李曉博， 王愛(ài)華， 謝軒波， 孟 利， 張勝男， 單漢明， 普智飛

（1.杭州迪安醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，浙江 杭州 310030；2.英維迪（杭州）檢測(cè)技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310030）

人體一般會(huì)在感染嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）3～5 d后產(chǎn)生特異性IgM抗體[1]，約14 d產(chǎn)生特異性IgG抗體[2]，IgG抗體滴度恢復(fù)期較急性期升高4倍及以上。我國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》中規(guī)定，疑似患者血清SARS-CoV-2特異性IgM和IgG抗體陽(yáng)性，血清SARS-CoV-2特異性IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性或恢復(fù)期較急性期升高4倍及以上，作為臨床確診標(biāo)準(zhǔn)[1]。據(jù)此，國(guó)內(nèi)一些廠商研發(fā)的基于不同原理的 SARS-CoV-2抗體檢測(cè)試劑盒開(kāi)始在臨床應(yīng)用[3-4]。本研究擬通過(guò)對(duì)我國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局應(yīng)急審批的4種試劑及獲得歐盟CE認(rèn)證但未獲我國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局審批的2種試劑進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)不同試劑檢測(cè)結(jié)果的差異。

1 材料和方法

1.1 樣本及試劑來(lái)源

隨機(jī)選取20份新型冠狀病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）患者恢復(fù)期血液樣本及20份無(wú)明顯黃疸、溶血、脂血的體檢人群血液樣本。收集截止到2020年4月底的通過(guò)我國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局應(yīng)急審批的4種試劑及獲得歐盟CE認(rèn)證但未獲得我國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局審批的2種試劑[生產(chǎn)廠商分別為廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司、南京諾唯贊醫(yī)療科技有限公司、廈門(mén)萬(wàn)泰凱瑞生物技術(shù)有限公司、博奧賽斯（重慶）生物科技有限公司、邁克生物股份有限公司、深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司]，分別標(biāo)記為A、B、C、D、E、F，其中A、C試劑檢測(cè)的是SARS-CoV-2總抗體（不區(qū)分IgM和IgG抗體），其他試劑檢測(cè)的是IgM和IgG抗體；A、B試劑使用膠體金法，其他試劑均為化學(xué)發(fā)光法，在各自配套的檢測(cè)儀器上使用。

1.2 方法

在同一天內(nèi)分別采用6種試劑檢測(cè)20份COVID-19患者恢復(fù)期血液樣本及20份體檢者血液樣本，比較陽(yáng)性檢出率及陰性符合率。選取4份SARS-CoV-2抗體陽(yáng)性樣本，分別進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)?∶2、1∶4、1∶8和1∶16），分別使用4種化學(xué)發(fā)光法試劑檢測(cè)，評(píng)價(jià)不同試劑的靈敏度。

2 結(jié)果

2.1 6種試劑檢測(cè)20份COVID-19患者樣本的陽(yáng)性檢出率

檢測(cè)SARS-CoV-2 IgM抗體的4種試劑的陽(yáng)性率分別為D試劑85%（17/20）、F試劑65%（13/20）、E試劑35%（7/20）、B試劑10%（2/20）。檢測(cè)SARS-CoV-2 IgG抗體的4種試劑的陽(yáng)性率分別為E試劑100%（20/20）、F試劑100%（20/20）、D試劑85%（17/20）、B試劑50%（10/20）。SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體聯(lián)合檢測(cè)（以任意1種抗體陽(yáng)性或SARSCoV-2總抗體陽(yáng)性為聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性）陽(yáng)性率6種試劑分別為C試劑100%（20/20）、E試劑100%（20/20）、F試劑100%（20/20）、D試劑95%（19/20）、A試劑90%（18/20）、B試劑55%（11/20）。

2.2 6種試劑檢測(cè)20份體檢者樣本的陰性符合率

檢測(cè)SARS-CoV-2 IgM抗體的4種試劑中，除D試劑陰性率為95%外，B試劑、E試劑、F試劑陰性率均為100%。檢測(cè)SARS-CoV-2 IgG抗體的4種試劑陰性率均為100%。SARS-CoV-2 IgM、IgG抗體聯(lián)合檢測(cè)（以2種抗體均為陰性或SARSCoV-2總抗體陰性為聯(lián)合檢測(cè)陰性），除D試劑陰性率為95%外，其他5種試劑陰性率均100%。

2.3 4種化學(xué)發(fā)光法試劑的靈敏度分析

采用4種化學(xué)發(fā)光法試劑檢測(cè)不同稀釋比例的4份SARS-CoV-2抗體陽(yáng)性樣本，統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果仍為陽(yáng)性的稀釋比例。檢測(cè)總抗體的C試劑對(duì)4份樣本的最高稀釋比例均為1∶16。檢測(cè)IgM和IgG抗體的D、E、F試劑對(duì)4份樣本的最高稀釋比例各不相同，具體稀釋比例見(jiàn)表1。

