夏云 陶珊珊 桂星星 瞿偉 涂劍宏

[摘要] 目的 探討GATA結合蛋白3（GATA-3）、雄激素受體（AR）在非三陰性與三陰性乳腺癌中的表達差異及兩者的表達與臨床病理特征的關系。 方法 收集本院2019年1月至2020年12月確診的200例乳腺癌患者，其中非三陰性（Non-TNBC）100例和三陰性（TNBC）100例，采用免疫組織化學法檢測患者GATA-3、AR的表達情況，對比兩者在非三陰性和三陰性乳腺癌中的表達差異及其與乳腺癌臨床病理特征的相關性。 結果 非三陰性和三陰性患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、脈管轉移等比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），與組織學分級呈相關性（P<0.05）。GATA-3在非三陰性的表達率為99%，在三陰性患者表達率為84%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。AR在非三陰性乳腺癌的表達率為97%，在三陰性表達率為36%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結論 GATA-3、AR在非三陰性乳腺癌患者的陽性表達率明顯高于三陰性患者，三陰性乳腺癌患者組織學分級更高。

[關鍵詞] GATA-3;AR;非三陰性乳腺癌;三陰性乳腺癌

[中圖分類號] R737.39? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）31-0012-04

[Abstract] Objective To explore the differences in the expression of GATA-binding protein 3 （GATA-3） and androgen receptor （AR） in non-triple-negative and triple-negative breast cancer， and to investigate the correlation between their expressions and clinicopathological features. Methods A total of 200 breast cancer patients， including 100 non-triple negative（Non-TNBC） and 100 triple negative（TNBC） cases， admitted to our hospital from January 2019 to December 2020 were collected， and the expressions of GATA-3 and AR in patients were determined by immunohistochemistry. The differences between their expressions in non-triple negative and triple negative breast and their correlation with clinicopathological features of breast cancer were compared. Results There was no significant differences in age， tumor size， lymph node metastasis， and vasculature metastasis in the non-triple negative and triple negative patients（P>0.05）.It showed the expressions were correlated to histological grade（P<0.05）. The expression rate of GATA-3 in non-triple-negative patients was 99% and the expression rate in triple-negative patients was 84%，with statistically significant difference（P<0.05）.The expression rate of AR in non-triple breast cancer was 97% and the expression rate in triple-negative patients was 36%， with statistically significant difference（P<0.05）. Conclusion The positive expression rates of GATA-3 and AR are significantly higher in non-triple-negative patients than those in triple-negative breast cancer patients， and the histological grade of triple-negative breast cancer patients is higher.

[Key words] GATA-3; AR; Non-triple-negative breast cancer; Triple-negative breast cancer

乳腺癌是一種高度異質(zhì)性腫瘤，在女性惡性腫瘤發(fā)病率中居第一位[1]。其中依據(jù)ER、PR、HER-2、Ki-67的表達，可被分為4種亞型：Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達型和三陰性乳腺癌，其中ER-、PR-、HER-2-即為三陰性乳腺癌。Burstein等[2]通過基因組分析，進一步將三陰性乳腺癌細分為腔型雄激素受體型（Luminal androgen receptor，LAR）、間質(zhì)型（Mesenchymal，MES）、基底樣免疫抑制型（Basal-like immune-suppressed，BLIS）、基底樣免疫激活型（Basal-like immune-actived，BLISBLIA）共4個亞型[2]?；诳勾萍に刂委熓侄蔚膹V泛使用，ER及PR在乳腺癌中的作用已被深入研究。但另外一個重要的類固醇激素核受體，即雄激素受體（AR）也在不同分子分型乳腺癌中有不同程度的表達，但其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中所起的作用及機制還未闡明。三陰性乳腺癌具有侵襲性強、無靶向藥物治療、對激素不敏感、預后差、發(fā)病年齡輕、復發(fā)、轉移率高、組織學分級高等特點，引起臨床與病理的高度關注與重視，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南昌市第三醫(yī)院2019年1月至2020年12月診斷的乳腺癌患者，兩位副主任醫(yī)師復閱切片確認診斷無誤。選取腫塊切除標本中具有代表性的蠟塊進行免疫組化檢測。乳腺癌分子分型采用免疫組織化學替代分型，選擇非三陰性乳腺癌（Non-TNBC）100例和三陰性乳腺癌（TNBC）100例，患者年齡23～89歲，所有患者臨床資料完整，包括患者的年齡、腫瘤大小、組織學分級、淋巴結轉移、脈管轉移等。所有患者入院前均未進行任何形式的治療。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑? SP免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司;鼠抗人GATA-3、兔抗人AR購自河南賽諾特生物技術有限公司;HER-2抗體購自羅氏診斷公司;ER、PR、Ki-67抗體購自福州邁新生物科技開發(fā)有限公司。HER-2熒光原位雜交試劑盒購自武漢康錄生物技術股份有限公司。

