀色黏液；3級(jí)，葉片或莖蔓萎焉，萎焉面積由下而上占全株的3/4，莖蔓上有樹(shù)脂狀琥珀色黏液；4級(jí)，全株萎焉死亡。計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株15對(duì)甜瓜根腐病和西瓜枯萎病的室內(nèi)拮抗效果

由圖1可知，菌株15對(duì)甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌均具有一定的拮抗性，在平板上有一定的拮抗圈。

圖1 菌株15的室內(nèi)拮抗效果

2.2 菌株15對(duì)甜瓜根腐病的生物防效

由表1可知，隨著菌株15發(fā)酵液濃度的增加，對(duì)甜瓜根腐病的防效增高，隨著灌根次數(shù)的增多，其防效也越好。灌根3次后，T4的防效最好，但與T2、T3無(wú)顯著差異，顯著高于T1。因此，推薦濃度為T(mén)2～T4，其3次灌菌后的防效為32.3%～41.2%。

表1 菌株15發(fā)酵液對(duì)甜瓜根腐病的田間防效

2.3 菌株15對(duì)西瓜枯萎病的生物防效

由表2可知，隨著菌株15發(fā)酵液濃度的增加，菌株15對(duì)西瓜枯萎病的防效增高，隨著灌根次數(shù)的增多，其防效也越高。灌根3次后，T4處理的防效最好，與T3無(wú)顯著差異，與T1、T2差異顯著。因此，推薦菌株15發(fā)酵液濃度為T(mén)3～T4，其3次灌菌后的防治效果為35.8%～42.3%。

表2 菌株15發(fā)酵液對(duì)西瓜枯萎病的田間防效

3 小結(jié)與討論

土傳病害是發(fā)生在植株根部或莖部且以土壤為媒介進(jìn)行傳播病害的統(tǒng)稱[7]，一般包括根腐病、枯萎病、猝倒病、立枯病、疫病、黃萎病等病害種類。土傳病害的病原菌的生活史一部分或者大部分在土壤中完成，在條件適宜時(shí)病原菌萌發(fā)，并且侵染植株根部或莖部導(dǎo)致植株發(fā)生病害[8]。近年來(lái)由于化肥的大量施用，不但造成土壤肥力嚴(yán)重下降和化肥的超量，還導(dǎo)致土壤微生物區(qū)系紊亂，使得農(nóng)作物土傳病害逐年加重，這給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展[9]。

化學(xué)藥劑在防治植株土傳病害上發(fā)揮著重要作用，但化學(xué)藥劑存在很多弊端。首先，化學(xué)藥劑大量應(yīng)用引起藥物殘留，導(dǎo)致環(huán)境污染；其次，化學(xué)藥劑大量使用還會(huì)導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生抗藥性，使得防治工作更加困難[10-12]。利用拮抗細(xì)菌防治植株土傳病害具有成本低、環(huán)境友好和無(wú)藥物殘留等特點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景[13-15]。

本試驗(yàn)通過(guò)菌株15對(duì)甜瓜根腐病、西瓜枯萎病的室內(nèi)和田間防控效果研究表明，菌株15室內(nèi)能拮抗甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌，田間對(duì)這兩種病害也有一定的防控效果，且灌菌次數(shù)越多，防治效果也越好，最高防效分別可達(dá)41.2%和42.3%。菌株15對(duì)根腐病和枯萎病的生防機(jī)理有待進(jìn)一步研究。