馬婷，柴英輝，賈旭穎，高金偉，竇勇，邵蓬，周文禮

不同微藻餌料對鹵蟲生長及水環(huán)境變化的影響

馬婷，柴英輝，賈旭穎，高金偉，竇勇，邵蓬，周文禮通信作者

（天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院天津市水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗室，天津300392）

為了探討不同微藻餌料對鹵蟲生長及養(yǎng)殖水環(huán)境的影響，采用單獨(dú)和混合培養(yǎng)的方式，以3種海水微藻（球等鞭金藻、塔胞藻和杜氏鹽藻）為餌料飼養(yǎng)鹵蟲，測定鹵蟲體長、體重等生長指標(biāo)及養(yǎng)殖水體pH、溫度、鹽度、溶解氧的變化。試驗結(jié)果表明：不同微藻餌料搭配養(yǎng)殖鹵蟲的效果差異明顯，水環(huán)境變化也存在較大差異。其中球等鞭金藻和塔胞藻混合飼養(yǎng)的鹵蟲效果最為理想，鹵蟲的存活率高，相對增長率大，水環(huán)境維持穩(wěn)定，為鹵蟲生長提供了良好的水環(huán)境。因此在水產(chǎn)漁業(yè)生產(chǎn)上，球等鞭金藻和塔胞藻配合形成的餌料可作為增加鹵蟲存活率和相對增長率的適口餌料進(jìn)行推廣應(yīng)用。

鹵蟲；球等鞭金藻；塔胞藻；杜氏鹽藻；存活率；相對增長率

鹵蟲（）也稱鹽水豐年蟲，是小型低等甲殼動物，分布極廣，分類上屬于節(jié)肢動物門（Arthropoda）、甲殼綱（Crustacea）、鰓足亞綱（Branchiopoda）、無甲目（Anostraca）、鹵蟲科（Artemiidae）、鹵蟲屬（）[1]。鹵蟲是一種重要的水產(chǎn)餌料，其蛋白質(zhì)含量高達(dá)60%，且富含必需氨基酸、類胡蘿卜素、魚蝦味覺誘引劑等[2]。鹵蟲作為基礎(chǔ)研究材料已被廣泛應(yīng)用于水生生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)、生理學(xué)、毒理學(xué)、放射生物學(xué)和分子生物學(xué)研究。且鹵蟲含有豐富蛋白質(zhì)和不飽和脂肪酸，是魚、蝦、蟹等幼體優(yōu)良的開口活餌料，可充分滿足對蝦、牙鲆等幼體的營養(yǎng)需求[3]。趙素芬等[4]研究發(fā)現(xiàn)，鹵蟲的生長、繁殖不僅與外界理化因素有關(guān)，也與水環(huán)境因素尤其是餌料的質(zhì)與量有密切關(guān)系。

目前人工養(yǎng)殖鹵蟲用到的餌料主要是海水單胞藻類、藻粉、面粉和酵母等[5]。海洋單胞藻類是海洋生態(tài)系統(tǒng)中的主要生產(chǎn)者[6]，藻類利用自身光合作用轉(zhuǎn)變無機(jī)物為有機(jī)物供生物利用，是海洋生物的重要餌料。單胞藻營養(yǎng)全面，特別是DHA和ARA含量豐富，同時單胞藻還進(jìn)行光合作用，降低水體的氨氮和硝酸鹽含量，凈化水質(zhì)，具有開發(fā)的潛質(zhì)。茹文紅[7]通過投喂酵母粉或螺旋藻粉分析不同餌料對鹵蟲生長、存活及消化酶活性的影響。陳家鑫[8]研究表明，裂壺藻無論細(xì)胞大小還是可消化性對于輪蟲和鹵蟲無節(jié)幼體都很合適。蘇琳[9]初步探究了酵母培養(yǎng)物對鹵蟲無節(jié)幼體生長、體成分的影響，從中篩選出酵母培養(yǎng)物的最適添加量。張群躍等[10]采用湛江叉鞭金藻、亞心形扁藻、小球藻強(qiáng)化營養(yǎng)鹵蟲幼體，結(jié)果表明微藻營養(yǎng)強(qiáng)化有利于提高鹵蟲幼體生長和EPA含量，其中以扁藻的強(qiáng)化效果最為顯著。常見的球等鞭金藻、塔胞藻、杜氏鹽藻作為單一或者混合餌料對鹵蟲相對增長率和存活率的影響還未見 報道。