1.2.2 免疫組織化學檢測? 手術切除乳腺癌腫塊組織標本，立即固定于10%中性緩沖福爾馬林液內(nèi)6～48 h，石蠟包埋組織，4 μm切片，60℃烤箱中過夜。采用非生物素二步法，結果采用DAB染色顯色，實驗用陽性對照片做陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照。

1.2.3 熒光原位雜交（FISH）檢測? 如果HER-2免疫組化檢測結果為2+，則進一步加做FISH，探針購自湖北康錄生物技術股份有限公司。按說明書進行操作，根據(jù)HER-2基因有無擴增分別判為HER-2陽性或陰性，然后進行分子分型。

1.3 觀察指標

GATA-3陽性判讀標準：存在肯定的細胞核染色即為陽性;AR陽性判讀標準：細胞核出現(xiàn)染色陽性，大于10%癌細胞為陽性[3]。ER、PR的判讀標準依據(jù)2010年美國臨床腫瘤學會（ASCO）/美國病理醫(yī)師學院（CAP）發(fā)布的ER/PR免疫組織化學檢測指南，將1%作為ER/PR陽性的臨界值[4]。HER-2免疫組化判讀根據(jù)2019版檢測指南[5]，即0：無著色或≤10%的浸潤性癌細胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細胞膜染色;1+：>10%的浸潤癌細胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細胞膜染色;2+：分兩種情況，第一種為>10%的浸潤性癌細胞呈現(xiàn)弱-中等強度的完整的細胞膜染色;第二種為≤10%的浸潤性癌細胞呈現(xiàn)強而完整的細胞膜染色;3+：>10%浸潤性腫瘤細胞呈強、完整且均勻的細胞膜染色。0和1+都定義為染色陰性，3+定義為染色陽性，如HER-2免疫組化結果為2+，則加做熒光原位雜交（FISH）檢測，根據(jù)熒光原位雜交結果判斷為陽性或陰性入組。

1.4 統(tǒng)計學方法

本研究采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行處理。發(fā)病年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移、組織學分級、脈管轉移，GATA-3、AR蛋白表達率等組間差異采用χ2檢驗，當不滿足χ2檢驗條件時采用Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 臨床病理學資料

本研究所納入的患者均為女性，年齡23～89歲。在非三陰性乳腺癌組，組織學類型分別為浸潤性導管癌88例，浸潤性小葉癌6例，黏液癌3例，浸潤性實性乳頭狀癌1例，浸潤性微乳頭狀癌2例。在三陰性乳腺癌組，組織學類型分別為浸潤性導管癌82例，浸潤性小葉癌（多形性）2例，伴髓樣特征的浸潤性癌12例，富糖原透明細胞癌1例，伴大汗腺分化的浸潤性癌1例，化生性癌2例。

2.2 非三陰性和三陰性乳腺癌患者臨床病理特征比較

在100例非三陰性和100例三陰性乳腺癌患者中，兩組患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、脈管轉移比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。兩者之間三陰性乳腺癌組織學分級更高，兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

2.3 GATA-3、AR在非三陰性和三陰性表達情況

GATA-3在非三陰性患者的表達率為99%，在三陰性患者的表達率為84%，兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。AR在非三陰性患者的表達率為97%，在三陰性患者的表達率為36%，兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

乳腺癌是高度異質(zhì)性腫瘤，依據(jù)ER、PR、HER-2、Ki-67的表達可被分為4種亞型：Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達型和三陰性乳腺癌，其中ER、PR、HER-2均為陰性即三陰性乳腺癌。本研究選取100例非三陰性和100例三陰性乳腺癌患者臨床病理資料統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，非三陰和三陰性乳腺癌患者年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、脈管轉移比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），與周華平[6]報道不一致，該作者總結600例非三陰和三陰性乳腺癌患者臨床資料，得出非三陰性患者比三陰性患者腋窩淋巴結更容易轉移（52.9%），三陰性乳腺癌患者腫瘤直徑更大，結果差異可能是因為本研究樣本量更小導致。本研究中，三陰性乳腺癌患者在組織學分級更高，是因為三陰性乳腺癌患者很多為伴髓樣特征的浸潤性癌和組織學Ⅲ級的浸潤性導管癌患者，所以導致組織學分級更高。

