肖瓊

（山西省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 山西 太原 030013）

十八味消白丸是由當(dāng)歸、黃芪、熟地黃、白術(shù)等十八味中藥組成的復(fù)方。主治白癜風(fēng)。本次使用的高效液相色譜法對西洋參中所含有的人參皂苷Rb1 進(jìn)行含量鑒定，實(shí)驗(yàn)過程如下。

1.實(shí)驗(yàn)儀器與試藥

WATERS2695 高效液相色譜儀；AlltechELSD2000ES 檢測器；DiamosilC18 色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；超聲波清洗器；恒溫水浴鍋；JM-B10002 千分之一電子天平；HANGPING-FA2104萬分之一電子分析天平；微量進(jìn)樣器。

人參皂苷Rb1 對照品、川芎對照藥材、當(dāng)歸對照藥材、石菖蒲標(biāo)準(zhǔn)品、黃芪甲苷、大黃素標(biāo)準(zhǔn)品均購自中國藥品生物制品檢定所。十八味消白丸，陰性對照品（自制）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他均為分析純。

2.定性鑒別

2.1 當(dāng)歸、川芎的定性鑒別

準(zhǔn)確提取本品5g 研細(xì)，加甲醇15mL，超聲處理15 分鐘，然后過濾，將濾液蒸干，將試驗(yàn)殘?jiān)尤爰状紟椭芙?，以此為供試品溶液；另取?dāng)歸、川芎對照藥材各0.5g，按照上述同樣方法制作對照溶液；提取、當(dāng)歸各5g，按照供試品溶液制作方法制作，作為陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，提取上述溶液各5μL，分開點(diǎn)在同一個硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）為展開劑，先展開，后取出，再晾干，放置在紫外光燈（365nm）下觀察，供試品色譜中，在與對照藥材相對的地方上出現(xiàn)類似的熒光斑點(diǎn)，圖譜清晰可見，陰性對照無干擾。

2.2 何首烏的定性鑒別

提取本品5g，研磨，先加入2.5mol/L 硫酸15mL，再加入氯仿15mL，然后進(jìn)行加熱回流15 分鐘，離心，取上清液放置于分液漏斗中，分取氯仿層，蒸干，試驗(yàn)殘?jiān)勇确?mL 使溶解，作為供試品溶液[1]。再提取大黃素對照品，加入甲醇制成每3mL中需含3mg 的溶液，作為對照品溶液。取何首烏陰性藥材10g，同供試品溶液制備方法制備，作為陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μL，區(qū)分點(diǎn)在同一硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（30:10:0.5）為展開劑[2]，先展開，然后取出，晾干，放置在紫外光燈（365nm）下進(jìn)行檢查。供試品色譜中，在和對照品色譜相對應(yīng)的地方，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，圖像清晰，陰性對照無干擾。

2.3 石菖蒲的定性鑒別

取本品20g 研細(xì)，加石油醚（60 ～90oC）30mL，然后進(jìn)行加熱回流半個小時，再濾過，將濾液蒸干，最后加入石油醚1mL進(jìn)行溶解，作為供試品溶液；再取石菖蒲的對照藥材1g，使用同樣的方法制成石菖蒲對照藥材溶液；取石菖蒲陰性對照藥材10g，同供試品溶液制作方法進(jìn)行制作，用作石菖蒲陰性對照溶液。依據(jù)薄層色譜法為展開劑[3]，分別展開、取出和晾干，常規(guī)放置1 小時，再放置于紫外光燈下（365nm）下進(jìn)行觀察，供試品色譜中，在和對照品色譜相對應(yīng)的位置上，呈現(xiàn)相同的顏色的熒光斑點(diǎn)，圖像清晰，陰性對照無干擾。

2.4 黃芪的定性鑒別

提取本品5g 研磨，然后加甲醇15mL，進(jìn)行回流半個小時小時，濾過，濾液蒸干，加水10mL 將其溶解，用水飽和正丁醇萃取1 次，一次10mL，取正丁醇液，用氨水萃取1 次，一次10mL，取正丁醇層，使其揮干，加甲醇1mL 使其溶解，作為供試品溶液。另外提取黃芪甲苷對照品，加入甲醇制成每1mL 含1mg的對照品溶液；提取黃芪陰性藥材10g，和供試品溶液制作方法制作，為黃芪陰性對照溶液。依照薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，分別展開、取出和晾干，提取上述三種溶液各4μL，區(qū)別點(diǎn)在同一硅膠G 薄層板上，用三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）的下層作為展開劑，展開、取出和晾干，供試品色譜中，在和對照品色譜相對應(yīng)的位置上，顯示相同的顏色的熒光斑點(diǎn)，圖譜清晰，陰性對照無干擾。

