邱盼子 肖作奇 黃 濤 黃 懿 潘 濤 歐陽波

湖南省婦幼保健院藥學制劑部，湖南長沙 410008

時行感冒1 號方是湖南省中醫(yī)藥管理局針對新型冠狀病毒肺炎推出的中藥預防處方，引起了廣泛關注和使用。該方由黃芪、桂枝、白芍、蒼術、防風、葛根、干姜、甘草、大棗等九味中藥組成，具有調(diào)和營衛(wèi)、益氣固表的功效[1-2]，適用于易感人群（素體體虛）及高危人群（包括一線醫(yī)務人員及有接觸史的人員）。方中桂枝所含的桂皮醛具有解肌發(fā)表、祛風散寒的作用[3-7]；白芍中的芍藥苷具有益陰斂營的作用[8-10]；防風所含的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷具有祛風除濕，升脾中清陽的作用[11-12]；葛根素能解肌退熱，升陽通經(jīng)[13-14]；干姜中的6-姜辣素可發(fā)散風寒[15]。這些化學成分可以作為時行感冒1 號方的質(zhì)量控制指標[16]。目前尚無該處方制劑的質(zhì)量控制標準，其臨床用藥的安全性與有效性無法得到保障，同時也限制了該處方制劑廣泛服務群眾。本研究采用高效液相色譜（HPLC）法對該處方中的6 種有效成分進行含量測定，旨在為該制劑的質(zhì)量控制提供方法依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent HP1260 型HPLC 儀，包括G13222 在線脫氣機、G1312B 二元泵、G1316A 柱溫箱、G1379B DAD檢測器、Agilent Open Lab 化學工作站（美國Agilent公司）；TDZ4 低速臺式離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）。

桂皮醛對照品（純度為99.6%，批號：110710-201821）、葛根素對照品（純度為95.4%，批號：110752-201816）、升麻素苷（純度為94.6%，批號：111522-201913）、6-姜辣素（純度為99.9%，批號：111833-201806）均購自中國食品藥品檢定研究院；5-O-甲基維斯阿米醇苷（純度≥98%，批號：Y15D9H77827）購自上海源葉生物科技有限公司；芍藥苷（純度為96.3%，批號：161108-160125）購自江蘇永健醫(yī)藥科技有限公司；甲醇、乙腈（色譜純，美國Tedia 公司）；磷酸、磷酸二氫鈉（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；所有中藥飲片均購自湖南省衡東縣中藥飲片廠。時行感冒1 號方合劑由湖南省婦幼保健院（以下簡稱“我院”）藥學制劑部生產(chǎn)提供；陰性對照樣品溶液（按處方藥味除去被測藥材，其余藥味按制劑生產(chǎn)工藝制得）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：乙腈（B）:0.1%磷酸水溶液（A），流速：1.0 mL/min，柱溫：35℃，檢測波長：203 nm，進樣量：10 μL。流動相梯度為：0～8 min：90%A；8～13 min：90%→85%A；13～30 min：85%→70%A；30～40 min：70%→50%A；40～45 min：50%A；45～47 min：50%→90%A；47～50 min：90%A。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制 分別取葛根素、芍藥苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、桂皮醛和6-姜辣素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含191.94、196.07、220.80、214.03、228.68 μg 和434.76 μg的溶液，即得。分別精密吸取葛根素1.5 mL、芍藥苷1.5 mL、升麻素苷0.8 mL、5-O-甲基維斯阿米醇苷0.5 mL、桂皮醛0.25 mL 和6-姜辣素0.05 mL 于5 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制得6 種成分的混合對照品溶液。見圖1A。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密吸取時行感冒1 號方合劑（批號：20200222）1 mL 置于5 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，過0.22 μm 有機系微孔濾膜，取續(xù)濾液進樣分析。見圖1B。

2.2.3 陰性對照樣品溶液的制備 分別按照處方比例制備不含葛根、白芍、防風、桂枝和干姜的陰性對照樣品溶液，按“2.2.2”項下方法制備，以“2.1”項下色譜條件進樣分析。見圖1C。表明陰性對照樣品溶液在各組分峰相應的保留時間處均無干擾。

2.3 線性關系考察

配制一系列濃度的標準曲線工作液，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，以峰面積A 為縱坐標，進樣濃度C（μg/mL）為橫坐標進行線性回歸，得到標準曲線方程。見表1。

