陳張華，張孝富，林建和，段 茜

（內(nèi)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川內(nèi)江 641100）

在過去的幾十年里，抗生素被用作飼料添加劑來改善動物生長，保護(hù)其免受病原微生物的侵害。但近年來，由于耐藥菌的出現(xiàn)可能對人類健康造成危害，公眾對家畜使用抗生素的擔(dān)憂有所增加，因此，歐盟從1999 年開始禁止將抗生素作為飼料添加劑使用，而我國在2020 年7 月1 日飼料開始全面禁抗。目前人們致力于確定抗生素替代品作為動物行業(yè)的生長促進(jìn)劑（卜孟娟等，2019）。據(jù)報道，葡萄籽提取物所含的原花青素具有抗氧化性能，由C4-C6 或C4-C8 鍵連接的黃烷單元組成，形成二聚體、三聚體、四聚體和多達(dá)15 ～16 個單元的聚合物及少量兒茶素和表兒茶素（Yahara 等，2005）。黃烷化合物具有清除自由基、螯合過渡金屬和調(diào)節(jié)抗氧化酶活性等多種生物效應(yīng)。因此，它們具有抗衰老作用，緩解骨質(zhì)疏松，保護(hù)腎組織免受毒性作用。Selmi 等（2006）報道，從葡萄籽中提取的原花青素具有抗誘變、抗細(xì)胞毒性和抗炎活性。因此，本研究旨在確定日糧添加不同水平的葡萄籽提取物制劑對正?；蛑嗵钦T導(dǎo)的生長豬生長性能和免疫應(yīng)答的影響。

1 材料與方法

1.1 動物分組與飼料配方本研究相當(dāng)于開展了兩個試驗，其一是將體重一致的120 頭生長豬分為4 組，每組30 頭豬，每個重復(fù)6 頭豬。分別在基礎(chǔ)日糧中添加0、50、100 和150 mg/kg 的葡萄籽提取物（購自Provimi 公司）。同時在另外一個試驗中進(jìn)行LPS 誘導(dǎo)試驗，另外選擇90 頭和上述體重一致的豬，分別在基礎(chǔ)日糧中添加0、100 和150 mg/kg 葡萄籽提取物，試驗4 周后進(jìn)行LPS 誘導(dǎo)，即所有豬通過腹腔注射50 μg/kg 體重的大腸桿菌（血清型）。

試驗原料組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 生長性能數(shù)據(jù)記錄試驗開始和試驗結(jié)束（6 周）時按照組別對豬進(jìn)行稱重，每周記錄一次飼料投喂量，以上數(shù)據(jù)用于計算平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.3 血清生化及免疫指標(biāo)在兩個試驗結(jié)束后，每個重復(fù)選擇2 頭體重接近的豬采血5 mL，試驗1 全血用于分離血清，試驗2 全血加入抗凝劑。試驗1 中的血清用試劑盒測定肌酸酐、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶活性、膽固醇、總蛋白、白蛋白和尿素氮含量。試驗2 全血用于分析LPS 誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后24 h 的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板計數(shù)、血紅蛋白濃度、血清容積及免疫指標(biāo)（IgM、IgG、IgA、IL-1β、IL-6 和TNF-α）

1.4 統(tǒng)計分析試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，P ＜0.05 表示差異顯著。

表1 試驗原料組成及營養(yǎng)水平

表2 葡萄籽提取物對生長性能的影響

表3 葡萄籽提取物對血清生化指標(biāo)的影響

2 試驗結(jié)果

2.1 葡萄籽提取物對豬生長性能的影響由表2 可知，日糧添加50、100 和150 mg/kg 葡萄籽提取物對育肥豬初重、末重、日增重和采食量均無顯著影響（P ＞0.05），但與對照組和50 mg/kg 葡萄籽提取物組相比，100 和150 mg/kg 葡萄籽提取物組料重比分別顯著降低10.02%、10.43% 和13.27%、13.66%（P ＜0.05）。