3.含量測定

3.1 色譜條件

使用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑;使用乙腈-水（30:70）作為流動相；柱溫度：30℃；流動相對流速：1.0mL/min；載氣流速：2.1L/min；漂移管溫度：110℃；理論塔板數(shù)：使用人參皂苷Rb1 峰進(jìn)行計(jì)算應(yīng)不得低于5000。

3.2 對照品溶液的制作

精密稱取人參皂苷Rb1對照品劑量，加入甲醇制作成每1mL含有人參皂苷Rb11mg 的溶液，得到對照品溶液。

3.3 供試品溶液的制作

提取本品2g 研磨，精密稱定計(jì)算，置于具塞錐形瓶中，精確加入水飽和正丁醇50mL，封閉，稱其質(zhì)量，超聲處理45 分鐘，使其冷卻，再稱定重量，用水飽和正丁醇彌補(bǔ)減少的重量，過濾，精確量取20mL 置分液漏斗中，加入氨試液20mL 萃取2 次，棄掉氨試液，正丁醇液蒸干，加入甲醇定容至4mL，即得。

3.4 陰性對照溶液的制作

處方中除去西洋參，根據(jù)供試品溶液的制作方法制作陰性對照品溶液。

3.5 陰性干擾試驗(yàn)

提取上述溶液各5μL，區(qū)別按照上述色譜條件進(jìn)樣進(jìn)行分析，觀察色譜圖變化，試驗(yàn)結(jié)果顯示，陰性對照圖譜與對照品、供試品圖譜中西洋參相對應(yīng)的保留時間如果無色譜峰，表示選擇性良好，陰性無干擾。

3.6 線性關(guān)系考察

見表1。

表1 線性關(guān)系

3.7 精密度實(shí)驗(yàn)

吸取同一份對照品溶液（0.916mg/mL），持續(xù)進(jìn)樣6 次，根據(jù)上述色譜進(jìn)行測試。結(jié)果，RSD=2.18%（n=6），表示儀器精密度很準(zhǔn)確。

3.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

見表2。

表2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

3.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

提取一樣的供試品溶液，依據(jù)上述色譜分別在2、4、6、8、10、12 小時測定人參皂苷Rb1 峰面積積分值。結(jié)果，RSD=2.06%（n=6），表示在12 小時內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性較為良好。

3.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的十八味消白丸粉末6 份，每份約1.0g，精密稱定，分別精確加入人參皂苷Rb1 對照品（0.912mg/mL）2mL，混合后按供試品的制備方法提取，各進(jìn)樣10μL 檢測，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)算結(jié)果，人參皂苷Rb1 平均回收率為100.42%，RSD為1.69%（n=6）。

3.11 含量測定

照3.3 項(xiàng)下方法平行提取兩份供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液（0.912mg/mL）5μL、10μL,供試品溶液20μL，依照上述色譜條件進(jìn)行測試，以外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果為1.666mg/g、1.419mg/g，平均含量為1.52mg/g。

4.討論

藥典中西洋參人參皂苷Rb1的含量測定方法為高效液相色譜法，采用紫外檢測器，但是由于人參皂苷Rb1在紫外檢測條件下為末端吸收，靈敏度低，干擾較大，重復(fù)性較差，故本方不采用藥典的方法。因用HPLC-ELSD 法測量人參皂苷Rb1的含量具有簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高、現(xiàn)性好等特點(diǎn)，是一種良好的測定含參皂苷Rb1制劑的含量測定方法，故采用此法測定人參皂苷Rb1的含量。

本文使用的對于十八味消白丸的定性和定量檢測方法，本文方法具有準(zhǔn)確穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，并且陰性無干擾，各項(xiàng)指標(biāo)皆達(dá)到滿意的效用，可用于十八味消白丸的質(zhì)量控制。