生物與生態(tài)環(huán)境之間不斷進(jìn)行著能量交換與物質(zhì)交換[11]，水生生物的生長與優(yōu)質(zhì)的水環(huán)境密不可分，兩者相互依存、影響、制約。鹵蟲等甲殼類動物的生長也受養(yǎng)殖水體中溫度[12]、鹽 度[13-15]、pH[16]、溶解氧[17]、光照[18]、水體污染物[19]的影響。同時，鹵蟲營養(yǎng)強(qiáng)化最重要的生物因素——微藻餌料具有快速吸收氮、磷和較高生長速率、產(chǎn)氧能力的優(yōu)點(diǎn)[20]，微藻還受水體養(yǎng)分濃度、水體中懸浮顆粒物、微生物的影響，因此養(yǎng)殖水環(huán)境變化影響著鹵蟲的生長。本試驗通過給鹵蟲投喂球等鞭金藻、塔胞藻、杜氏鹽藻及等密度等體積混合藻液，測定鹵蟲的體長、體重、成活率等生長指標(biāo)，同時監(jiān)測養(yǎng)殖鹵蟲水環(huán)境中pH、溶解氧、水體溫度、鹽度的變化，旨在尋找提高鹵蟲存活率的最適餌料，提高鹵蟲體營養(yǎng)含量進(jìn)而滿足日益發(fā)展的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)生物生長營養(yǎng)需求。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗用鹵蟲卵由天津海友佳音生物科技有限公司提供，置于4 ℃冰箱密封保存待用。球等鞭金藻、塔胞藻、杜氏鹽藻均由天津農(nóng)學(xué)院水生生物生態(tài)實(shí)驗室提供。

1.2 藻液培養(yǎng)與濃縮

藻液采用f/2培養(yǎng)基培養(yǎng)，將配制好的培養(yǎng)液與藻液按1∶1比例混合，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在溫度為26 ℃、光照為72 μmol/（m2·s）、光照周期為12∶12（L∶D）條件下進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。通過濃縮培養(yǎng)方式，待每種藻液密度達(dá)5×107cell/mL時離心，應(yīng)用低溫保存法[21]保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 鹵蟲孵化

按鹵蟲卵∶NaHCO3∶海水＝1 g∶1 g∶1 L的比例孵化鹵蟲，將15 g鹵蟲卵在預(yù)處理的海水（已曝氣24 h、溫度為28 ℃、鹽度為30‰）中孵化24 h。孵化過程中攪拌均勻并充氣，孵化時光照強(qiáng)度為72 μmol/（m2·s）。

1.4 鹵蟲的飼養(yǎng)方法

孵化結(jié)束取出氣石，靜置5 min將鹵蟲無節(jié)幼體與孵化后剩余的鹵蟲卵殼、未孵化或已死亡的鹵蟲卵進(jìn)行分離，將分離后的鹵蟲收集并分為5個試驗組，每個試驗組設(shè)置3個重復(fù)，養(yǎng)殖水體的溫度維持在（28±2）℃，溶氧量維持在5 mg/L以上。

飼養(yǎng)鹵蟲過程中的餌料投喂情況見表1，前3組分別投喂球等鞭金藻、塔胞藻、杜氏鹽藻，每次投喂量5 mL，第四、五組則將備好的兩種藻液，分別取2.5 mL，攪拌攪勻，使兩種藻液充分混合，制成混合液（與前3組等體積），再投喂鹵蟲。每日8：00、13：00、19：00定時投喂餌料，試驗養(yǎng)殖周期為15 d。每天測定鹵蟲體長、體重等生長指標(biāo)，同時監(jiān)測水環(huán)境的溫度、鹽度、溶解氧和pH值，每兩天測定一次水體中氨態(tài)氮、亞硝態(tài)氮、硝態(tài)氮含量，15 d后計算鹵蟲存活率。