2.2 葡萄籽提取物對豬血清生化指標(biāo)的影響由表3 可知，對照組血清肌酸酐濃度較150 mg/kg葡萄籽提取物組顯著提高了20.99%（P ＜0.05），但谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、超氧化物歧化酶（SOD）和乳酸脫氫酶活性表現(xiàn)最低（P ＜0.05）。對照組和葡萄籽提取物組對血清膽固醇、白蛋白、總蛋白和尿素氮濃度的影響無顯著差異（P ＞0.05）。

2.3 葡萄籽提取物對豬血細(xì)胞計數(shù)和免疫指標(biāo)的影響由表4 可知，各組血液白細(xì)胞、紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白濃度和血球容積在LPS 誘導(dǎo)前后均無顯著差異（P ＞0.05），但LPS 誘導(dǎo)后24 h，對照組血小板含量較150 mg/kg 葡萄籽提取物組顯著提高了26.29%（P ＜0.05）。LPS 處理后2 和4 h，對照組血液IL-1β、TNF-α 及LPS 處理后4 h 血液IL-6 濃度均表現(xiàn)最高（P ＜0.05）。

表4 葡萄籽提取物對血細(xì)胞計數(shù)和免疫指標(biāo)的影響

3 討論

已發(fā)表的文章顯示，葡萄籽提取物對采食量或生長性能的影響存在差異，這些差異完全或部分與實驗飼料或所用葡萄籽提取物中原花青素水平的差異有關(guān)（Lohakare 等，2005）。本研究結(jié)果表明，葡萄籽提取物可以改善生長豬飼料效率及抗氧化活性，其有利影響可能與促進(jìn)免疫反應(yīng)，減少能源需求，保持動物健康有關(guān)。

血尿素氮和血清肌酐是評估腎功能和健康的指標(biāo)，其中Shi 等（2003）報道，葡萄籽提取物中的原花青素抗氧化作用大約是維生素C 或維生素E 的50 倍。原花青素可以減輕慶大霉素誘導(dǎo)的腎臟損傷（Safa 等，2010）。在本研究中，葡萄籽提取物處理也降低了肌酸酐的濃度，表明它可能對腎臟健康有益。LPS 作為革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的組成部分，可誘導(dǎo)許多免疫防御功能所需基因的表達(dá)（常廣軍，2015）。因此，用LPS 誘導(dǎo)檢測葡萄籽提取物對炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的抑制作用可行。因此，本研究證實了其抑制多種細(xì)胞因子產(chǎn)生的能力，從而提高了豬的抗炎作用。

原花青素是從葡萄籽中提取的聚合化合物，可調(diào)節(jié)血小板功能，降低血栓形成風(fēng)險（徐明璐等，2017）。Karen 等（2003）報道，原花青素干擾氧化過程，降低血小板活化和增加二十烷類的合成，這些反應(yīng)導(dǎo)致血小板活化降低，從而降低血小板濃度。在本研究中，與對照組相比，150 mg/kg原花青素組血小板濃度也較低，這表明原花青素可抑制LPS 誘導(dǎo)的豬的血小板聚集。一些促炎細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-6 和IL-1β 編碼NFkB目標(biāo)基因的激活途徑，NFkB 是促炎細(xì)胞因子的重要轉(zhuǎn)錄激活因子，其表達(dá)是由促炎刺激和基因毒性應(yīng)激（Yang 等，2008）。原花青素強(qiáng)大的抗炎特性已在大鼠和小鼠身上得到證實（Li 等，2001）。在本項研究中我們評估了血清細(xì)胞因子濃度與日糧中使用葡萄籽提取物和LPS 刺激免疫系統(tǒng)的關(guān)系。正如預(yù)期，原花青素降低了LPS 介導(dǎo)的生長豬血液IL-1β、IL-6 和TNF-α 濃度。

4 結(jié)論

綜上所述，日糧中添加葡萄籽提取物有助于防止LSP 誘導(dǎo)后生長豬的免疫過度反應(yīng)。此外，葡萄籽提取物可提高飼料效率，降低豬血清肌酐濃度。