梁 磊，楊 波，吳園園，孫 莉

（中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第九八〇醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北石家莊 050082）

子宮內(nèi)膜癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，全世界2018 年估計有38 萬例新病例，9 萬例死亡病例［1］。子宮內(nèi)膜癌的5 年相對存活率約為82%，但在過去的幾十年中，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率和死亡率都有所增加，晚期子宮內(nèi)膜癌仍缺乏有效的治療方法［2-3］。微小RNA（microRNA，miRNA，miR）是小的非編碼RNA 分子，大約為22 個核苷酸，通過與相應(yīng)mRNA 靶標(biāo)的3′-非翻譯區(qū)（3′-untranslated region，3′UTR）結(jié)合，導(dǎo)致mRNA降解和翻譯抑制，從而對基因調(diào)節(jié)起重要的作用。miRNA 參與增殖、轉(zhuǎn)移、凋亡等多種生物學(xué)過程。先前的研究發(fā)現(xiàn)，差異表達(dá)的miRNA 如miR-135a［4］、miR-320a、miR-340-5p［5］和miR-27a-5p［6］可能與子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展有關(guān)。研究表明，miR-556-3p在食管癌組織中上調(diào)表達(dá)，過表達(dá)miR-556-3p 促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖和侵襲［7］。SASH1（SAM and SH3 domain-containing 1）在宮頸癌［8］和胃癌［9］組織中的表達(dá)下調(diào)，可作為宮頸癌和胃癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。miR-128 通過靶向下調(diào)SASH1 的表達(dá)促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞增殖，抑制了細(xì)胞凋亡［10］。但miR-556-3p和SASH1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及其對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞活力、遷移和侵襲的影響，且二者是否存在靶向關(guān)系目前知之甚少。因此，本研究考察miR-556-3p 對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞活力、遷移和侵襲的影響，以及對SASH1 的靶向調(diào)控，以期為子宮內(nèi)膜癌靶向治療提供參考。

材料和方法

1 臨床組織標(biāo)本

2015 年4 月～2017 年12 月在本院收集子宮內(nèi)膜癌和癌旁組織35 例。所有子宮內(nèi)膜癌樣品均從進(jìn)行子宮切除術(shù)的患者中收集，其中，子宮內(nèi)膜癌患者經(jīng)病理學(xué)確診，且術(shù)前未接受過放、化療，術(shù)前3 個月內(nèi)未進(jìn)行過激素治療。此項(xiàng)研究獲得所有參與者的知情同意，醫(yī)院倫理委員會予以批準(zhǔn)通過。每例樣本離體后，保存于液氮中，用于RT-qPCR分析。

2 細(xì)胞與主要試劑

子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞購自ATCC。DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）均購自Gibco；Lipofectamine 2000 和Trizol 試劑均購自Invit?rogen；MTT 和二甲基亞砜（dimethylsulfoxide，DMSO）均購自Sigma-Aldrich；cDNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Thermo Fisher Scientific）；RIPA 裂解緩沖液、兔抗SASH1 抗體、兔抗細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）抗體、兔抗p21 抗體、兔抗基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）抗體、兔抗基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）抗體和辣根過氧化物酶偶聯(lián)的II 抗均購自Abcam；增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑購自Pierce；Dual-Luciferase Reporter As?say System購自Promega。

3 方法

3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、分組與轉(zhuǎn)染 Ishikawa 細(xì)胞在DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基含有10% FBS、1×105U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素。將子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞在37 ℃的含5%CO2的潮濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。選取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞分為anti-miR-556-3p 組（轉(zhuǎn)染anti-miR-556-3p）、anti-miR-NC 組（轉(zhuǎn)染陰性對照anti-miR-NC）、pcDNA-SASH1 組（轉(zhuǎn)染pcDNA-SASH1）、pcDNA 組（轉(zhuǎn)染陰性對照pcDNA 3.1）、miR-556-3p 組（轉(zhuǎn)染miR-556-3p）、miR-NC 組（轉(zhuǎn)染陰性對照miR-NC）、anti-miR-556-3p+si-NC 組（共轉(zhuǎn)染anti-miR-556-3p 和陰性對照si-NC）和antimiR-556-3p+si-SASH1 組（共轉(zhuǎn)染anti-miR-556-3p 和si-SASH1）。轉(zhuǎn)染時，使用胰蛋白酶消化并計數(shù)細(xì)胞。將Ishikawa 細(xì)胞以每孔2×105接種到6 孔板中，培養(yǎng)24 h。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%時，根據(jù)制造商的說明，使用Lipofectamine 2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染。Ishikawa細(xì)胞在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中于37℃、5% CO2環(huán)境中生長6 h，然后在新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)以進(jìn)行進(jìn)一步的分析。anti-miR-556-3p、miR-556-3p、si-SASH1 和pcDNASASH1 及各自陰性對照anti-miR-NC、miR-NC、si-NC和pcDNA 3.1均獲自RiboBio。