表1 不同分組餌料情況

1.5 指標(biāo)檢測方法

每組隨機(jī)選出10只鹵蟲幼體，在光學(xué)顯微鏡（目鏡4×、物鏡0.1×）下測量體長并求其平均值。用小撈網(wǎng)撈取鹵蟲后，用鑷子夾取至濾紙上，用電子天平測量鹵蟲濕重，每次取3次樣，計算平均值。鹵蟲數(shù)量的計算方法：隨機(jī)取1 mL鹵蟲計數(shù)，每次取3次樣，計算平均值。

成活率＝/×100％（—鹵蟲的有效個體數(shù)，—鹵蟲的全部個體數(shù)）

養(yǎng)殖水環(huán)境指標(biāo)檢測：溶解氧用水質(zhì)分析儀檢測；水體中鹽度使用鹽度計檢測；溫度和pH值用pH儀檢測。

1.6 水質(zhì)控制

本試驗全程不換水，培養(yǎng)期間進(jìn)行吸污，在吸污的同時補(bǔ)充等量人工海水[22]。試驗過程中將養(yǎng)殖水體氨氮值維持在0.6 mg/L以下、亞硝態(tài)氮維持在0.25 mg/L以下、硝酸鹽維持在50 mg/L 以下。

1.7 統(tǒng)計分析

采用Excel 2010和Origin 8.0軟件繪制圖形，利用SPSS軟件進(jìn)行檢驗和單因子方差分析鑒定數(shù)據(jù)差異性，＜0.05為顯著性差異水平。

2 結(jié)果

2.1 不同餌料投喂鹵蟲的生長指標(biāo)測定結(jié)果

不同餌料投喂情況下，鹵蟲的體長生長存在較大差異（圖1）。在15 d的試驗觀察期內(nèi)，投喂塔胞藻組的鹵蟲，前期生長較為緩慢，從第六天開始體長生長穩(wěn)定，到第十二天鹵蟲體長生長開始緩慢；投喂球等鞭金藻和塔胞藻組的鹵蟲在第五天開始迅速生長，表現(xiàn)出顯著的生長優(yōu)勢，其體長顯著高于其他處理組；投喂杜氏鹽藻組的鹵蟲在整個試驗周期生長最為緩慢，投喂球等鞭金藻組、球等鞭金藻和杜氏鹽藻組的鹵蟲體長一直維持穩(wěn)定增長。試驗結(jié)束時，不同餌料飼養(yǎng)的鹵蟲體長依次為：球等鞭金藻和塔胞藻組＞塔胞藻組＞球等鞭金藻組＞球等鞭金藻和杜氏鹽藻組＞杜氏鹽藻組。

圖1 不同餌料投喂對鹵蟲體長的影響

注：“*”表示差異顯著（＜0.05），“**”表示差異極顯著（＜0.01）

塔胞藻組、杜氏鹽藻組飼養(yǎng)的鹵蟲體長相對增長率均呈現(xiàn)緩慢增長趨勢，在第二天到第十天增長率有小幅上升，從第十天開始增長率處于相對平穩(wěn)期；采用球等鞭金藻飼養(yǎng)的鹵蟲在第四天體長的相對增長率達(dá)到最大值（37%），從第五天開始，鹵蟲的體長相對增長率逐漸呈降低趨勢，到后期（第十一天以后），鹵蟲體長相對增長率趨近于零，鹵蟲生長極緩慢；投喂球等鞭金藻和塔胞藻組、球等鞭金藻和杜氏鹽藻組的鹵蟲體長相對增長率極其相似。兩組均在第六天出現(xiàn)最大增長率，分別達(dá)到55%和51%，第六天到第十天體長增長率波動較大，從第十天開始增長率維持穩(wěn)定。在試驗結(jié)束時，不同餌料飼養(yǎng)的鹵蟲體長相對增長率依次為：塔胞藻組＞杜氏鹽藻＞球等鞭金藻和塔胞藻組＞球等鞭金藻和杜氏鹽藻組＞球等鞭金藻組（圖2）。

