常吉祥，楊春光，袁 兵，楊子峰，張?jiān)戚x*

（1.昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650504；2.云南省第一人民醫(yī)院昆明理工大學(xué)附屬醫(yī)院，云南 昆明 650032；3.呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室呼吸疾病國(guó)家臨床研究中心/廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510120）

流感病毒（Influenza virus）是一種呈桿狀或絲狀的正粘病毒科（Orthomyxoviridae）病毒，根據(jù)病毒感染種屬可分為人流感病毒、禽流感病毒（Avian influ?enza virus，AIV）、以及豬流感病毒等，其中人流感病毒根據(jù)其核蛋白的抗原性分為甲型流感病毒（IAV）和乙型流感病毒等。IAV 可通過(guò)人的呼吸道傳播引起嚴(yán)重的呼吸疾病；AIV 在家禽與野禽間呈高度接觸性傳播，也可直接感染人類(lèi)引起死亡，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)發(fā)展且威脅人類(lèi)生命安全[1]。

流感病毒表面血凝素（Hemagglutinin，HA）蛋白與宿主呼吸道的唾液酸受體結(jié)合可介導(dǎo)病毒的吸附及膜融合過(guò)程，是病毒侵入宿主細(xì)胞并產(chǎn)生有效復(fù)制的前提[2]。唾液酸（Sialic acid，SA）是經(jīng)唾液酸轉(zhuǎn)移酶（Sialyltransferase，ST）參與調(diào)控合成的流感病毒受體決定簇，參與流感病毒感染人類(lèi)的ST 主要包括Neu5Ac α（2-3）Gal 唾液 酸轉(zhuǎn) 移酶1～4（ST3GAL1～ST3GAL 4）和Neu5Ac α（2-6）Gal 唾液酸轉(zhuǎn)移酶1（ST6GAL1），它們分別將底物CMP-Neu5Ac 中的Neu5Ac 及SA 以α（2-3）和α（2-6）糖苷鍵的形式轉(zhuǎn)移到半乳糖（Gal）等糖脂或糖蛋白形成受體[3]。ST 調(diào)控SA 與Gal 之間糖苷鍵的連接方式，不同的糖苷鍵結(jié)構(gòu)可形成底物特異性不同的SA 受體，最終影響SA與流感病毒表面HA 的結(jié)合[4-5]。一般認(rèn)為人類(lèi)流感病 毒 優(yōu) 先 結(jié) 合α（2-6）唾 液 酸（SAα（2-6）Gal、Neu5Acα（2-6）Gal），而AIV 優(yōu)先識(shí)別α（2-3）唾液酸（SAα（2-3）Gal、Neu5Acα（2-3）Gal）[6]，這種流感病毒與受體結(jié)合特性可能限定了病毒感染宿主的范圍。已有文獻(xiàn)報(bào)道，H5N1 AIV（A/duck/Guangxi/35/2001（DK/35）株可以同時(shí)識(shí)別SAα（2-3）Gal 和SAα（2-6）Gal 受體[7]；H9N2 AIV 流行株則趨向?yàn)榻Y(jié)合人源SA 受體SAα（2-6）Gal[8]，表明IAV 感染人類(lèi)的第一步是其HA 受體的親和性要發(fā)生改變。目前未見(jiàn)宿主細(xì)胞SA 受體及ST 的表達(dá)與流感病毒相關(guān)性研究的報(bào)道。因此，本研究將人源IAV CA04 株與AIV Y280 株感染9 種細(xì)胞，初步探究宿主細(xì)胞ST 表達(dá)與流感病毒敏感性的相關(guān)性，為流感病毒侵入機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)，為抗流感病毒藥物研究選擇合適的細(xì)胞系提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病毒與細(xì)胞人源IAV A/California/04/2009/（H1N1）（CA04）株、AIV A/Duck/HongKong/Y280/1997（H9N2）（Y280）株由香港大學(xué)MalikPeris 教授惠贈(zèng)。CA04株在MDCK 細(xì)胞中傳代，Y280株在10 日齡雞胚傳代后，測(cè)定病毒滴度后備用。犬腎細(xì)胞（MDCK）、幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞（BHK）、人喉表皮樣癌細(xì)胞（Hep-2）、人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞（A549）、非洲綠猴腎細(xì)胞（Vero）、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO-k1）、雞成纖維細(xì)胞系（DF-1）和人源胚胎腎細(xì)胞（HEK293T）均購(gòu)自美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物保存庫(kù)（ATCC）。

