李曉博， 王愛華， 謝軒波， 孟 利， 張勝男， 單漢明， 普智飛

（1.杭州迪安醫(yī)學(xué)檢驗中心，浙江 杭州 310030；2.英維迪（杭州）檢測技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310030）

人體一般會在感染嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）3～5 d后產(chǎn)生特異性IgM抗體[1]，約14 d產(chǎn)生特異性IgG抗體[2]，IgG抗體滴度恢復(fù)期較急性期升高4倍及以上。我國國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》中規(guī)定，疑似患者血清SARS-CoV-2特異性IgM和IgG抗體陽性，血清SARS-CoV-2特異性IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性或恢復(fù)期較急性期升高4倍及以上，作為臨床確診標(biāo)準(zhǔn)[1]。據(jù)此，國內(nèi)一些廠商研發(fā)的基于不同原理的 SARS-CoV-2抗體檢測試劑盒開始在臨床應(yīng)用[3-4]。本研究擬通過對我國國家藥品監(jiān)督管理局應(yīng)急審批的4種試劑及獲得歐盟CE認(rèn)證但未獲我國國家藥品監(jiān)督管理局審批的2種試劑進(jìn)行比較，評價不同試劑檢測結(jié)果的差異。

1 材料和方法

1.1 樣本及試劑來源

隨機(jī)選取20份新型冠狀病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）患者恢復(fù)期血液樣本及20份無明顯黃疸、溶血、脂血的體檢人群血液樣本。收集截止到2020年4月底的通過我國國家藥品監(jiān)督管理局應(yīng)急審批的4種試劑及獲得歐盟CE認(rèn)證但未獲得我國國家藥品監(jiān)督管理局審批的2種試劑[生產(chǎn)廠商分別為廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司、南京諾唯贊醫(yī)療科技有限公司、廈門萬泰凱瑞生物技術(shù)有限公司、博奧賽斯（重慶）生物科技有限公司、邁克生物股份有限公司、深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司]，分別標(biāo)記為A、B、C、D、E、F，其中A、C試劑檢測的是SARS-CoV-2總抗體（不區(qū)分IgM和IgG抗體），其他試劑檢測的是IgM和IgG抗體；A、B試劑使用膠體金法，其他試劑均為化學(xué)發(fā)光法，在各自配套的檢測儀器上使用。

1.2 方法

在同一天內(nèi)分別采用6種試劑檢測20份COVID-19患者恢復(fù)期血液樣本及20份體檢者血液樣本，比較陽性檢出率及陰性符合率。選取4份SARS-CoV-2抗體陽性樣本，分別進(jìn)行梯度稀釋（1∶2、1∶4、1∶8和1∶16），分別使用4種化學(xué)發(fā)光法試劑檢測，評價不同試劑的靈敏度。

2 結(jié)果

2.1 6種試劑檢測20份COVID-19患者樣本的陽性檢出率

檢測SARS-CoV-2 IgM抗體的4種試劑的陽性率分別為D試劑85%（17/20）、F試劑65%（13/20）、E試劑35%（7/20）、B試劑10%（2/20）。檢測SARS-CoV-2 IgG抗體的4種試劑的陽性率分別為E試劑100%（20/20）、F試劑100%（20/20）、D試劑85%（17/20）、B試劑50%（10/20）。SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體聯(lián)合檢測（以任意1種抗體陽性或SARSCoV-2總抗體陽性為聯(lián)合檢測陽性）陽性率6種試劑分別為C試劑100%（20/20）、E試劑100%（20/20）、F試劑100%（20/20）、D試劑95%（19/20）、A試劑90%（18/20）、B試劑55%（11/20）。

2.2 6種試劑檢測20份體檢者樣本的陰性符合率

檢測SARS-CoV-2 IgM抗體的4種試劑中，除D試劑陰性率為95%外，B試劑、E試劑、F試劑陰性率均為100%。檢測SARS-CoV-2 IgG抗體的4種試劑陰性率均為100%。SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體聯(lián)合檢測（以2種抗體均為陰性或SARSCoV-2總抗體陰性為聯(lián)合檢測陰性），除D試劑陰性率為95%外，其他5種試劑陰性率均100%。

2.3 4種化學(xué)發(fā)光法試劑的靈敏度分析

采用4種化學(xué)發(fā)光法試劑檢測不同稀釋比例的4份SARS-CoV-2抗體陽性樣本，統(tǒng)計檢測結(jié)果仍為陽性的稀釋比例。檢測總抗體的C試劑對4份樣本的最高稀釋比例均為1∶16。檢測IgM和IgG抗體的D、E、F試劑對4份樣本的最高稀釋比例各不相同，具體稀釋比例見表1。