表1 4種化學(xué)發(fā)光法試劑的靈敏度分析

3 討論

國(guó)內(nèi)外的臨床研究表明，IgM抗體多在發(fā)病第7天后才有可能出現(xiàn)，30～60 d滴度達(dá)到峰值，60～180 d完全消失；IgG抗體也通常在發(fā)病第7天以后出現(xiàn)，60～120 d到達(dá)峰值，且高滴度可以保持到第180天，甚至更長(zhǎng)時(shí)間[5-6]。徐萬(wàn)洲等[4]的研究結(jié)果顯示，COVID-19患者SARSCoV-2核酸轉(zhuǎn)陰后，SARS-CoV-2 IgM抗體的陽(yáng)性率為52.9%，SARS-CoV-2 IgG抗體的陽(yáng)性率為88.2%，與SARS-CoV-2核酸轉(zhuǎn)陰后抗體的動(dòng)態(tài)變化一致。因此，COVID-19患者恢復(fù)期血液樣本特異性IgG抗體理論上絕大部分應(yīng)能檢出陽(yáng)性，特異性IgM抗體應(yīng)能檢出部分陽(yáng)性。本研究結(jié)果顯示，6種試劑檢測(cè)SARS-CoV-2 IgG抗體的陽(yáng)性率最高為100%，最低為50%，檢測(cè)SARSCoV-2 IgM抗體陽(yáng)性率最高為85%，最低為10%，2種抗體聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率最高為100%，最低為55%。SARS-CoV-2抗體陽(yáng)性檢出率較低的試劑均采用膠體金法，化學(xué)發(fā)光法試劑陽(yáng)性檢出率相對(duì)較高。同樣采用膠體金法的2種試劑，檢測(cè)總抗體的A試劑的陽(yáng)性率為90%，而分別檢測(cè)IgG抗體和IgM抗體的B試劑對(duì)2種抗體聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率僅為55%。采用化學(xué)發(fā)光法試劑對(duì)2種抗體聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率均≥95%，但不同試劑對(duì)IgM抗體的檢測(cè)結(jié)果存在較大差異（D試劑與E試劑有10個(gè)檢測(cè)結(jié)果不一致）。

對(duì)20份體檢者樣本的檢測(cè)結(jié)果顯示，D試劑（化學(xué)發(fā)光法）檢測(cè)SARS-CoV-2 IgM抗體時(shí)出現(xiàn)了1例假陽(yáng)性，該份樣本的S/CO值為1.04，試劑的Cut-off值為1。在張瑞等[7]對(duì)SARS-CoV-2特異抗體檢測(cè)“假陽(yáng)性”原因分析及對(duì)策中，由于試劑盒Cut-off值的設(shè)置，有一些受各種因素影響而出現(xiàn)弱陽(yáng)性的樣本會(huì)被判定為陽(yáng)性，所以本研究中的這份樣本可判定為假陽(yáng)性。由于在抗體檢測(cè)中假陽(yáng)性問(wèn)題無(wú)法完全避免，因此將SARS-CoV-2抗體檢測(cè)結(jié)果大規(guī)模用于復(fù)工或一般人群篩查是不合適的，建議作為SARS-CoV-2核酸檢測(cè)陰性的疑似患者的補(bǔ)充檢測(cè)指標(biāo)或在疑似患者的診斷中與核酸檢測(cè)協(xié)同使用[8]。

本研究結(jié)果還顯示，4種化學(xué)發(fā)光法試劑之間靈敏度差異較大。如4號(hào)樣本的IgM抗體，E試劑僅原倍可檢出陽(yáng)性，而F試劑在1∶16的稀釋比例下仍為陽(yáng)性。因此，臨床實(shí)驗(yàn)室在選擇SARS-CoV-2抗體的檢測(cè)試劑時(shí)應(yīng)將靈敏度作為重點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)。

由于SARS-CoV-2抗體檢測(cè)試劑的研發(fā)周期較短，且未經(jīng)過(guò)大規(guī)模臨床驗(yàn)證，各種試劑的檢測(cè)性能參差不齊，這可能與試劑的檢測(cè)原理（間接法、捕獲法、雙抗原夾心法等）、免疫標(biāo)記物（吖啶酯、辣根過(guò)氧化物酶、膠體金等）、使用的重組抗原（針對(duì)刺突蛋白的受體結(jié)合域、核衣殼蛋白、S1蛋白）等不同有關(guān)。這也是試劑生產(chǎn)廠商改善試劑性能、提高試劑特異性的改進(jìn)方向。不同的檢測(cè)方法各有優(yōu)劣，膠體金法不需要專(zhuān)門(mén)儀器，操作簡(jiǎn)便，但陽(yáng)性率低于化學(xué)發(fā)光法，存在漏檢的風(fēng)險(xiǎn)。如要將SARS-CoV-2抗體作為核酸檢測(cè)陰性情況下的COVID-19確診標(biāo)準(zhǔn)，需要進(jìn)行2次以上的動(dòng)態(tài)檢測(cè)。如果檢測(cè)SARS-CoV-2的試劑不能區(qū)分IgM和IgG抗體，就難以通過(guò)特異性IgM抗體和IgG抗體模式的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)進(jìn)行診斷，但總抗體和2種抗體聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率均高于單獨(dú)檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體。

綜上所述，由于SARS-CoV-2抗體檢測(cè)具有樣本采集簡(jiǎn)便、技術(shù)難度低等優(yōu)點(diǎn)，因此在COVID-19的臨床診斷及SARS-CoV-2無(wú)癥狀感染者的管理中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。但各種SARS-CoV-2抗體檢測(cè)試劑的檢測(cè)性能有一定差異，各實(shí)驗(yàn)室在選擇SARS-CoV-2抗體檢測(cè)試劑時(shí)應(yīng)綜合考量所檢測(cè)的人群、檢測(cè)目的、實(shí)驗(yàn)室能力等，選擇靈敏度高、假陽(yáng)性低的試劑。本研究的不足之處在于比對(duì)樣本量較小，且僅進(jìn)行了不同試劑之間符合率和靈敏度的比較，未對(duì)COVID-19患者年齡、性別、患病時(shí)間等與抗體檢測(cè)結(jié)果的關(guān)系作進(jìn)一步分析，因此本研究結(jié)論尚存在一定的局限性。