1.2 主要試劑高糖型細(xì)胞培養(yǎng)基（DMEM）、胎牛血清（FBS）、青/鏈霉素購(gòu)自Gibco 公司；無(wú)血清培養(yǎng)基VIVO15 購(gòu)自Lonza 公司；TPCK 胰酶、牛血清白蛋白（BSA）購(gòu)自Sigma 公司；新鮮雞血樣品采自活禽市場(chǎng)；FITC 標(biāo)記的素黑接骨木凝集素（Sambucus Nigra， SNA）、懷 愧 凝 集 素I（Maackiaamurensis，MAA I）購(gòu)自Vector Laboratories 公司；鼠源抗IAV 核蛋白IgG 抗體、羊抗鼠IgG-FITC 購(gòu)自ABcam 公司；去唾液酸化BSA、含DAPI 的封片介質(zhì)購(gòu)自Thermo Fisher 公司；核酸提取試劑盒購(gòu)自諾唯贊公司；RTPCR 試劑盒、熒光定量PCR 試劑盒均購(gòu)自TaKaRa公司。

1.3 流感病毒感染不同細(xì)胞后的增殖水平的測(cè)定

將MDCK、BHK、HEP-2、16HBE、A549、Vero、CHO-k1、DF-1 和293T 細(xì)胞傳代至96 孔板。37 ℃5% CO2培養(yǎng)。分別將CA04 株（1×105TCID50/0.1 μL）和Y280 株（1×105TCID50/0.1 μL）用無(wú)血清DMEM 培養(yǎng)基10 倍倍比稀釋至101～106倍，將6 個(gè)稀釋度的病毒液以每孔100 μL 分別接種至長(zhǎng)成單層上述細(xì)胞的96 孔板中，每個(gè)稀釋度設(shè)6 個(gè)復(fù)孔。48 h 后，每孔取50 μL 上清液于U 型血凝板中與0.5%的雞紅細(xì)胞懸液混合，記錄每孔凝集度，并采用Reed-Muench法分別計(jì)算半數(shù)細(xì)胞感染劑量（TCID50）。

1.4 SA 受體類(lèi)型及其與流感病毒結(jié)合能力的檢測(cè)

將1.3 中所述細(xì)胞傳代至帶有爬片的24 孔板中，每種細(xì)胞設(shè)2 個(gè)復(fù)孔，待細(xì)胞長(zhǎng)至50%時(shí)，棄去培養(yǎng)基。每種細(xì)胞選兩孔分別加入100 μL/孔FITC 標(biāo)記的植物凝集素SNA（特異性結(jié)合SAα（2-6）Gal）和MAA I（特異性結(jié)合SAα（2-3）Gal）（終濃度5 μg/mL），室溫孵育1 h 后，以含有抗熒光淬滅劑的封片液（含有DAPI）封片，經(jīng)直接免疫熒光法檢測(cè)各細(xì)胞表面受體類(lèi)型；同上述細(xì)胞爬片操作，待細(xì)胞長(zhǎng)至50%時(shí)，每種細(xì)胞取2 孔，分別接種MOI 10 的CA04 和Y280 株病毒液，4 ℃孵育90 min，PBS 洗滌后，每孔加500 μL 的4%多聚甲醛固定30 min，每孔加100 μL 鼠源抗IVA 核蛋白IgG（5 μg/mL），4 ℃孵育過(guò)夜，每孔加100 μL 羊抗鼠IgG-FITC（5 μg/mL）室溫孵育1 h。經(jīng)間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）檢測(cè)各細(xì)胞表面SA 受體與流感病毒的結(jié)合情況。