轉錄因子GATA（1-6）在調(diào)控細胞增殖與分化、調(diào)控細胞運動中具有廣泛作用。GATA-3是乳腺上皮中表達最高的轉錄因子，在乳腺上皮細胞分化中具有關鍵作用，GATA-3敲除中雌激素受體α（ERα）陽性細胞顯著減少，是乳腺癌腫瘤分級、雌激素受體狀態(tài)和臨床預后的一個強有力的獨立預測因子。有結果表明，GATA3與雌激素受體信號通路之間存在廣泛聯(lián)系，因此GATA3陽性更常見于ER陽性乳腺癌，與本研究結果一致[7-8]。本研究中，GATA-3在非三陰性乳腺中表達為99%，在三陰性中表達為84%，兩者之間比較，差異有統(tǒng)計學意義，與文獻報道類似。

乳腺腫瘤細胞分化程度越低，GATA-3陽性表達率越低，說明GATA-3在乳腺癌分化調(diào)節(jié)中具有重要作用，在促進正常乳腺細胞生長、分化的同時，也促進乳腺癌細胞分化，與乳腺癌的發(fā)展有密切關系[9-10]。由于其在乳腺癌中的表達對腫瘤預后及預測均有重要作用，本科已將GATA-3作為乳腺癌的常規(guī)診斷和預后判斷指標。

由于GATA-3表達是ERα陽性狀態(tài)的重要預測因子[11-12]，臨床工作中，GATA3陽性患者，如果ER陰性，需要重復試驗或找到染色陰性的原因以排除實驗失敗導致假陰性。

AR屬于核受體超家族中的類固醇激素受體，是信號通路組成的關鍵部分，在調(diào)節(jié)基因表達中起著至關重要的作用，是三陰性乳腺癌中可能唯一表達的核激素受體，能作為三陰性乳腺癌預后轉歸的一個預測因子。在本研究中，AR在非三陰性乳腺癌中表達率為97%，在三陰性乳腺癌中表達為36%，比孫向潔等[3]報道要高，與其他[13-14]報道相似。之所以研究報道數(shù)據(jù)有差異，認為可能是實驗室條件不盡相同，而且對AR、ER、PR等陽性判斷標準也不一致。本研究中AR采用10%，ER、PR采用1%作為陽性臨界值。

ER陽性乳腺癌中AR的陽性表達率遠高于ER陰性乳腺癌，提示AR在這兩類乳腺癌發(fā)生及進展中的機制不同，有研究顯示，在ER+AR+乳腺癌細胞中，AR結合配體被激活后，與結合配體的ER競爭性結合核內(nèi)雌激素相關的應答元件，抑制ER轉錄活性，導致細胞凋亡。相反，在ER-AR+細胞中，由轉錄因子FOXA1介導AR進入核內(nèi)，促進下游基因轉錄，導致細胞增殖。

三陰性乳腺癌患者沒有針對性治療方案，治療方式仍然以化療為主。尤其在年輕女性中發(fā)病率更高，而且容易早期轉移和化療耐受，目前仍缺乏較好的治療手段。但三陰性乳腺癌是一種異質(zhì)性很強的疾病，其中管腔雄激素受體亞型（LAR）高表達ARDNA及AR蛋白，對抗雄激素治療敏感，約為三陰性乳腺癌22%[15]。AR的檢測為這些患者提供了新的靶向治療的潛在機會。盡管目前還沒有關于AR靶向治療市場時間的相關研究，但綜合看起來，這些數(shù)據(jù)表明AR狀態(tài)可能對三陰性乳腺癌患者的治療和預后有重要作用，目前許多藥物性AR抑制劑已被應用在三陰性乳腺癌治療中，多項實驗證明其能夠有效抑制AR陽性的三陰性乳腺癌細胞增殖、減慢腫瘤生長速度，臨床實驗也證實其有效的臨床收益率和良好的藥物耐受性，能顯著提高患者生存期[16]。

血清雄激素水平增加與乳腺癌風險之間有顯著相關性，在參與乳腺癌的發(fā)生、進展中，雄激素除了能直接與雌激素協(xié)同作用來刺激乳腺癌細胞的生長和增殖;另外在ER、PR都呈陰性乳腺癌患者中，能間接地轉化為雌激素而發(fā)揮其生物學作用，特別是絕經(jīng)后女性乳腺癌發(fā)生、進展的高危因素。由于AR在各型乳腺癌中表達差異，以及提示可能為三陰性乳腺癌的潛在治療靶點，提倡每個乳腺癌患者都應該進行檢測，或至少對三陰性乳腺癌進行檢測。

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（收稿日期：2021-03-19）