3.2 RT-qPCR 檢測子宮內(nèi)膜癌組織、癌旁組織和Ishikawa 細(xì)胞中miR-556-3p 和SASH1 mRNA 的 表達(dá) 使用TRIzol 試劑提取子宮內(nèi)膜癌組織、癌旁組織或轉(zhuǎn)染后Ishikawa 細(xì)胞的總RNA；使用cDNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒，根據(jù)制造商的說明，將總RNA（1 μg）合成互補(bǔ)的cDNA 模板；使用RT-qPCR 測定miR-556-3p和SASH1 mRNA 的表達(dá)水平。U6 和GAPDH 用作內(nèi)參照。miR-556-3p 的正向引物序列為5′-GGGGTG?TAAACATCCTCGACTG-3′，反向引物序列為5′-ATTGCGTGTCGTGGAGTCG-3′；U6的正向引物序列為5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′，反向引物序列為5′-CGCTTCAGAATTTGCGTGTCAT-3′；SASH1 的正向引物序列為5′-CGGGAAAGCGT?CAAGTCGGA-3′，反向引物序列為5′-ATCTCCTTTCTTGAGCTTGAG-3′；GAPDH 的正向引物序列為5′-GTCAACGGATTTGGTCTGTATT-3′，反向引物序列為5′-AGTCTTCTGGGTGGCAGT?GAT-3′。

3.3 MTT 法檢測Ishikawa 細(xì)胞的活力 將Ishikawa細(xì)胞的濃度調(diào)至1×108/L，并在96 孔板中培養(yǎng)24 h。按照細(xì)胞分組進(jìn)行不同處理。24、48 和72 h 后，將20 μL MTT 試劑（5 g/L）添加到每個孔中，然后孵育2 h。用移液管棄去上清液，加入100 μL DMSO 并搖動15 min。用酶標(biāo)儀測量490 nm處的吸光度（A）。

3.4 Transwell小室法檢測Ishikawa細(xì)胞的遷移和侵襲能力 將Matrigel 與無血清DMEM 培養(yǎng)基按1∶5的比例混勻，包被上腔室用于侵襲分析（Transwell 遷移分析時，上腔室未用Matrigel 包被）。將轉(zhuǎn)染的Ishikawa細(xì)胞重懸于無血清的DMEM培養(yǎng)基中，并以每孔3×104細(xì)胞的密度加入到Transwell 上腔室中。下腔室加入500 μL 補(bǔ)充有10% FBS 的DMEM 培養(yǎng)基作為化學(xué)引誘劑。溫育24 h 后，除去未侵襲/遷移的細(xì)胞，并對侵襲/遷移的細(xì)胞染色，并在顯微鏡下計數(shù)。

3.5 Western blot 檢測SASH1、cyclin D1、p21、MMP-2 和MMP-9 的蛋白表達(dá) 使用RIPA 裂解緩沖液從轉(zhuǎn)染的Ishikawa細(xì)胞中提取總蛋白。30 μg蛋白進(jìn)行10% SDS-PAGE，并在120 V 下分離；然后將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上，并使用含5%脫脂奶粉的Tris-HCl-Tween 緩沖鹽溶液（Tris buffered saline with Tween，TBST）在室溫下封閉1 h；不同的Ⅰ抗（抗SASH1、cyclin D1、p21、MMP-2 和MMP-9 抗體，稀釋度均為1∶1 000）于4℃與膜孵育過夜；將膜用TBST溶液洗滌3 次，然后將膜與II 抗（稀釋度為1∶5 000）在室溫下孵育1 h，然后用TBST 溶液洗滌3 次；在增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑中對蛋白進(jìn)行可視化。GAPDH被用內(nèi)參照，測定SASH1、cyclin D1、p21、MMP-2 和MMP-9蛋白的表達(dá)水平。