圖2 不同餌料投喂對鹵蟲體長相對增長率的影響

不同餌料投喂對鹵蟲體重、體長、成活率有較大影響（表1）。15 d的試驗觀察期結(jié)束時，球等鞭金藻組鹵蟲成活率較高，為83.72%，呈現(xiàn)顯著差異（＜0.05）；塔胞藻組鹵蟲成活率為45.39%；球等鞭金藻和塔胞藻組鹵蟲成活率最高，為86.02%，有極顯著差異（＜0.01）；杜氏鹽藻組成活率最低，僅為10%。用球等鞭金藻飼養(yǎng)的鹵蟲個體大小中等，平均體長為1.96 mm，體重為10.55 mg，體重較大；用塔胞藻飼養(yǎng)的鹵蟲體長最小的為1.01 mm，最大的可達(dá)4.88 mm，個體間差異較大；用球等鞭金藻和塔胞藻飼養(yǎng)的鹵蟲平均體長為3.61 mm，平均體重為13.78 mg，有極顯著差異（＜0.01），為各試驗組中生長最好的一組；采用杜氏鹽藻飼養(yǎng)的鹵蟲生長最差。

表1 不同餌料投喂對鹵蟲存活率、體長、體重的影響

注：“*”表示差異顯著（＜0.05），“**”表示差異極顯著（0.01）

2.2 鹵蟲養(yǎng)殖水體水質(zhì)指標(biāo)的測定結(jié)果

球等鞭金藻和塔胞藻混合飼養(yǎng)的養(yǎng)殖水體pH值在前5 d呈小幅升高，從第六天開始緩慢降低，到第十五天降至最低值，pH為8.6，低于初始養(yǎng)殖水體pH，該組養(yǎng)殖水體的pH值存在顯著差異（＜0.05）；塔胞藻組養(yǎng)殖水體pH值在前5 d也呈現(xiàn)小幅升高，從第六天開始緩慢降低，第七天出現(xiàn)最大降幅，第十五天降至8.8，與初始pH值相近；球等鞭金藻組、杜氏鹽藻組、球等鞭金藻和杜氏鹽藻組的養(yǎng)殖水體pH值維持穩(wěn)定，無顯著差異（＞0.05）（圖3）。

圖3 鹵蟲養(yǎng)殖水體pH值測定結(jié)果

球等鞭金藻組、杜氏鹽藻組、球等鞭金藻和杜氏鹽藻組養(yǎng)殖水體溶解氧在整個鹵蟲培養(yǎng)階段明顯降低；塔胞藻組、球等鞭金藻和塔胞藻組在鹵蟲培養(yǎng)的前期明顯降低，在鹵蟲培養(yǎng)的中期和后期沒有顯著變化，各個試驗組對水體溶解氧含量的影響無顯著差異（＞0.05）（圖4）。

圖4 鹵蟲養(yǎng)殖水體溶解氧測定結(jié)果

球等鞭金藻組、塔胞藻組、球等鞭金藻和塔胞藻組養(yǎng)殖水體溫度不太穩(wěn)定（圖5），在前期均有大幅度降低，第四天后有極小幅升溫趨勢，后期整體趨勢穩(wěn)定，水體溫度均回歸初始溫度值附近，3組養(yǎng)殖水溫存在顯著差異（＜0.05）；杜氏鹽藻組水體溫度在鹵蟲培養(yǎng)早期緩慢下降后升高，在中期又再次緩慢下降后上升到起始溫度，在培養(yǎng)后期維持相對穩(wěn)定，養(yǎng)殖水體溫度無顯著差異 （＞0.05）；球等鞭金藻和杜氏鹽藻組養(yǎng)殖水體溫度整體維持穩(wěn)定，該組水溫?zé)o顯著差異（＞0.05）。

圖5 鹵蟲養(yǎng)殖水體溫度測定結(jié)果

球等鞭金藻組水體鹽度整體呈現(xiàn)緩慢上升的趨勢，該組養(yǎng)殖水體鹽度無顯著差異（＞0.05）；球等鞭金藻和杜氏鹽藻組、球等鞭金藻和塔胞藻組水體鹽度在鹵蟲培養(yǎng)的中后期緩慢上升，這2種餌料投喂鹵蟲，養(yǎng)殖水體鹽度無顯著差異（＞0.05）；塔胞藻組水體鹽度在培養(yǎng)后期緩慢上升，該組養(yǎng)殖水體鹽度無顯著差異（＞0.05）；杜氏鹽藻組養(yǎng)殖水體鹽度波動不大，整體有極小幅度升高，該組養(yǎng)殖水體鹽度無顯著差異（＞0.05）。杜氏鹽藻組、球等鞭金藻和杜氏鹽藻組養(yǎng)殖水中的鹽度明顯高于其他3組（＜0.05）（圖6）。

