亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        聚羥基脂肪酸酯/海藻酸鈉納米纖維的制備及其性能

        2021-01-05 02:28:22孫范忱
        紡織學(xué)報(bào) 2020年5期
        關(guān)鍵詞:細(xì)胞培養(yǎng)掃描電鏡毒性

        孫范忱, 郭 靜,2, 于 躍,2, 張 森,2

        (1. 大連工業(yè)大學(xué) 紡織與材料工程學(xué)院, 遼寧 大連 116034; 2. 遼寧省功能纖維及復(fù)合材料工程技術(shù)中心, 遼寧 大連 116034)

        人體創(chuàng)傷發(fā)生的頻率逐年增加[1-2],其中外周神經(jīng)損傷約占5%,神經(jīng)修復(fù)成為急需解決的重要問(wèn)題[3-4]。常用的神經(jīng)修復(fù)方法是自體移植,其受到來(lái)源、供區(qū)缺損和供需不匹配等限制,因此,人造神經(jīng)導(dǎo)管材料應(yīng)運(yùn)而生[5-6]。

        聚羥基脂肪酸酯(P(3HB-co-4HB))是通過(guò)微生物發(fā)酵獲得的可降解材料,其生物相容性、可塑性、韌性等性能較為突出,所以在農(nóng)業(yè)、包裝、生物學(xué)及組織工程領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[7-8],但由于P(3HB-co-4HB)表面缺乏活性功能基團(tuán),使細(xì)胞膜與其接觸時(shí)產(chǎn)生特異性相互作用,導(dǎo)致細(xì)胞在材料表面粘附、遷移、增殖受到一定限制。為解決這一問(wèn)題,劉琴等[9]通過(guò)制備同軸P(3HB-co-4HB)/聚乙烯醇復(fù)合支架來(lái)改善其生物相容性;Wang等[10]通過(guò)調(diào)解共混物中聚乳酸(PLA)的含量制得了具有高孔隙率、高吸水性的P(3HB-co-4HB)/PLA材料,并用于軟骨組織培養(yǎng)。

        海藻酸鈉是從海中提取的一種天然多糖類化合物,是β-D-甘露糖醛酸(M)和α-L-古洛糖醛酸(G)按(1→4)鏈連接而成。其生物相容性好,親水性優(yōu)良,有利于細(xì)胞的粘附、增殖和分化[11-12],但單一SA剛性大,耐水性差,很難靜電紡絲成形[13-14]。將P(3HB-co-4HB)和SA共混可在性能上實(shí)現(xiàn)取長(zhǎng)補(bǔ)短。然而P(3HB-co-4HB)為親油性,SA為親水性,在常規(guī)情況下很難共溶解,為此,本文以月桂基葡糖苷(APG)為乳化劑,成功將P(3HB-co-4HB)與SA復(fù)合,制備了P(3HB-co-4HB)/SA納米纖維,并對(duì)納米纖維的表面形貌、孔隙率、毒性、生物相容性等進(jìn)行表征。

        1 實(shí)驗(yàn)部分

        1.1 試劑與儀器

        原料與試劑:海藻酸鈉(SA),相對(duì)分子質(zhì)量為15 000,其中G片段與M片段比例為1.2∶1,青島海之林生物有限公司; P(3HB-co-4HB),數(shù)均分子量約為7×105,其中4HB的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%,山東意可曼科技有限公司;三氯甲烷,分析純,西隴化工股份有限公司; 烷基糖苷(APG),山東優(yōu)索化工科技有限公司;RSC96血旺細(xì)胞,廣州吉妮歐生物科技有限公司;Cell Counting Kit-8(CCK8),合肥新恩源生物技術(shù)有限公司;乙醇(75%),鐵嶺康泰消毒劑有限公司;戊二醛,分析純,北京索萊寶科技有限公司;叔丁醇,分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;磷酸緩沖鹽溶液(PBS),北京索萊寶科技有限公司。

