宋金龍,甘金華,穆迎春*,張洪玉,韓剛,劉璐,李曄
(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100141; 2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所,湖北 武漢 430223)
漁藥在降低水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)病率和死亡率、提高餌料利用率和促進(jìn)生長等方面有重要作用,科學(xué)合理使用漁藥是保證水產(chǎn)品安全的重要措施。2005年漁藥地標(biāo)升級為國標(biāo)后,經(jīng)過不斷廢止更新,目前允許使用的漁藥以中草藥為主,殺真菌藥僅1種,抗菌藥12種,驅(qū)蟲和殺蟲藥共15種[1],現(xiàn)有的國標(biāo)漁藥無法滿足產(chǎn)業(yè)需求。加之經(jīng)過多年使用,多數(shù)病原菌、寄生蟲等病原體已對國標(biāo)漁藥產(chǎn)生耐藥性[2],漁藥企業(yè)不得不尋求更好的代替途徑。
近年來,個別未參加“升標(biāo)協(xié)作組”的企業(yè)將沒有升為國家標(biāo)準(zhǔn)的原漁藥等產(chǎn)品以“非規(guī)范藥品”名義進(jìn)行銷售[3]。由于“非規(guī)范藥品”銷售企業(yè)只需根據(jù)企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)銷售,沒有明確管理法規(guī)監(jiān)管,市場迅速擴(kuò)大,呈逐年增長趨勢,年銷售額估算超過100億元,占漁藥銷售總值70%以上,涉及生產(chǎn)企業(yè)1 000余家,商品名稱10 000余種[4-5]。化學(xué)類水質(zhì)底質(zhì)改良劑、微生物制劑及免疫增強(qiáng)劑等水產(chǎn)養(yǎng)殖用“非規(guī)范藥品”的市場規(guī)模遠(yuǎn)大于國標(biāo)漁藥,甚至一些殺蟲藥、除草劑等 “國標(biāo)藥品”中的主要成分也被包裝成“非規(guī)范藥品”在市場上銷售,形成了“亂象多、禁不住、管不了、不清楚”的特殊產(chǎn)業(yè)形態(tài)[6-7]。
當(dāng)前,“非規(guī)范藥品”使用中存在風(fēng)險研究缺失、成分不明、無生產(chǎn)技術(shù)及質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)、產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊等現(xiàn)象,加之無明確管理法規(guī),監(jiān)管缺位,水產(chǎn)“非規(guī)范藥品”市場安全隱患突出,給水產(chǎn)品質(zhì)量安全帶來較大風(fēng)險[8-10]。近年來,對國家產(chǎn)地水產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控計劃中發(fā)現(xiàn)的陽性樣品進(jìn)行溯源,多數(shù)養(yǎng)殖戶均表示未使用過違禁藥品,推測有可能是來自“非規(guī)范藥品”的使用[11]。
2019年,在農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管司部署下,中國水產(chǎn)科學(xué)研究院質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)研究中心牽頭組織開展了養(yǎng)殖環(huán)節(jié)“非規(guī)范藥品”使用質(zhì)量安全風(fēng)險隱患排查和水產(chǎn)養(yǎng)殖用獸藥及其它投入品安全隱患排查,共采集樣品397個,通過實(shí)地調(diào)研、測試分析和綜合研判,初步掌握了水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)“非規(guī)范藥品”安全隱患基本情況,以期為制訂更加科學(xué)的監(jiān)管措施提供支撐。
供試“非規(guī)范藥品”通過實(shí)地或網(wǎng)絡(luò)購買,共采集華北、東北、華東、華中及華南等5個水產(chǎn)養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)“非規(guī)范藥品”樣品397個,涵蓋北京、天津、河北、黑龍江、遼寧、吉林、湖北、湖南、江蘇、安徽、廣東及廣西等12個省、自治區(qū)、直轄市的淡水、海水養(yǎng)殖環(huán)節(jié)。按照“非規(guī)范藥品”性質(zhì)差異分為化學(xué)類和微生物類“非規(guī)范藥品”,其中化學(xué)類樣品295個,微生物類樣品102個。
