張洪科

（貴州省盤州市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科, 貴州 盤州）

0 引言

分子技術(shù)在當(dāng)前醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展的大形勢(shì)下也得到了很大的發(fā)展，分子技術(shù)被廣泛用于微生物檢驗(yàn)工作中，使我們可以從RNA、DNA中檢驗(yàn)到病原微生物，對(duì)患者所患的疾病進(jìn)行及時(shí)、有效地診斷，提高診斷準(zhǔn)確率，以確?；颊呒霸缃邮苤委?。PCR技術(shù)的應(yīng)用，可以快速診斷病毒基因，對(duì)病原微生物進(jìn)行準(zhǔn)確地鑒別，同時(shí)其也可以用在診斷腫瘤疾病中。核酸探針技術(shù)應(yīng)用于病原菌的檢測(cè)中[1]，具有如下優(yōu)勢(shì)：時(shí)間段、速度快、準(zhǔn)確性高、敏感性高等，應(yīng)用生物芯片技術(shù)可以對(duì)待檢產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，信息量與其他兩種技術(shù)相比更大。常規(guī)的微生物檢驗(yàn)技術(shù)的檢驗(yàn)根據(jù)就是依靠微生物的狀態(tài)來(lái)進(jìn)行檢驗(yàn)，但是對(duì)待相同種類的微生物，不管是生理生化性狀還是形態(tài)，都是存在一定的差異性的，由此，常規(guī)的微生物檢驗(yàn)技術(shù)所得到的檢測(cè)結(jié)果受到顯著影響，常常不能得到準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果。而應(yīng)用分子技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)就具有較多的優(yōu)勢(shì)，主要為：檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)單、效率高、可靠性高[2]，逐漸在臨床上得到廣泛應(yīng)用，并受到人們的一致好評(píng)。下面我就對(duì)PCR技術(shù)、核酸探針技術(shù)、生物芯片技術(shù)以及其他的分子技術(shù)進(jìn)行分析探討。

1 PCR 技術(shù)

PCR技術(shù)指的是一種擴(kuò)增DNA的技術(shù)，這種技術(shù)能夠大幅度的增加微量的DNA，只要有少量的DNA通過(guò)應(yīng)用PCR技術(shù)就能將其擴(kuò)大幾倍，由此，PCR技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用在兇殺案的檢測(cè)中。1985年，聚合酶鏈反應(yīng)首次被人們發(fā)現(xiàn)，這就是PCR技術(shù)的前身，PCR技術(shù)應(yīng)用區(qū)域比較廣泛，隨著時(shí)代的發(fā)展，其發(fā)展速度也較快，相關(guān)人員對(duì)PCR技術(shù)進(jìn)行了延伸，將聚合酶鏈反應(yīng)的特性和原理不斷進(jìn)行深入挖掘，并且通過(guò)多年研究，將其不斷完善，到目前為止，PCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用在檢測(cè)病原微生物工作中。但是，PCR技術(shù)也不是完美的，其也存在一些缺點(diǎn)，那就是其對(duì)于一些形成引物二聚體、產(chǎn)生假陽(yáng)性、存在RNA的檢測(cè)，操作起來(lái)是相對(duì)復(fù)雜的，因此，研究人員也PCR技術(shù)進(jìn)行了不斷改造與完善，研發(fā)出新型的PCR技術(shù)，比如：巢式PCR技術(shù)、熱啟動(dòng)PCR技術(shù)等。

2 核酸探針技術(shù)

核酸探針指的是帶有標(biāo)記的具有特異性的DNA片段，其是以固定為工作原則，使其與目的基因?qū)嵤╇s交，并且應(yīng)用特定的方法對(duì)標(biāo)記物實(shí)施測(cè)定操作[3]，目前在臨床上比較常見(jiàn)的探針標(biāo)記方法主要為放射性標(biāo)記、非放射性標(biāo)記，而非放射性標(biāo)記的應(yīng)用較為常見(jiàn)且廣泛，原因是這種方法更加直觀并且準(zhǔn)確，檢測(cè)指標(biāo)一般包括產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、乙型肝炎病毒等。