        儀器:Spectrum-One B型紅外光譜儀,美國(guó)PE公司;DSC200F3型差示掃描量熱儀,德國(guó)耐馳儀器制造有限公司;JSM-7800F型掃描電子顯微鏡(SEM),日本電子(JEOL);TL-Pro-BM型高壓靜電紡絲機(jī),深圳市通力微納科技有限公司;VD-850型桌上式潔凈工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備有限公司;酶標(biāo)儀,上海沛歐分析儀器有限公司。

        1.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

        本文實(shí)驗(yàn)機(jī)制和實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖1所示。首先將SA溶于去離子水中配制不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%)的SA水溶液。然后將含有一定比例的APG和三氯甲烷加入到SA水溶液中,使APG起到乳化作用,降低共混溶液的表面張力,隨后將共混溶液放置在超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)上以400 W的功率均質(zhì)15 min,然后加入一定質(zhì)量的P(3HB-co-4HB),放置于恒溫?fù)u床里連續(xù)振蕩12 h,待P(3HB-co-4HB)完全溶解后,再次放在超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)上以400 W的功率均質(zhì)15 min,使SA穩(wěn)定分布于P(3HB-co-4HB)溶液中得到紡絲溶液。最后通過(guò)靜電紡絲機(jī)進(jìn)行靜電紡絲,得到P(3HB-co-4HB)/SA納米纖維膜。紡絲條件:環(huán)境溫度為(35±1)℃,相對(duì)濕度為(20±5)%,靜電壓為20 kV,噴絲口距接收板距離為20 cm,流速為2.0 mL/h。

        圖1 實(shí)驗(yàn)機(jī)制和實(shí)驗(yàn)過(guò)程Fig.1 Experimental process and analysis of co-dissolution mechanism

        1.3 納米纖維膜化學(xué)結(jié)構(gòu)測(cè)試

        采用紅外光譜儀測(cè)試P(3HB-co-4HB)/SA納米纖維膜的化學(xué)結(jié)構(gòu)。將納米纖維粉末狀樣品用KBr壓片,掃描波數(shù)范圍為4 000~400 cm-1。

        1.4 納米纖維膜熱性能測(cè)試

        采用差示掃描量熱儀測(cè)試樣品的熱性能,測(cè)試溫度范圍為-40~40 ℃,升溫速率為10 ℃/min,氮?dú)鈿夥铡?/p>

        1.5 納米纖維膜表面形貌觀察

        首先對(duì)纖維膜進(jìn)行噴金處理,然后采用掃描電子顯微鏡觀察樣品的表面形貌。加速電壓為10 kV,放大倍數(shù)為200~2 000倍。

        1.6 納米纖維膜孔隙率測(cè)定

        將3 cm×3 cm尺寸的纖維膜浸潤(rùn)于去離子水中20 min,取出用濾紙吸去膜表面水分,稱取質(zhì)量記為m1;然后將膜置于真空烘箱烘干至質(zhì)量恒定,稱取質(zhì)量,記為m2。用下式計(jì)算孔隙率:

        式中:A為纖維膜表面積,cm2;Ld為膜厚,cm;ρ為去離子水的密度,取1 g/cm3。

        1.7 納米纖維膜的細(xì)胞毒性測(cè)試

        采用浸提液法對(duì)生物醫(yī)用材料進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)。將稀釋好的RSC 96血旺細(xì)胞種植在96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,置于37 ℃、5%的CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后,吸出舊的培養(yǎng)液,換入新的培養(yǎng)液,然后分別加入納米纖維膜的浸提液,不加纖維膜的為空白組,在相同條件下分別培養(yǎng)12~96 h。取出細(xì)胞培養(yǎng)板,在各孔中加110 uL的CCK8 培養(yǎng)基混合液,在細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置30 min 后用酶標(biāo)儀在450 nm 下測(cè)定各孔的吸光度,取平均值并通過(guò)與對(duì)照組比較來(lái)判斷細(xì)胞的毒性,計(jì)算方法 :細(xì)胞的相對(duì)增殖率P=實(shí)驗(yàn)組吸光度/對(duì)照組吸光度×100%。細(xì)胞毒性劃分標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞相對(duì)增殖度大于等于100%為0級(jí),75%~99%為1級(jí),50%~74%為2級(jí),25%~49%為3級(jí),1%~24%為4 級(jí),0為5 級(jí)。