2.4 精密度試驗

取“2.2.1”項下混合對照品溶液10 μL，重復進樣測定6 次，記錄峰面積，葛根素RSD 為1.28%，芍藥苷RSD 為1.05%，升麻素苷RSD 為1.41%，5-O-甲基維斯阿米醇苷皮醛RSD 為1.37%，6-姜辣素RSD 為1.29%。表明儀器精密度較好。

2.5 重復性試驗

精密吸取時行感冒1 號方合劑（批號：20200222）6 份，按“2.2.2”項下方法制得供試品溶液，以“2.1”項下色譜條件進樣，測定含量，葛根素、芍藥苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、桂皮醛和6-姜辣素的平均含量分別為722.35、269.36、63.53、45.08、23.28、25.34 μg/mL，RSD 分別為1.37%、1.95%、1.99%、1.89%、1.57%、1.64%。表明該方法重復性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h 以“2.1”項下色譜條件進樣，記錄峰面積，6 次測定葛根素、芍藥苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、桂皮醛、6-姜辣素的峰面積RSD 分別為1.27%、1.65%、1.30%、1.28%、1.07%、1.84%，表明供試品溶液可在室溫條件下穩(wěn)定保存24 h。

2.7 加樣回收率試驗

精密吸取上述已知含量的時行感冒1 號方合劑（批號：20200222）0.5 mL，置于5 mL 容量瓶中，平行制備6 份，每份各精密加入一定量的葛根素對照品溶液，按“2.2.2”項下方法處理，以“2.1”項下色譜條件進樣。精密吸取上述已知含量的時行感冒1 號方合劑（批號：20200222）1 mL，置于5 mL 容量瓶中，平行制備6 份，每份各精密加入一定量的芍藥苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、桂皮醛、6-姜辣素對照品溶液，按“2.2.2”項下方法處理，以“2.1”項下色譜條件進樣，結果見表2。

2.8 實際樣品測定

取5 批樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，以“2.1”項下色譜條件進樣分析，結果見表3。暫定葛根素含量應＞400 μg/mL，芍藥苷含量應＞200 μg/mL，升麻素苷含量應＞50 μg/mL，5-O-甲基維斯阿米醇苷含量應＞40 μg/mL，桂皮醛含量應＞15 μg/mL，6-姜辣素含量應＞20 μg/mL。

圖1 時行感冒1 號方合劑樣品、混合對照品溶液及陰性對照樣品溶液色譜圖

3 討論

時行感冒1 號方中共有九味藥配伍，全方補中寓散，散不傷正，補不留邪；溫中有清，溫不助熱，清不傷陽[17-21]。我院將該處方做成合劑，既減少了患者的服藥量，方便使用攜帶，又能避免繁瑣的煎藥流程。

本研究參照文獻報道研究方法[22-23]，對各組分的檢測波長進行考察，葛根素、芍藥苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、桂皮醛和6-姜辣素的最大吸收波長分別為250、220、230、230、290、203 nm，綜合比較了6 種組分在不同波長處的出峰情況，結果顯示6 種組分在203 nm 處均能得到較高的響應和良好的分離度，故本研究選用203 nm 作為檢測波長。由于甲醇在203 nm 處存在末端吸收，所以流動相有機相選擇乙腈。本研究還比較了水-乙腈、0.1%磷酸-乙腈、低濃度NaH2PO4-乙腈體系對各目標化合物的影響，結果發(fā)現(xiàn)選用0.1%磷酸-乙腈作流動相時，各組分峰響應值及分離效果均優(yōu)于其他流動相體系。

表1 線性關系考察結果

表2 6 種有效成分加樣回收率（n=6）

表3 實際樣品中6 種有效成分含量測定結果（μg/mL，n=3）

由實際樣品測定結果可知，5 批時行感冒1 號方中葛根素、芍藥苷、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、桂皮醛和6-姜辣素的含量均存在明顯的差異，可見不同批次中藥飲片的質(zhì)量存在差異，可能是由于采收季節(jié)等影響，致使其有效成分的含量不同。

本研究建立了HPLC 法同時測定時行感冒1 號方合劑中6 種有效成分的方法體系，該方法靈敏、準確，操作簡便，回收率高，可用于該制劑的質(zhì)量控制，以保障制劑的有效性與安全性。