1.5 細(xì)胞表面SA 受體的定量檢測(cè)將1.3 中所述細(xì)胞傳代至6 孔板，細(xì)胞長(zhǎng)至90%時(shí)，收集細(xì)胞，以1×106個(gè)/管分裝，4 ℃離心，預(yù)冷的PBS 重懸、離心，重復(fù)上述步驟3 遍。加3%去唾液酸化BSA，室溫封閉1 h，每種細(xì)胞分裝兩管分別加入200 μL FICT 標(biāo)記的植物凝集素溶液SNA 和MAA I（終濃度分別為5 μg/mL），室溫避光孵育30 min。經(jīng)過(guò)預(yù)冷的PBS 重懸、離心，重復(fù)3 遍后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)FITC 通道的熒光強(qiáng)度。利用FlowJo V10 軟件統(tǒng)計(jì)分析各組細(xì)胞樣品的平均熒光強(qiáng)度（MFI）。

1.6 各細(xì)胞ST 相關(guān)基因mRNA 轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)

根據(jù)GenBank 中登錄的不同物種的GAPDH（NM_001357943； NM_001244854； NM_001003142； NM_204305）、ST3GAL4（NR_145671；NM_001246699；XM_014113293；JX035870）和ST6GAL1（NM_173216；XM_015276836；NM_001246815；XM_022414319）基因序列，利用Primer Premier 6.0 軟件設(shè)計(jì)引物（表1），并由北京六合華大基因科技有限公司合成。收集1.3中所述細(xì)胞，利用核酸提取試劑盒提取各細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以其為模板，利用表1 中的引物，經(jīng)熒光定量PCR 檢測(cè)各細(xì)胞中ST3GAL4 和ST6GAL1 基因的mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。

2 結(jié) 果

2.1 各細(xì)胞中流感病毒滴度測(cè)定的結(jié)果兩種流感病毒（CA04、Y280 株）感染9 種細(xì)胞（MDCK、BHK、Hep-2、16HBE、A549、Vero、CHO-k1、DF-1和293T）48 h 后，檢測(cè)細(xì)胞上清中病毒滴度。結(jié)果顯示，感染CA04 株 后，MDCK、16HBE、 DF-1 和A549檢測(cè)到了病毒滴度，分別為3.2×102TCID50/0.1 mL、3.2×101TCID50/0.1 mL、2.6×101TCID50/0.1 mL、0.95×101TCID50/0.1 mL；而AIV Y280 株在9 種細(xì)胞中系均有復(fù)制，其中病毒滴度從高到低依次為MDCK、DF-1、Vero、293T、CHO-k1、Hep-2、A549、16HBE、和BHK，分別為6.3×103TCID50/0.1 mL、6.3×102TCID50/0.1 mL、3.9×102TCID50/0.1 mL、3.9×102TCID50/0.1 mL、3.2×102TCID50/0.1 mL、3.2×102TCID50/0.1 mL、2.5×102TCID50/0.1 mL、1.9×102TCID50/0.1 mL、9.9×101TCID50/0.1 mL（圖1）。表明人流感病毒CA04 株僅在MDCK、DF-1、16HBE 和A549 細(xì)胞中有一定的復(fù)制能力；AIV Y280株在MDCK 細(xì)胞中的復(fù)制能力最強(qiáng)，而在其余細(xì)胞中的復(fù)制能力相近。

表1 實(shí)驗(yàn)所用引物信息Table 1 Primers used in this study

圖1 兩株流感病毒在不同細(xì)胞中的復(fù)制能力的檢測(cè)結(jié)果Fig.1 Detection of replication abilities of two influenza viruses in different cells