        1.8 體外細(xì)胞培養(yǎng)

        為觀察細(xì)胞在材料上的粘附能力及形態(tài),所有材料用75%乙醇浸泡5 min進(jìn)行消毒,然后用無(wú)菌PBS清洗,每次5 min,重復(fù)3次;隨后將材料放入細(xì)胞培養(yǎng)板,每孔大約接種2×103個(gè)/mL的RSC96血旺細(xì)胞,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)72 h作為掃描電鏡觀察的標(biāo)本,待培養(yǎng)時(shí)間到達(dá)后,先吸出舊培養(yǎng)液,然后用PBS洗3次,再用4%戊二醛固定4 h,隨后進(jìn)行乙醇梯度脫水各10 min、50%叔丁醇和純叔丁醇各處理10 min,最后用凍干機(jī)冷凍干燥,噴金后用掃描電鏡觀察其表面形貌。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 化學(xué)結(jié)構(gòu)分析

        圖2 為SA、P(3HB-co-4HB)和P(3HB-co-4HB)/SA(SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%)纖維膜的紅外光譜圖。可以看出:SA在1 624和1 416 cm-1處存在明顯的吸收特征峰,為SA大分子六元環(huán)上COO-的不對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰和對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰,在3 435 cm-1處為O—H伸縮振動(dòng)峰[14];P(3HB-co-4HB)的酯基峰在1 726 cm-1處,羰基峰在1 340和1 186 cm-1處;P(3HB-co-4HB)/SA纖維膜的特征峰基本上是SA和P(3HB-co-4HB)吸收峰的加和,沒(méi)有明顯新峰出現(xiàn),說(shuō)明二者以共混為主,但觀察可發(fā)現(xiàn)纖維膜在3 435 cm-1處的羥基的吸收峰強(qiáng)度變大,峰變窄,這是由于SA中存在大量羥基、羧酸基,P(3HB-co-4HB)存在大量的酯基,APG也存在大量的羥基和醚基,三者之間易形成如圖3所示的氫鍵作用,正是這種氫鍵作用保證了溶液的均勻穩(wěn)定。

        圖2 SA、P(3HB-co-4HB) 和P(3HB-co-4HB)/SA的 紅外光譜圖Fig.2 Infrared spectrum of SA,P(3HB-co-4HB) and P(3HB-co-4HB)/SA composites

        圖3 氫鍵結(jié)構(gòu)示意圖Fig.3 Schematic diagram of hydrogen bonding

        2.2 相容性分析

        圖4示出P(3HB-co-4HB)和P(3HB-co-4HB)/SA (SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%)纖維膜的差示掃描量熱(DSC)曲線??梢钥闯觯琍(3HB-co-4HB)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為-12.09 ℃,P(3HB-co-4HB)/SA纖維膜出現(xiàn)2個(gè)玻璃化轉(zhuǎn)變溫度,分別為-12.09和-4.37 ℃。原因可能是:P(3HB-co-4HB)與SA為不相容體系,可借助乳化劑APG形成穩(wěn)定溶液,但在成形過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生微相分離,其中一相為P(3HB-co-4HB),對(duì)應(yīng)玻璃化轉(zhuǎn)變溫度-12.09 ℃;另一相為P(3HB-co-4HB)與SA的復(fù)合相,對(duì)應(yīng)玻璃化轉(zhuǎn)變溫度-4.37 ℃,產(chǎn)生復(fù)合相的原因是SA分子剛性較強(qiáng),其可發(fā)生相對(duì)分子質(zhì)量的伸展,但不能有效的形成鏈纏結(jié),導(dǎo)致空間位阻變大,玻璃化轉(zhuǎn)變溫度升高。由此可推斷,APG實(shí)現(xiàn)了P(3HB-co-4HB)與SA的部分相容。