圖6 鹵蟲養(yǎng)殖水體鹽度測定結(jié)果

3 討論

3.1 微藻餌料對鹵蟲生長的影響

餌料為浮游動物、水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動物等提供大量機(jī)體代謝能量，對水產(chǎn)生物的生長、發(fā)育、繁殖都有著重大影響[23]，甚至影響著水產(chǎn)生物的遺傳、進(jìn)化。微藻是水生生態(tài)系統(tǒng)食物鏈重要的組成部分，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上常使用的微藻有海水小球 藻[24]、螺旋藻、球等鞭金藻、裂壺藻、鹽藻等。不同微藻餌料的組成成分、營養(yǎng)成分有較大差異，對鹵蟲的作用時間也有差異，因而應(yīng)針對鹵蟲的生長狀況選擇合適的餌料。張登瀝等[25]研究了鹽藻、麩皮、酵母對鹵蟲生長和生殖的影響，表明鹵蟲的生長與其餌料有著密切的關(guān)系。試驗中，球等鞭金藻飼養(yǎng)的鹵蟲個體均勻且成活率較高，可達(dá)到83%，但個體較小，平均體長僅為5.68 mm，鹵蟲生長后期可能與鹵蟲自身需求的氨基酸等營養(yǎng)成分有關(guān)[26]；球等鞭金藻和塔胞藻組體長處于中高水平，存活率和體重顯著高于其他各試驗組，這種混合餌料更利于鹵蟲的存活與生長；而塔胞藻組體長顯著高于其他各試驗組，體重、存活率較低，這一差異與投喂餌料的營養(yǎng)價值、消化、吸收及餌料的轉(zhuǎn)化有關(guān)[27]；用杜氏鹽藻飼養(yǎng)的鹵蟲個體生長緩慢，成活率較低，這可能是由于杜氏鹽藻在離心備用過程中營養(yǎng)物質(zhì)流失，使餌料營養(yǎng)含量降低、鹵蟲營養(yǎng)攝取不足，導(dǎo)致個體生長緩慢、個體小、存活率低。

3.2 水環(huán)境變化對鹵蟲生長的影響

鹵蟲的生長和繁殖不僅與微藻餌料的種類、質(zhì)量有關(guān)，還應(yīng)考慮養(yǎng)殖水環(huán)境的影響。良好的水環(huán)境可以使水生生物更好地生長。NACEUR等[28]發(fā)現(xiàn)pH與鹵蟲的外部形態(tài)高度相關(guān)，是引起外部形態(tài)變異的因素之一。本試驗中，隨著鹵蟲的生長，球等鞭金藻和塔胞藻組、塔胞藻組養(yǎng)殖水體pH值均出現(xiàn)波動，影響鹵蟲的成活率，與劉愛英等[29]研究結(jié)果（pH影響鹵蟲的生長發(fā)育）相符；塔胞藻組飼養(yǎng)的鹵蟲由于餌料不適宜，導(dǎo)致水體中剩余藻較多，長時間積累致使水體老化、鹵蟲的無節(jié)幼體死亡，隨著鹵蟲的排泄物、食物殘渣、死亡幼體的腐化，水質(zhì)較差，鹵蟲在該種環(huán)境脅迫的水域生長[30]。

溫度是鹵蟲孵化和無節(jié)幼體時期重要的環(huán)境因素，F(xiàn)RANK等[31]研究表明，26 ℃條件下，鹵蟲幼體生長最好。在整個試驗周期，水溫始終維持在24～27 ℃范圍內(nèi)，存在小幅波動，總體溫度益于鹵蟲生長。丁紅霞等[32]研究表明，養(yǎng)殖溫度過高會降低活動代謝，并破壞鹵蟲的基礎(chǔ)代謝，進(jìn)一步證實(shí)溫度對鹵蟲生長的影響更顯著。