2.2 SA 受體類(lèi)型及其與流感病毒結(jié)合的檢測(cè)結(jié)果將9 種細(xì)胞分別加入FITC 標(biāo)記的植物凝集素SNA 和MAA I 后，采用直接免疫熒光法檢測(cè)各細(xì)胞表面特異性受體。結(jié)果顯示，SNA 處理細(xì)胞后，MDCK、16HBE 、DF-1 和A549 細(xì)胞可見(jiàn)大量綠色熒光，而B(niǎo)HK 細(xì)胞綠色熒光最少（圖1A），表明前4種細(xì)胞含有大量SAα（2-6）Gal 結(jié)構(gòu)的糖鏈，而B(niǎo)HK的SAα（2-6）Gal 含量最少。這與人源IAV CA04 株在各細(xì)胞中病毒滴度測(cè)定的結(jié)果一致，即有大量SAα（2-6）Gal 糖鏈的細(xì)胞對(duì)CA04 株敏感性較高；SAα（2-6）Gal 糖鏈含量較少的BHK 細(xì)胞對(duì)CA04 株敏感性較低。MAA I 處理細(xì)胞后， MDCK、DF-1 和16HBE 細(xì)胞表面可見(jiàn)很強(qiáng)的綠色熒光信號(hào)，BHK、HEP-2、A549、Vero、CHO-k1 和293T 細(xì)胞綠色熒光信號(hào)明顯較弱（圖2B），表明MDCK、DF-1 和16HBE 細(xì)胞表面比其它細(xì)胞含有更多的SAα（2-3）Gal 結(jié)構(gòu)的糖鏈。因此，SAα（2-3）Gal 含量高的細(xì)胞對(duì)AIV Y280 株敏感性較高。同時(shí)也表明細(xì)胞對(duì)流感病毒的敏感性與其表面SA 受體含量呈正相關(guān)。

為進(jìn)一步研究流感病毒與SA 受體類(lèi)型的關(guān)系，經(jīng)IFA 檢測(cè)各細(xì)胞表面受體與病毒的結(jié)合能力。結(jié)果可見(jiàn)，人源IAV CA04 株感染各細(xì)胞后，MDCK、DF-1 和A549 細(xì)胞的熒光強(qiáng)度最高（圖2C）；AIV Y280 株感染細(xì)胞后，MDCK、DF-1 細(xì)胞的熒光強(qiáng)度高于其余細(xì)胞（圖2D）。結(jié)果表明，不同細(xì)胞對(duì)流感病毒的結(jié)合能力存在差異， MDCK、DF-1 和A540 細(xì)胞含較多的SAα（2-6）Gal 糖鏈，因此對(duì)人流感病毒CA04 株結(jié)合能力較強(qiáng)；細(xì)胞表面有更多的SAα（2-3）Gal 糖鏈結(jié)構(gòu)的MDCK、DF-1 則對(duì)AIV Y280 株結(jié)合能力較強(qiáng)。病毒與細(xì)胞表面受體結(jié)合能力與其表面ST 糖鏈含量呈正相關(guān)。

2.3 細(xì)胞表面流感病毒SA 受體的定量檢測(cè)結(jié)果

將9 種細(xì)胞分別加入FITC 標(biāo)記的植物凝集素SNA 和MAA I 后，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面被標(biāo)記的唾液酸受體的熒光強(qiáng)度，并采用FlowJo V10 軟件分析各細(xì)胞表面的MFI 即SA 的含量。結(jié)果顯示，SNA 標(biāo)記的DF-1 細(xì)胞的熒光強(qiáng)度顯著高于其它細(xì)胞（p<0.05），MDCK 的熒光強(qiáng)度顯著高于293T、Hep-2、A549、16HBE、和BHK（p<0.05）（圖3A），MDCK 的熒光強(qiáng)度與CHO-k1、Vero 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）（圖3A）；MAA I 標(biāo)記的各細(xì)胞之間的熒光強(qiáng)度差異不顯著（圖3B）。表明9 種細(xì)胞中MDCK 和DF-1 細(xì)胞表面SAα（2-6）Gal 糖鏈結(jié)構(gòu)最為豐富，其結(jié)合人流感病毒CA04 株的能力較強(qiáng)；而SAα（2-3）Gal 糖鏈結(jié)構(gòu)在細(xì)胞之間差異不大，其結(jié)合AIV Y280 株的能力無(wú)顯著差異，與2.1 的結(jié)果基本一致。同時(shí)進(jìn)一步表明，SA 糖鏈含量與流感病毒的敏感性呈正相關(guān)。

圖2 各細(xì)胞表面SA 受體及其對(duì)不同病毒結(jié)合能力的檢測(cè)結(jié)果Fig.2 Detection results of sialic acid receptors on cell surface and their binding ability to different viruses

圖3 各細(xì)胞表面SA 的定量檢測(cè)結(jié)果Fig.3 Quantitative detection results of SA on the surface of various cell lines