3.6 StarBase 預(yù)測和雙螢光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)分析miR-556-3p 和SASH1 的靶向關(guān)系 使用StarBase（http：//starbase.sysu.edu.cn/）在線數(shù)據(jù)庫檢測miR-556-3p 的潛在靶標(biāo)，發(fā) 現(xiàn)miR-556-3p 與SASH1 的3′UTR 存在部分互補(bǔ)配對的序列，并由RiboBio 合成。分別通過PCR擴(kuò)增含有miR-556-3p假定結(jié)合位點(diǎn)的野生型（wild-type，WT）和突變型（mutant，MUT）SASH1 3′ UTR 片段，將擴(kuò)增的片段插入到pmirGLO 雙螢光素酶表達(dá)載體中，以構(gòu)建WT-SASH1和MUT-SASH1螢光素酶報告基因載體。將Ishikawa細(xì)胞以每孔5×104的濃度接種到24孔板中過夜；按照制造商的方案，使用Lipofectamine 2000 將細(xì)胞與WT-SASH1 或MUT-SASH1 和miR-NC 或miR-556-3p共轉(zhuǎn)染；48 h 后，使用Dual-Luciferase Reporter Assay System測定螢光素酶活性。

4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性。

結(jié) 果

1 miR-556-3p 和SASH1 在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

RT-qPCR 和Western blot 檢測結(jié)果顯示，與癌旁組織比較，子宮內(nèi)膜癌組織中miR-556-3p 表達(dá)量顯著增加，SASH1的mRNA 和蛋白表達(dá)量顯著減少（P＜0.05），見圖1。

2 抑制miR-556-3p 表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞活力、遷移和侵襲的影響

如圖2 所示，與anti-miR-NC 組比較，anti-miR-556-3p 組子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞的miR-556-3p 表達(dá)量顯著減少，48 h和72 h的細(xì)胞活力顯著減弱，遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少，cyclin D1、MMP-2和MMP-9 蛋白水平顯著降低，p21 蛋白水平顯著升高（P＜0.05）。

3 SASH1 過表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞活力、遷移和侵襲的影響

如圖3 所示，與pcDNA 組比較，pcDNA-SASH1組子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞中SASH1 蛋白表達(dá)量顯著增加，48 h和72 h的細(xì)胞活力顯著減弱，遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少，cyclin D1、MMP-2 和MMP-9 蛋白水平顯著降低，p21 蛋白水平顯著升高（P＜0.05）。

Figure 1.Expression of miR-556-3p and SASH1 in endometrial cancer tissues.A：the expression of miR-556-3p in endometrial can?cer tissues；B：the mRNA expression of SASH1 in endometrial cancer tissues；C：the protein expression of SASH1 in endo?metrial cancer tissues（N：normal；T：tumor）.Mean±SD. n=35.*P＜0.05 vs normal tissues.圖1 miR-556-3p和SASH1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

4 miR-556-3p靶向調(diào)控SASH1的表達(dá)

StarBase 預(yù)測結(jié)果顯示，SASH1 的3′UTR 部分核苷酸序列可與miR-556-3p 形成互補(bǔ)配對，見圖4A。雙螢光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，與miRNC 組比較，miR-556-3p 組轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-SASH1 的細(xì)胞螢光素酶活性顯著降低（P＜0.05），而轉(zhuǎn)染MUT-SASH1的細(xì)胞螢光素酶活性無顯著變化（P＞0.05），見圖4B。Western blot 檢測結(jié)果顯示，與miR-NC 組比較，miR-556-3p組細(xì)胞中SASH1蛋白的表達(dá)量顯著減少（P＜0.05）；與anti-miR-NC 組比較，anti-miR-556-3p組細(xì)胞中SASH1蛋白的表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。

5 敲減SASH1表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制miR-556-3p表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞活力、遷移和侵襲的作用