表1 4種化學(xué)發(fā)光法試劑的靈敏度分析

3 討論

國內(nèi)外的臨床研究表明，IgM抗體多在發(fā)病第7天后才有可能出現(xiàn)，30～60 d滴度達(dá)到峰值，60～180 d完全消失；IgG抗體也通常在發(fā)病第7天以后出現(xiàn)，60～120 d到達(dá)峰值，且高滴度可以保持到第180天，甚至更長時間[5-6]。徐萬洲等[4]的研究結(jié)果顯示，COVID-19患者SARSCoV-2核酸轉(zhuǎn)陰后，SARS-CoV-2 IgM抗體的陽性率為52.9%，SARS-CoV-2 IgG抗體的陽性率為88.2%，與SARS-CoV-2核酸轉(zhuǎn)陰后抗體的動態(tài)變化一致。因此，COVID-19患者恢復(fù)期血液樣本特異性IgG抗體理論上絕大部分應(yīng)能檢出陽性，特異性IgM抗體應(yīng)能檢出部分陽性。本研究結(jié)果顯示，6種試劑檢測SARS-CoV-2 IgG抗體的陽性率最高為100%，最低為50%，檢測SARSCoV-2 IgM抗體陽性率最高為85%，最低為10%，2種抗體聯(lián)合檢測陽性率最高為100%，最低為55%。SARS-CoV-2抗體陽性檢出率較低的試劑均采用膠體金法，化學(xué)發(fā)光法試劑陽性檢出率相對較高。同樣采用膠體金法的2種試劑，檢測總抗體的A試劑的陽性率為90%，而分別檢測IgG抗體和IgM抗體的B試劑對2種抗體聯(lián)合檢測的陽性率僅為55%。采用化學(xué)發(fā)光法試劑對2種抗體聯(lián)合檢測的陽性率均≥95%，但不同試劑對IgM抗體的檢測結(jié)果存在較大差異（D試劑與E試劑有10個檢測結(jié)果不一致）。

對20份體檢者樣本的檢測結(jié)果顯示，D試劑（化學(xué)發(fā)光法）檢測SARS-CoV-2 IgM抗體時出現(xiàn)了1例假陽性，該份樣本的S/CO值為1.04，試劑的Cut-off值為1。在張瑞等[7]對SARS-CoV-2特異抗體檢測“假陽性”原因分析及對策中，由于試劑盒Cut-off值的設(shè)置，有一些受各種因素影響而出現(xiàn)弱陽性的樣本會被判定為陽性，所以本研究中的這份樣本可判定為假陽性。由于在抗體檢測中假陽性問題無法完全避免，因此將SARS-CoV-2抗體檢測結(jié)果大規(guī)模用于復(fù)工或一般人群篩查是不合適的，建議作為SARS-CoV-2核酸檢測陰性的疑似患者的補(bǔ)充檢測指標(biāo)或在疑似患者的診斷中與核酸檢測協(xié)同使用[8]。

本研究結(jié)果還顯示，4種化學(xué)發(fā)光法試劑之間靈敏度差異較大。如4號樣本的IgM抗體，E試劑僅原倍可檢出陽性，而F試劑在1∶16的稀釋比例下仍為陽性。因此，臨床實驗室在選擇SARS-CoV-2抗體的檢測試劑時應(yīng)將靈敏度作為重點評價指標(biāo)。

由于SARS-CoV-2抗體檢測試劑的研發(fā)周期較短，且未經(jīng)過大規(guī)模臨床驗證，各種試劑的檢測性能參差不齊，這可能與試劑的檢測原理（間接法、捕獲法、雙抗原夾心法等）、免疫標(biāo)記物（吖啶酯、辣根過氧化物酶、膠體金等）、使用的重組抗原（針對刺突蛋白的受體結(jié)合域、核衣殼蛋白、S1蛋白）等不同有關(guān)。這也是試劑生產(chǎn)廠商改善試劑性能、提高試劑特異性的改進(jìn)方向。不同的檢測方法各有優(yōu)劣，膠體金法不需要專門儀器，操作簡便，但陽性率低于化學(xué)發(fā)光法，存在漏檢的風(fēng)險。如要將SARS-CoV-2抗體作為核酸檢測陰性情況下的COVID-19確診標(biāo)準(zhǔn)，需要進(jìn)行2次以上的動態(tài)檢測。如果檢測SARS-CoV-2的試劑不能區(qū)分IgM和IgG抗體，就難以通過特異性IgM抗體和IgG抗體模式的動態(tài)監(jiān)測進(jìn)行診斷，但總抗體和2種抗體聯(lián)合檢測的陽性率均高于單獨檢測IgM抗體和IgG抗體。

綜上所述，由于SARS-CoV-2抗體檢測具有樣本采集簡便、技術(shù)難度低等優(yōu)點，因此在COVID-19的臨床診斷及SARS-CoV-2無癥狀感染者的管理中發(fā)揮越來越重要的作用。但各種SARS-CoV-2抗體檢測試劑的檢測性能有一定差異，各實驗室在選擇SARS-CoV-2抗體檢測試劑時應(yīng)綜合考量所檢測的人群、檢測目的、實驗室能力等，選擇靈敏度高、假陽性低的試劑。本研究的不足之處在于比對樣本量較小，且僅進(jìn)行了不同試劑之間符合率和靈敏度的比較，未對COVID-19患者年齡、性別、患病時間等與抗體檢測結(jié)果的關(guān)系作進(jìn)一步分析，因此本研究結(jié)論尚存在一定的局限性。