鹽度變化時，生物需消耗能量來維持體內(nèi)滲透壓平衡。JIA等[33]研究表明，鹽度較低時耗能少，生長速度較快，反之耗能大，生長速度較慢。隨著試驗中養(yǎng)殖水鹽度的變化，水環(huán)境的pH值和溶解氧也存在小幅度的波動。這一試驗結(jié)果與李榮超等[34]針對天津塘沽鹽場鹵蟲種群生態(tài)調(diào)查的結(jié)果相一致，且養(yǎng)殖水體的溶解氧對鹵蟲的生長、成活均呈現(xiàn)不顯著差異。

3.3 微藻與水環(huán)境對鹵蟲的影響

鹵蟲是一種典型的非選擇性濾食生物，50 μm以下的顆粒狀物質(zhì)均可被攝食[35]，對食物沒有選擇性[36]。球等鞭金藻、塔胞藻、杜氏鹽藻的直徑均在鹵蟲的攝食范圍內(nèi)。研究微藻餌料對鹵蟲影響的同時，探究鹵蟲生活的環(huán)境條件和適應(yīng)性，有利于對資源進(jìn)行開發(fā)利用和保護(hù)。試驗中，球等鞭金藻和塔胞藻組是最適合鹵蟲生長的餌料組，水環(huán)境因子相對維持穩(wěn)態(tài)，pH、鹽度、溫度、溶解氧4種水環(huán)境因子對鹵蟲的生長有著不同的影響，同時各種環(huán)境因子間存在相互作用，4種因子交互影響，養(yǎng)殖環(huán)境中各因子交互作用與歐陽娟等[37]研究結(jié)論相符。就鹵蟲生長和水環(huán)境變化來看，球等鞭金藻和塔胞藻混合飼養(yǎng)的鹵蟲效果最為理想。

4 結(jié)論

球等鞭金藻和塔胞藻組混合飼養(yǎng)的鹵蟲體長生長較好，體重增長顯著高于其他各試驗組，存活率高達(dá)86.02%，其養(yǎng)殖水環(huán)境變化較為穩(wěn)定，滿足水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)高質(zhì)量、高產(chǎn)量的需求。因此，球等鞭金藻和塔胞藻混合投喂強(qiáng)化鹵蟲效果最好。

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Effects of three kinds of feed on relative growth rate and survival rate of

Ma Ting, Chai Yinghui, Jia Xuying , Gao Jinwei, Dou Yong, Shao Peng, Zhou WenliCorresponding Author

（Tianjin Key Laboratory of Aqua-ecology and Aquaculture, College of Fisheries, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300392, China）

In order to investigate the effects of different microalgae bait on the growth ofand the environment of aquaculture, this experiment used single and mixed culture methods to feedwith three kinds of seawater microalgae,,and. Determination of growth indicators such as body length and body weight of, and changes in pH and dissolved oxygen of cultured water were studied. The experimental results showed that the effects of different microalgae bait on the culture ofwere obvious, and the water environment changes were also different. The effect ofwas the best inthe mixed culture ofand. The survival rate ofwas high, the relative growth rate was large, and the water environment was stable, which provides a good water environment for the growth of Artemia in Bohai Bay. Therefore, the bait formed by the combination ofandcan be promoted and applied in the production of aquatic fishery as suitable bait for increasing the survival rate and relative growth rate of.

;;;; survival rate; relative growth rate

1008-5394（2020）04-0062-06

10.19640/j.cnki.jtau.2020.04.012

S963.21

A

2019-09-10

天津市自然科學(xué)基金青年項目（18JCQNJC14800）；天津市131人才工程第二層次人選資助項目（J01009030726）

馬婷（1995—），女，碩士在讀，主要從事漁業(yè)資源與環(huán)境修復(fù)研究。E-mail：M18522362599@163.com。

周文禮（1969—），男，研究員，博士，主要從事水域生態(tài)學(xué)和微藻資源化利用研究。E-mail：wenlizhou@tjau.edu.cn。

責(zé)任編輯：張愛婷