如圖5 所示，與anti-miR-NC 組比較，anti-miR-556-3p 組子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞的SASH1 蛋白表達(dá)量顯著增加，24 h、48 h 和72 h 的細(xì)胞活力顯著減弱，遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少，cyclin D1、MMP-2 和MMP-9 蛋白水平顯著降低，p21 蛋白水平顯著升高（P＜0.05）；與anti-miR-556-3p+si-NC 組比較，anti-miR-556-3p+si-SASH1 組細(xì)胞中SASH1 蛋白水平顯著降低，24 h、48 h、72 h 的細(xì)胞活力顯著增強(qiáng)，遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著增多，cyclin D1、MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)量顯著增加，p21 蛋白表達(dá)量顯著減少（P＜0.05）。

討 論

由于發(fā)生率高，子宮內(nèi)膜癌的臨床治療已引起越來越多的關(guān)注［11］。現(xiàn)階段，在治療該疾病方面已經(jīng)取得突破，大多數(shù)患者在手術(shù)、放療和化療后獲得了可喜的預(yù)后。然而，由于不及時或不適當(dāng)?shù)闹委?，某些患者也可能發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響了患者的預(yù)后［12］。因此，確定子宮內(nèi)膜癌增殖和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子機(jī)制將有助于為患者制定更好的治療策略。癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲是一個多步驟、多因素的生物學(xué)過程。越來越多的證據(jù)表明，miRNA 表達(dá)在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，miRNA 通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡和血管生成等影響多種腫瘤的病理演進(jìn)過程，包括子宮內(nèi)膜癌［13-15］。本研究鑒定了子宮內(nèi)膜癌中miR-556-3p水平及其促進(jìn)細(xì)胞活力、遷移和侵襲作用，此外，還將SASH1（子宮內(nèi)膜癌的一種可能的腫瘤抑制因子）確定為miR-556-3p 的直接功能靶標(biāo)，這一發(fā)現(xiàn)將為子宮內(nèi)膜癌患者治療方法的改進(jìn)提供新的依據(jù)。

Figure 2.The effect of miR-556-3p expression knock-down on the viability，migration and invasion of endometrial cancer Ishikawa cells.A：the change of miR-556-3p expression level after transfection with anti-miR-556-3p；B：the change of cell viabili?ty after transfection with anti-miR-556-3p；C：the changes of migration and invasion abilities after transfection with antimiR-556-3p（scale bar=200 μm）；D：the changes of cyclin D1，p21，MMP-2 and MMP-9 protein expression after transfec?tion with anti-miR-556-3p.Mean±SD. n=9.*P＜0.05 vs anti-miR-NC group.圖2 敲減miR-556-3p表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞活力、遷移和侵襲的影響

在本研究中，RT-qPCR 檢測結(jié)果顯示，與癌旁組織相比，miR-556-3p 在子宮內(nèi)膜癌組織中顯著上調(diào)，表明其參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程。已有一些研究報道了miR-556-3p 在腫瘤中的功能和意義。例如，miR-556-3p 是人類食管癌［7］和膀胱癌的促癌基因，在膀胱癌組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，過表達(dá)miR-556-3p 促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和集落形成［16］。然而，關(guān)于miR-556-3p 在子宮內(nèi)膜癌中的功能或分子機(jī)制了解甚少。本研究的功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抑制miR-556-3p 表達(dá)顯著抑制子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞的活力、遷移、侵襲及cyclin D1、MMP-2和MMP-9 蛋白表達(dá)，顯著提高p21 蛋白水平。這表明miR-556-3p 在子宮內(nèi)膜癌中充當(dāng)致癌因子，抑制miR-556-3p 具有抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞活力、遷移和侵襲的功能，與前人研究一致。

SASH1基因包括22 個外顯子和21 個內(nèi)含子，位于染色體位點(diǎn)6q24.3，長度為279 746 個堿基對。SASH1 是信號銜接蛋白SLY 家族的成員，編碼包含SAM 和SH3 結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，是蛋白與蛋白相互作用所必需的，并介導(dǎo)信號復(fù)合物的形成［17］。在數(shù)種類型的腫瘤中，SASH1 被鑒定為一種有效的腫瘤抑制劑，如宮頸癌［8］、胃癌［9］和食管鱗狀細(xì)胞癌［17］。SASH1 在肝癌細(xì)胞中低表達(dá)，過表達(dá)SASH1 可以抑制肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲［18］。這些研究表明，SASH1 在許多癌癥中起著抑癌作用。本研究中，子宮內(nèi)膜癌組織中SASH1的mRNA 和蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，SASH1 過表達(dá)后，子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細(xì)胞的活力、遷移、侵襲及cyclin D1、MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)顯著降低，p21 蛋白水平則顯著升高，提示SASH1在子宮內(nèi)膜癌中同樣扮演著抑癌基因的角色，發(fā)揮一定的抗腫瘤作用，與前述報道［17-18］相同。