2.4 各細(xì)胞ST相關(guān)基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)結(jié)果為了從基因水平分析細(xì)胞表面SA受體含量，經(jīng)熒光定量PCR 檢測(cè)9 種細(xì)胞ST 相關(guān)基因（ST3GAL4、ST6GAL1）的mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示，MDCK、DF-1細(xì)胞的ST3GAL4、ST6GAL1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平高于其 它細(xì) 胞，Vero、293T、CHO-k1、Hep-2、A549、16HBE 細(xì)胞兩種ST mRNA 轉(zhuǎn)錄水平均較低，BHK 細(xì)胞的兩種ST mRNA 轉(zhuǎn)錄水平均最低（圖4）。結(jié)合2.1的結(jié)果表明，MDCK、DF-1 細(xì)胞ST（ST3GAL4、ST6GAL1）含量較高，其與流感病毒的結(jié)合能力較強(qiáng)；而B(niǎo)HK 細(xì)胞的ST（ST3GAL4、ST6GAL1）轉(zhuǎn)錄水平最低，其結(jié)合流感病毒的能力也最低甚至無(wú)結(jié)合能力。細(xì)胞結(jié)合流感病毒的能力與其表面的ST 轉(zhuǎn)錄水平也呈正相關(guān)。結(jié)合2.3 的結(jié)果表明，MDCK、DF-1 細(xì)胞的ST（ST3GAL4、ST6GAL1）含量較高，其細(xì)胞表面SAα（2-6）Gal/SAα（2-3）Gal 糖鏈結(jié)構(gòu)最豐富；而B(niǎo)HK 細(xì)胞的ST（ST3GAL4、ST6GAL1）轉(zhuǎn)錄水平最低，其細(xì)胞表面SAα（2-6）Gal/SAα（2-3）Gal 糖鏈結(jié)構(gòu)最少。細(xì)胞表面SAα（2-6）Gal/SAα（2-3）Gal糖鏈與其胞內(nèi)ST 轉(zhuǎn)錄水平也呈正相關(guān)。

圖4 ST 相關(guān)基因ST6GAL1（A）、ST3GAL4（B）在各細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)結(jié)果Fig.4 Results of transcription levels of sialyltransferase ST6GAL1 (A) and ST3GAL4 (B) in each cell

3 討 論

細(xì)胞作為流感病毒的增殖基質(zhì)，具有經(jīng)濟(jì)方便，外界影響因素少，重復(fù)性好，質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。MDCK 廣泛應(yīng)用于人類(lèi)流感病毒的分離和增殖，其對(duì)流感病毒敏感性較高，但其卻不適于人源H3N2 流感病毒的生長(zhǎng)[9]。為尋找更多合適流感病毒增殖的宿主細(xì)胞，本研究通過(guò)人/禽兩種流感病毒感染9 種常用細(xì)胞后測(cè)定病毒的TCID50，比較不同的細(xì)胞對(duì)人/禽流感病毒的敏感性。結(jié)果顯示，含有豐富SAα（2-6）Gal 糖鏈的MDCK、16HBE 和DF-1 對(duì)人源流感病毒CA04 株敏感，而Vero 、293T、CHOk1、Hep-2 和BHK 對(duì)該病毒不敏感；含豐富SAα（2-3）Gal 糖鏈的MDCK、DF-1 細(xì)胞同時(shí)也對(duì)AIV Y280 株敏感。

存在于細(xì)胞表面糖蛋白或糖脂中的SA 是流感病毒受體[10]，流感病毒感染宿主細(xì)胞是由其表面HA 與宿主細(xì)胞表面上的糖鏈?zhǔn)荏wSA 共同介導(dǎo)的，這可能是本研究中細(xì)胞對(duì)流感病毒敏感性差異的原因。因此，為分析不同細(xì)胞對(duì)流感病毒敏感性差異的原因，本研究利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)9 種細(xì)胞表面的流感病毒受體類(lèi)型，并通過(guò)間接免疫熒光技術(shù)以及流式細(xì)胞術(shù)對(duì)9 種細(xì)胞表面SAα（2-6）Gal 和SAα（2-3）Gal 兩種糖鏈進(jìn)行定性定量分析。結(jié)果顯示，細(xì)胞表面含有大量SAα（2-6）Gal 和SAα（2-3）Gal 糖鏈結(jié)構(gòu)的MDCK 與DF-1 細(xì)胞表面吸附大量流感病毒，而SAα（2-6）Gal 和SAα（2-3）Gal 含量較少的BHK、Hep-2 與CHO-k1 細(xì)胞則結(jié)合少量流感病毒。表明細(xì)胞對(duì)流感病毒的敏感性與細(xì)胞表面SA 中SAα（2-6）Gal 和/或SAα（2-3）Gall 糖鏈含量呈正相關(guān)。

