申識川，劉文正，李 利

（1.濮陽市檢驗檢疫服務中心，河南 濮陽 457000；2.臺前縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河南 臺前 457600；3.營口市食品藥品檢驗檢測中心，遼寧 營口 115004）

豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的以脫水、嚴重腹瀉、嘔吐、腸絨毛萎縮、初生仔豬高死亡率為主要特征的一種接觸性傳染病，是造成哺乳期仔豬死亡的主要疫病之一。我國20世紀50年代開始有該病的報道，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失。如能在發(fā)病早期快速確診該病，對于本病的防治具有非常重要的作用。豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉和豬輪狀病毒病在臨床癥狀、病理變化、流行病學等方面高度相似，僅靠臨床癥狀很難確診。因此，建立準確的豬傳染性胃腸炎病毒的檢測方法意義重大。本文綜述了國內(nèi)近幾年P(guān)CR檢測方法研究進展。

1 豬傳染性胃腸炎病毒概述

TGEV屬于冠狀病毒科成員，該病毒形態(tài)在電鏡下觀察類似于王冠，基因組是連續(xù)單股正鏈RNA，全長28.6 kb，編碼7 個開放閱讀框，編碼4 種結(jié)構(gòu)蛋白和3 種非結(jié)構(gòu)蛋白。目前研究表明，豬傳染性胃腸炎病毒只有一種血清型。

2 豬傳染性胃腸炎病毒PCR檢測方法研究進展

TGEV 傳統(tǒng)的病毒分離、熒光抗體試驗等檢測方法樣品處理繁瑣、耗時長，靈敏度低，不適合推廣應用，隨著PCR 技術(shù)的成熟，相關(guān)儀器和試劑價格的降低，PCR檢測方法在動物傳染病檢測中已成為一種常規(guī)的檢測方法。

2.1 RT-PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

相對于病毒分離鑒定和中和試驗，PCR 檢測具有快速、準確、對人員和設備要求不高的優(yōu)勢，在基層得以廣泛應用。王黎等根據(jù)TGEV的N基因序列建立了檢測TGEV的RT-PCR 方法，并對豬傳染性胃腸炎高發(fā)季節(jié)的四川省成都市、德陽市、綿陽市、遂寧市、南充市各地豬場送檢的疑似病料進行了檢測，檢測結(jié)果表明在四川省的這些地區(qū)TGEV 的感染率非常高，此項研究為該病的防控提供了流行病學資料。滿坤等根據(jù)TGEV的S基因建立的RT-PCR方法從河北某豬場疑似TGEV 的病豬小腸內(nèi)容物中分離出了一株TGEV的強毒株，為進一步研究TGEV的變異情況提供了依據(jù)。

2.2 多重RT-PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

多重PCR技術(shù)是在一個PCR反應體系中加入多對以上引物和多個模板，同時進行擴增的

PCR技術(shù)，可用一種病料通過一次PCR 反應，檢測多種病原體，實現(xiàn)對多種疾病的診斷，被廣泛應用于動物疫病檢測。張坤、何啟蓋根據(jù)Gen Bank 收錄的PEDV M 基因序列、TGEV N 基因序列和豬輪狀病毒（GAR）VP 7 基因序列設計3 對引物，建立了能夠同時檢測PEDV、TGEV 和GAR 的多重PCR 方法，應用該方法檢測了華中地區(qū)75 份腹瀉豬糞樣,結(jié)果表明該方法檢測PEDV、TGEV、GAR 的敏感性高、特異性強, 是一種有效檢測PEDV、TGEV 和GAR的方法。

2.3 熒光定量PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

熒光定量PCR 技術(shù)是近年發(fā)展起來的基因檢測技術(shù)，相對于傳統(tǒng)PCR 具有擴增效率高、靈敏度更高、特異性好、能精確定量等優(yōu)點，而且可以有效避免檢測過程中的污染和假陽性問題。董玲娟等根據(jù)TGEV-TH98株的N基因序列建立的TGEV熒光定量RT-PCR檢測方法，對采自陜西楊凌周邊的30份臨床樣品進行檢測，結(jié)果表明，該方法特異性高、重復性好、敏感性比普通PCR 方法高2個數(shù)量級，可應用于臨床檢測TGEV。龔雙燕等建立的檢測豬初乳的熒光定量PCR方法檢測結(jié)果顯示，熒光定量PCR檢測方法的敏感性高于普通PCR 方法，可以用于豬初乳檢測TGEV。

2.4 多重熒光定量PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

李軍等根據(jù)Gen Bank 中登錄的TGEV 的S 基因、PEDV的S 基因、豬輪狀病毒（PRoV）A 型的NSP 基因序列，建立了針對這3種病毒的多重熒光定量RT-PCR方法，用建立的方法對來自廣西壯族自治區(qū)、廣東省、江蘇省等地的9 個大型豬場的糞便、小腸和乳汁樣品豬腹瀉38份臨床樣品進行了檢測，結(jié)果表明該方法能夠特異性檢測PEDV、TGEV和PRoV，而與其他病原無交叉反應。

2.5 RT-LAMP方法檢測豬傳染性胃腸炎病毒

高睿澤等根據(jù)TGEV N 基因序列設計了兩對反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導等溫擴增（RT-LAMP）引物，建立了針對TGEV-N基因的RT-LAMP快速檢測方法，通過與經(jīng)RT-PCR和ELISA檢測驗證過的47 份臨床樣品進行比對，結(jié)果顯示符合率為100%，表明該方法可用于臨床檢測TGEV。

3 小 結(jié)

以上幾種RT-PCR 檢測方法，都是隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展而建立的，經(jīng)歷了從定性到定量的發(fā)展過程，豬場、動物衛(wèi)生檢疫部門和高校研究所等可以根據(jù)自身條件選擇適合自己的檢測方法。