胡蕓海 鄭琇山 張智光 陳志遠(yuǎn)

肺癌為最常見惡性腫瘤之一，多由肺炎、肺部結(jié)節(jié)等發(fā)展而來。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，部分肺癌患者經(jīng)過手術(shù)切除后具有很好的預(yù)后，但是5年生存率一直比較低[1-2]。主要在于肺癌患者的早期診斷率比較低，缺乏有效的診斷手段，很多患者在就診時(shí)已為中晚期[3-4]。細(xì)胞角蛋白19片段抗原(Cytokeratin 19 Fragment Antigen，Cyfra21-1)與肺癌的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，其主要分布于單層和復(fù)層上皮腫瘤細(xì)胞的胞漿內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡或死亡時(shí)，其以溶解片段的形式釋放入血清中，導(dǎo)致血清Cyfra21-1表達(dá)水平上升[5-6]。rs17561作為Cyfra21-1基因上重要的功能性位點(diǎn)，屬于非同義單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)，rs17561在多種炎癥和免疫性疾病中有著重要促進(jìn)作用，其原因可能與rs17561的主要等位基因上C突變?yōu)榇我任换駻，形成的A114S具有促進(jìn)Cyfra21-1釋放作用，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)，同時(shí)可能涉及人類疾病的易感性[7-8]。有研究發(fā)現(xiàn)，Cyfra21-1 rs17561基因多態(tài)性與惡性腫瘤有一定的相關(guān)性，可能是引起消化道腫瘤的一種遺傳因素[9-10]，但在肺癌中的報(bào)道比較少。本研究對(duì)Cyfra21-1 rs17561基因多態(tài)性與肺癌臨床特征的相關(guān)性進(jìn)行分析。具體報(bào)道如下。

資料與方法

一、研究對(duì)象

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)與所有患者的知情同意。選取本院2017年6月到2019年11月收治的肺癌患者78例作為肺癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡在30～70歲；③無嚴(yán)重的自身免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)疾?。粺o嚴(yán)重的心腦血管、肝腎等器官組織疾?。虎芘R床與病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②伴有遺傳代謝性疾??；③伴有其他基因疾病患者。同期選擇性別相同(按比例匹配)和年齡相近的健康人群78例作為健康組。

肺癌組中男性40例，女性38例；年齡最小35歲，最大68歲，平均年齡54.29±2.18歲。健康組中男性41例，女37例；年齡最小35歲，最大68歲，平均年齡54.29±2.18歲。兩組患者的性別、年齡等一般資料對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

二、血清Cyfra21-1基因多態(tài)性檢測

清晨空腹靜脈抽取兩組患者的外周靜脈血2 ml，提取基因組DNA(上海生工公司提供)，放置于-20℃低溫箱保存?zhèn)溆谩aqman探針由大連TAKARA公司合成與提供，上游引物序列：5′-ACATTGCTCAGGAAGCTAAAAGGTG-3′，下游引物序列：5′-TGACCTAGGCTTGATGATTCTAAA-3′。采用Bio-Rad CFX manager軟件對(duì)Cyfra21-1 rs17561基因的基因型PCR擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析。

三、臨床特征調(diào)查

調(diào)查所有肺癌患者的臨床資料，包括年齡、性別、腫瘤最大直徑、病理類型、臨床分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。

四、統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以%表示，組間比較采用卡方χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，關(guān)聯(lián)性分析采用直線相關(guān)分析與二分類變量Logistic回歸分析(選入變量與剔除變量P值分別為0.05和0.1)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

結(jié) 果

一、Cyfra21-1 rs17561基因多態(tài)性對(duì)比

Cyfra21-1 rs17561基因共有CC、CA、AA三種基因型，兩組人群的Cyfra21-1 rs17561基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律，因此研究對(duì)象具有群體代表性。兩組入選者的Cyfra21-1 rs17561基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，肺癌組的Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型比例顯著高于健康組(P<0.05)，肺癌組等位基因C頻率顯著高于健康組(P<0.05)(見表1)。