臨床微生物檢驗(yàn)應(yīng)用到核酸探針技術(shù)主要包括這幾種：

2.1 流行病學(xué)的調(diào)查研究，區(qū)分有毒與無(wú)毒的菌株。

2.2 通過(guò)生化鑒定無(wú)效、不能夠培養(yǎng)、診斷抗原缺失的病原體通過(guò)該技術(shù)檢測(cè)。

2.3 細(xì)菌間的抗藥基因通過(guò)應(yīng)用該技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)[4]。

2.4 病毒病病人，例如免疫性缺陷病毒、肝炎病毒等病人應(yīng)用該技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

2.5 食品是否被耐藥菌株感染通過(guò)該技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

3 生物芯片技術(shù)

生物芯片技術(shù)屬于一種比較新穎的檢測(cè)技術(shù)，其是將多種尖端技術(shù)進(jìn)行融合，主要包括微電子學(xué)、生物學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)等高端技術(shù)，生物芯片技術(shù)是將玻片作為載體[5]，將生物活性分子作為排列序列，然后經(jīng)過(guò)一系列的排列組合，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)多種疾病進(jìn)行檢測(cè)的目的。此種檢測(cè)技術(shù)的準(zhǔn)確性較高，在臨床上廣泛用于病原菌的檢測(cè)過(guò)程中。

生物芯片作為現(xiàn)代社會(huì)的高端技術(shù)，呈現(xiàn)為較多的優(yōu)勢(shì)，主要為：通過(guò)生物芯片對(duì)病原菌進(jìn)行檢測(cè)，得到的結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性，應(yīng)用連續(xù)檢測(cè)方法對(duì)多種疾病進(jìn)行檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單，快速省時(shí)，對(duì)于基因序列的分析、病原微生物的診斷、病原菌的詳細(xì)情況均能夠準(zhǔn)確反映，另外，通過(guò)生物芯片技術(shù)的應(yīng)用，可以對(duì)抗體產(chǎn)生之前的感染情況實(shí)施檢測(cè)，由此能夠在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出是否出現(xiàn)了感染情況，基因芯片還可以對(duì)病原體的種類進(jìn)行檢測(cè)。隨著時(shí)代的發(fā)展，科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，我們相信，生物芯片也會(huì)逐漸優(yōu)化，總有一天應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)能夠?qū)⑺械牟≡紮z測(cè)出來(lái)[6]。

4 其他種類的分子技術(shù)

隨著科技的不斷發(fā)展，各種各樣的分子技術(shù)被研究出來(lái)，主要有DNA分子標(biāo)記技術(shù)、高效液相色譜法、氣相色譜法等分子技術(shù)，在進(jìn)行微生物檢驗(yàn)的時(shí)候就可以根據(jù)實(shí)際情況選擇最佳的分子技術(shù)加以應(yīng)用，大大提高了檢驗(yàn)準(zhǔn)確率和工作效率。在目前形勢(shì)下，分子技術(shù)的主要發(fā)展方向就是高度自動(dòng)化、高度靈敏性等，將各個(gè)技術(shù)應(yīng)用于多個(gè)區(qū)域當(dāng)中，與多種學(xué)科相融合，將檢驗(yàn)范圍不斷擴(kuò)大，對(duì)分子技術(shù)進(jìn)行不斷更新，其應(yīng)用在臨床微生物的檢驗(yàn)也變得越來(lái)越廣泛了。

5 討論

在微生物檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)用分子技術(shù)是十分重要的，目前的分子技術(shù)種類在不斷增多，其中各有其優(yōu)缺點(diǎn)[7]，而我們?cè)趯?duì)微生物檢測(cè)的時(shí)候，也可以對(duì)分子技術(shù)進(jìn)行合理選擇，選擇最為合適的分子技術(shù)進(jìn)行操作，再將所有的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，從生理生化角度將菌株進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定，確認(rèn)菌株的種類，對(duì)病原菌的類型進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，通過(guò)分子技術(shù)能夠快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)微生物，意義重大[8]。