Figure 3.The effect of SASH1 over-expression on the viability，migration and invasion of endometrial cancer Ishikawa cells.A：the protein expression levels of SASH1，cyclin D1，p21，MMP-2 and MMP-9 after transfection with pcDNA-SASH1；B：the change of cell viability after transfection with pcDNA-SASH1；C：the changes of cell migration and invasion abilities after transfection with pcDNA-SASH1（scale bar=200 μm）.Mean±SD. n=9.*P＜0.05 vs pcDNA group.圖3 SASH1過表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞活力、遷移和侵襲的影響

miRNA 通過調(diào)節(jié)特定靶標(biāo)的表達(dá)，在腫瘤的發(fā)展和進(jìn)程中發(fā)揮抑癌或致癌作用［19］。資料顯示，宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的SASH1 受hsa-miR-21 調(diào)控［19］；miR-17 通過靶向骨肉瘤細(xì)胞中的SASH1，促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移，并抑制細(xì)胞凋亡［20］。已有證據(jù)表明，miR-556-3p 可以靶向DAB2IP 調(diào)控食管癌［7］和膀胱癌［16］的惡性進(jìn)展；PPP2R2A 是miR-556-5p 促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖的直接靶標(biāo)［21］。由于并未發(fā)現(xiàn)miRNA對其下游靶基因的表達(dá)調(diào)控有細(xì)胞特異性，猜想這些靶基因可能在不同類型的細(xì)胞中均發(fā)揮作用。本研究為了確定miR-556-3p在子宮內(nèi)膜癌中致癌作用的潛在靶標(biāo)，利用生物信息學(xué)預(yù)測和雙螢光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，SASH1是miR-556-3p 的下游靶基因。此外miR-556-3p 的上調(diào)或下調(diào)可降低或升高SASH1 的表達(dá)水平；抑制miR-556-3p表達(dá)對Ishikawa 細(xì)胞活力、遷移和侵襲的抑制作用可被干擾SASH1表達(dá)所逆轉(zhuǎn)。這些結(jié)果說明抑制miR-556-3p 表達(dá)通過下調(diào)靶基因SASH1的表達(dá)水平而發(fā)揮抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞活力、遷移和侵襲的作用。

總之，miR-556-3p在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)上調(diào)，抑制miR-556-3p 通過靶向SASH1抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的活力、侵襲和遷移。這為鑒定子宮內(nèi)膜癌新的診斷和治療方法的進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)。

Figure 4.miR-556-3p targeted SASH1 and regulated its expression.A：the 3′UTR of SASH1 contained a nucleotide sequence com?plementary to miR-556-3p；B：dual-luciferase reporter experiment；C：miR-556-3p regulated the protein expression of SASH1.Mean±SD. n=9.*P＜0.05 vs miR-NC group；#P＜0.05 vs anti-miR-NC group.圖4 miR-556-3p靶向調(diào)控SASH1的表達(dá)

Figure 5.Knock-down of SASH1 expression reversed the effect of miR-556-3p expression inhibition on the viability，migration and in?vasion of endometrial cancer Ishikawa cells.A：the protein levels of SASH1，cyclin D1，p21，MMP-2 and MMP-9 after transfection with anti-miR-556-3p and si-SASH1；B：the cell viability after transfection with anti-miR-556-3p and si-SASH1；C：the cell migration and invasion abilities after transfection with anti-miR-556-3p and si-SASH1（scale bar=200 μm）.Mean±SD. n=9.*P＜0.05 vs anti-miR-NC group；#P＜0.05 vs anti-miR-556-3p+si-NC group.圖5 敲減SASH1表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制miR-556-3p表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞活力、遷移和侵襲的作用