表1 兩組入選者的Cyfra21-1 rs17561基因型和等位基因分布比較[例(%)]

二、Cyfra21-1 rs17561基因型與肺癌臨床特征的關(guān)系

在肺癌組78例患者中，不同年齡、性別、病理類型患者的CC基因型構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，不同腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CC基因型構(gòu)成比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

表2 Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型與肺癌臨床特征的相關(guān)性[例(%)]

三、Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的影響因素分析

將2.2單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的項(xiàng)目作為自變量并進(jìn)行賦值,將Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型設(shè)為因變量,進(jìn)行Logistic多因素分析，結(jié)果顯示腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的主要因素(P<0.05)(見表3,4)。

表3 變量賦值表

表4 影響肺癌患者Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的多因素分析

討 論

當(dāng)前隨著人類基因組計(jì)劃的深入開展，基因多態(tài)性逐漸成為研究熱點(diǎn)，其研究重點(diǎn)主要集中在啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性對(duì)基因表達(dá)的影響，可能關(guān)系到疾病易感性[11-12]。編碼區(qū)域的非同義突變是指位于編碼區(qū)可造成翻譯后相應(yīng)氨基酸序列改變的單核苷酸突變，能改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能，被普遍認(rèn)為是增加疾病易感性的主要原因[13]。Cyfra21-1是細(xì)胞角蛋白家族成員之一，也是一個(gè)分子量為4kD的酸性細(xì)胞蛋白，由細(xì)胞角蛋白19片段的兩個(gè)單克隆抗體組成[14]。已有研究顯示肺癌患者的血清與胸水中CYFRA21-1濃度升高，其敏感性隨病情進(jìn)展而發(fā)生變化，與肺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。rs17561作為Cyfra21-1基因上的非同義突變，當(dāng)主要等位基因C改變?yōu)榇我任换駻時(shí)，則可產(chǎn)生變異體A114S，從而將rs17561基因114位置上的編碼氨基酸由丙氨酸(Ala)轉(zhuǎn)變?yōu)榻z氨酸(Ser)[15-16]。有研究顯示，Cyfra21-1 rs17561的次要等位基因能增強(qiáng)婦科腫瘤的易感性，還可增加子宮內(nèi)膜異位癥的易感性。也有研究顯示Cyfra21-1 rs17561的次要等位基因可促進(jìn)炎癥因子的釋放，增強(qiáng)免疫反應(yīng)，從而提高炎性相關(guān)疾病的易感性[17-18]。本研究顯示兩組入選者的Cyfra21-1 rs17561基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，肺癌組的Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型比例顯著高于健康組(P<0.05)，肺癌組等位基因C頻率顯著高于健康組(P<0.05)，表明肺癌患者的rs17561基因CC基因型比例比較高。

目前臨床上仍以病理活檢作為肺癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其為一種創(chuàng)傷性檢查，臨床上的應(yīng)用有一定的局限性，也比較難以反映患者的病理特征[19-20]。Cyfra21-1是肺鱗癌生存及復(fù)發(fā)的一種獨(dú)立預(yù)后因素，血清Cyfra21-1增高還可見于膽道癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌等腫瘤性疾病[21-23]。本研究顯示在肺癌組78例患者中，不同年齡、性別、病理類型患者的CC基因型比例對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，不同腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CC基因型比例對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Logistic回歸分析顯示腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的主要因素(P<0.05)。表明Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型與肺癌患者的病理特征顯著相關(guān)，其影響機(jī)制可能與主要等位基因在機(jī)體發(fā)揮的某種調(diào)控作用有關(guān)[24-25]。本研究也存在一定的不足，沒有發(fā)現(xiàn)CYFRA21-1基因多態(tài)性調(diào)控肺癌的具體調(diào)控機(jī)制，且納入病例數(shù)量較少，需要后續(xù)進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，Cyfra21-1 rs17561基因在肺癌患者中呈多態(tài)性分布，Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型與患者的臨床特征顯著相關(guān)。