為分析細(xì)胞表面SA 含量與ST 相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄的關(guān)系，本研究檢測(cè)了SA 受體合成途徑中的關(guān)鍵酶ST 在不同細(xì)胞中的mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示，MDCK、DF-1 的ST3GAL1 和ST6GAL1 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平較高。文獻(xiàn)報(bào)道干擾ST6GAL1 與ST3GAL4 的表達(dá)水平，能夠抑制流感病毒在Vero 細(xì)胞中的增殖[11-12]；過(guò)表達(dá)ST6GAL1 則能增加MDCK 對(duì)人流感病毒的敏感性[13]，表明ST 的表達(dá)水平影響流感病毒對(duì)宿主細(xì)胞的感染。本研究中，ST6GAL1 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平高的細(xì)胞表面有著豐富的人流感病毒受體SAα（2-6）Gal，同樣ST3GAL4 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平高的細(xì)胞則有著豐富的AIV 受體SAα（2-3）Gal，受體豐富的細(xì)胞（MDCK 和DF-1）表現(xiàn)出對(duì)流感病毒高的結(jié)合能力以及較高的敏感性。由此表明，細(xì)胞對(duì)流感病毒的敏感性與SA 受體含量有關(guān)，而SA 含量受ST表達(dá)影響，即ST 表達(dá)影響細(xì)胞對(duì)流感病毒的敏感性。但是，本研究中16HBE 等細(xì)胞ST 的轉(zhuǎn)錄水平與其受體含量、病毒結(jié)合量結(jié)果并不完全一致，這可能是因?yàn)镾A 受體并非流感病毒感染傳播的唯一決定因 子[14]；Vero、A549 和CHO-k1 細(xì) 胞 對(duì)Y280 株 敏感，但其ST3GAL4 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平并不高，這可能是因?yàn)镾Aα（2-3）Gal 的合成還受ST3 家族中其它酶的調(diào)控[15]；免疫熒光與流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示，16HBE、Vero 、293T、CHO-k1、Hep-2、A549 細(xì)胞表面AIV 受體SAα（2-3）Gal 的熒光值不高，可能是因?yàn)镸AA I 僅特異性識(shí)別SAα2-3Gal?1-4GlcNAc，而對(duì)SAα2-3Gal?1-3GlcNAc 特異性不強(qiáng)，而該細(xì)胞系表面可能還存在豐富的SAα2-3Gal?1-3GlcNAc。本研究的MDCK、DF-1 中的ST3GAL4 與ST6GAL1 均具有較高的轉(zhuǎn)錄水平，無(wú)法證明單一類(lèi)型ST 與流感病毒感染宿主細(xì)胞能力的相關(guān)性。因此，ST 在流感病毒侵入宿主細(xì)胞中的作用還需進(jìn)一步深入研究。Kosuke Takada 等人發(fā)現(xiàn)，在MDCK 中過(guò)表達(dá)人類(lèi)流感病毒受體[SAα（2-6）Gal]和降低AIV 受體[SAα（2-3）Gal]的表達(dá)水平，其比野生MDCK 更有效支持人源H3N2 流感病毒的分離和生長(zhǎng)，并且保持更高的遺傳穩(wěn)定性[16]。這為后續(xù)研究提供思路，即能否通過(guò)修飾表達(dá)不同ST 的表達(dá)水平，從而改變細(xì)胞對(duì)不同流感病毒的敏感性。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，不同細(xì)胞對(duì)人/禽流感病毒的敏感性存在差異，這與細(xì)胞表面SA 含量以及ST 的轉(zhuǎn)錄水平相關(guān)，這為開(kāi)發(fā)新的適用于流感病毒培養(yǎng)的細(xì)胞提參考依據(jù)。