        圖4 P(3HB-co-4HB)和P(3HB-co-4HB)/SA的DSC曲線Fig.4 DSC curves of P (3HB-co-4HB) and P(3HB-co-4HB)/ SA

        2.3 纖維形貌和孔隙率分析

        圖5示出P(3HB-co-4HB)/SA納米纖維膜的掃描電鏡照片。表1為其相對(duì)應(yīng)的直徑和孔隙率測(cè)試結(jié)果。由圖5和表1可知,在SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)小于或等于8%時(shí),P(3HB-co-4HB)/SA纖維的直徑隨著SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)的提高而增大,之后隨SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大有減小趨勢(shì),當(dāng)SA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%時(shí),纖維形態(tài)最好,纖維直徑分布比較均勻集中,沒(méi)有明顯的珠?,F(xiàn)象,纖維的平均直徑為500 nm。當(dāng)SA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于8%時(shí),纖維出現(xiàn)明顯的異質(zhì)化、斷絲和纏結(jié),這是由于SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)過(guò)高,體系黏度增大,分化作用減小、可紡性變差。由表1還可見(jiàn),纖維膜的孔隙率隨著SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化呈現(xiàn)先減小后增大趨勢(shì),在SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%時(shí)達(dá)到最大值89%,這是因?yàn)橹睆奖容^小的纖維具有大的比表面積,更易產(chǎn)生芯吸效應(yīng),從而吸附水分子,使孔隙率變大。但當(dāng)SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%時(shí),因?yàn)樾纬闪诉^(guò)多的珠粒,占據(jù)了較大的體積,所以導(dǎo)致纖維膜孔隙率有所下降。高的孔隙率有利于細(xì)胞的培養(yǎng),同時(shí)也可作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及新陳代謝的通道。

        圖5 不同SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)纖維膜的掃描電鏡照片(×5 000)Fig.5 SEM images of fiber membrane with different SA mass fractions(×5 000)

        表1 不同SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)纖維膜的直徑和孔隙率Tab.1 Average diameter and porosity of fiber membrane with different SA mass fractions

        2.4 細(xì)胞毒性分析

        表2示出纖維膜對(duì)神經(jīng)細(xì)胞增殖影響。

        表2 不同SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)纖維膜浸提液的吸光度值Tab.2 Optical density values of fiber membrane with different SA mass fractions

        由表2可以看出,P(3HB-co-4HB)納米纖維雖然無(wú)毒,但其浸提液的分級(jí)幾乎都為1級(jí),而P(3HB-co-4HB)/SA纖維膜浸提液的細(xì)胞相對(duì)增殖度均大于90%,為0級(jí)和少量的1級(jí),不具有細(xì)胞毒性??烧J(rèn)為P(3HB-co-4HB)/SA納米纖維具有良好的細(xì)胞相容性和生物安全性,能作為醫(yī)用材料。

        2.5 細(xì)胞體外培養(yǎng)形貌分析

        圖6為P(3HB-co-4HB)和添加不同SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)P(3HB-co-4HB)/SA纖維膜體外細(xì)胞培養(yǎng)掃描電鏡照片。對(duì)比可見(jiàn),加入SA的膜的細(xì)胞數(shù)量明顯增多,細(xì)胞伸出了較多的偽足,且呈現(xiàn)出扁平的形態(tài),緊密地貼附在材料表面。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因與P(3HB-co-4HB)/SA纖維膜中SA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)相關(guān),即SA的質(zhì)量分?jǐn)?shù)越高,材料的生物相容性相對(duì)越好,越有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)、粘附。

        圖6 不同SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)纖維膜的體外細(xì)胞培養(yǎng) 掃描電鏡照片(×500)Fig.6 SEM images of vitro cell culture of fiber membrane with different SA mass fractions(×500)

        3 結(jié) 論

        本文利用烷基糖苷(APG)成功地將聚羥基脂肪酸酯(P(3HB-co-4HB))和海藻酸鈉(SA)復(fù)合在一起,二者之間可形成穩(wěn)定的乳液。當(dāng)SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%時(shí),纖維平均直徑為500 nm,纖維表面致密光滑。與P(3HB-co-4HB)纖維膜相比,加入一定量SA的纖維膜的浸提液的分級(jí)均大于90%,毒性幾乎都為0級(jí),不具有細(xì)胞毒性且可促進(jìn)細(xì)胞增長(zhǎng)的作用,SA質(zhì)量分?jǐn)?shù)越高,越有利于細(xì)胞在P(3HB-co-4HB)/SA納米纖維表面的生長(zhǎng)、粘附,P(3HB-co-4HB)/SA復(fù)合纖維膜較P(3HB-co-4HB)納米纖維膜有更好的細(xì)胞相容性和生物安全性。

        猜你喜歡
        細(xì)胞培養(yǎng)掃描電鏡毒性
        動(dòng)物之最——毒性誰(shuí)最強(qiáng)
        酶解大豆蛋白的制備工藝研究及其在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用研究
        掃描電鏡能譜法分析紙張的不均勻性
        掃描電鏡在雙金屬層狀復(fù)合材料生產(chǎn)和研究中的應(yīng)用
        電線電纜(2017年4期)2017-07-25 07:49:48
        3種陰離子交換色譜固定相捕獲細(xì)胞培養(yǎng)上清液中紅細(xì)胞生成素的效果比較
        色譜(2015年6期)2015-12-26 01:57:32
        RGD肽段連接的近紅外量子點(diǎn)對(duì)小鼠的毒性作用
        基于PSO-GRG的背散射模式掃描電鏡的數(shù)字處理及應(yīng)用
        采用PCR和細(xì)胞培養(yǎng)方法比較流感樣病例不同標(biāo)本的流感病毒檢出觀察
        PM2.5中煤煙聚集物最具毒性
        吸入麻醉藥的作用和毒性分析
        成人精品免费av不卡在线观看| 成年免费视频黄网站zxgk| 国产999精品久久久久久| 蜜桃一区二区三区在线看| 日本美女性亚洲精品黄色| 国产白浆一区二区三区性色| 乱色熟女综合一区二区三区| 911香蕉视频| 冲田杏梨av天堂一区二区三区| 2020国产在视频线自在拍| av无码精品一区二区三区宅噜噜| 亚洲伊人久久大香线蕉综合图片 | 日韩av一区二区不卡| 2020无码专区人妻系列日韩| 青青草国产成人99久久| av天堂吧手机版在线观看| 91久久偷偷做嫩模影院| 无码国产福利av私拍| 97国产免费全部免费观看| 男女视频网站免费精品播放| 中文字日产幕码三区的做法大全| 亚洲乱码中文字幕综合| 免费黄色福利| 国产熟女自拍av网站| 人人摸人人搞人人透| 久久综合第一页无码| 台湾自拍偷区亚洲综合| 国产18禁黄网站免费观看| 天堂8中文在线最新版在线| 国产在线精品福利大全| av毛片亚洲高清一区二区| 国产精品99无码一区二区| 亚洲欧美成人a∨| 一区二区三区精彩视频在线观看| 少妇被猛烈进入到喷白浆| 牲欲强的熟妇农村老妇女| 亚洲AVAv电影AV天堂18禁| 青青草手机在线观看视频在线观看| 97在线观看视频| 动漫在线无码一区| 日韩av中文字幕波多野九色|