1.2.1 樣品預(yù)處理
將固態(tài)、半固態(tài)樣品“非規(guī)范藥品”充分均質(zhì),稱取(5.00 ± 0.05)g于50 mL離心管中,加入500 mg MgSO4(無水),再加入10 mL 含1%甲酸的乙腈溶液,渦旋1 min后超聲提取10 min,5 ℃,10 000 r/min 冷凍離心10 min,取出上清液;殘渣再加入10 mL 含1%甲酸的乙腈溶液,重復(fù)上述提取步驟,合并上清液;上清液經(jīng)40 ℃旋蒸至干后用1 mL 含1%甲酸的乙腈溶液復(fù)溶,取500 μL復(fù)溶液加500 μL水混勻,5 ℃、10 000 r/min 離心10 min,再取200 μL上清液加800 μL水混勻,過0.22 μm水相濾膜后上機(jī)檢測。
液態(tài)樣品直接準(zhǔn)確吸取1 mL于15 mL的離心管中,用超純水稀釋10倍后,5 ℃、10 000 r/min離心10 min,取上清過0. 22 μm水相濾膜后上機(jī)檢測。
1.2.2 液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用檢測條件
色譜柱采用Thermo C18柱(150 mm × 2.1 mm,5 μm);柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL;流速:0.2 mL/min;流動相:(A)甲醇,(B)5 mmol乙酸銨+0.1%甲酸水溶液,洗脫梯度:0~2 min,30%~90%A;2~8 min,90%;8~10 min,30%。
電噴霧源正負(fù)離子模式(ESI); 檢測方式: 飛行時間質(zhì)譜(TOF-MS)全離子掃描;TOF-MS掃描范圍:m/z100~800;電離電壓(IS):5 500 V; 霧化氣(GS1):55 kPa; 輔助加熱氣(GS2):55 kPa; 氣簾氣(CUR):25 kPa; 輔助加熱氣溫度: 550 ℃; 去簇電壓(DP):70 V; 在上述質(zhì)譜條件下,增加信息相關(guān)二級全掃描(Information dependent acquisition,IDA),監(jiān)測響應(yīng)值超過1 000的化合物,得到其子離子信息,掃描范圍:m/z50~800; 碰撞能量(CE):35 eV; 擴(kuò)展碰撞能量(CES):15 eV。
1.2.3 “非規(guī)范藥品”成分篩查與定量分析
在確定的色譜-質(zhì)譜條件下獲得化合物飛行時間全掃描和二級質(zhì)譜圖,建立化合物的高分辨二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫,包括化合物名稱、分子式、CAS 編號、保留時間、相對分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)式等信息。用Peak View軟件中的Master View功能處理采集后的數(shù)據(jù),根據(jù)各化合物的保留時間、一級精確質(zhì)量數(shù)和質(zhì)量偏差、同位素峰分布及高分辨二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果進(jìn)行定性分析,以一級提取離子的峰面積進(jìn)行定量測定。
1.3.1 有效菌和雜菌檢測方法
參照《農(nóng)用微生物菌劑標(biāo)準(zhǔn)》(GB 20287—2006)中農(nóng)用微生物菌劑產(chǎn)品的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)對有效活菌數(shù)、霉菌數(shù)、糞大腸菌群數(shù)和溶血性的檢測結(jié)果進(jìn)行判定(表1)[12]。
表1 檢測項(xiàng)目及判定標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 The detection items and the criterion
1.3.2 溶血性檢測方法
顆粒或粉劑樣品取1 g加入1 mL無菌生理鹽水中,制成受試物。每個樣品取3支試管,加入無菌脫纖維抗凝兔血和無菌生理鹽水(表2),設(shè)置陰性對照和陽性對照組?;靹蚝笾糜?37.0±0.5) ℃恒溫水浴鍋中60 min,10 000 r/min離心5 min后取上清,在545 nm波長處測定上清液吸光度。溶血率計算公式為:
式(1)
共評估水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)化學(xué)類“非規(guī)范藥品”295個,采用高分辨率質(zhì)譜建立“非規(guī)范藥品”成分快速篩查平臺,該平臺可同時對194種抗生素、78種殺蟲劑、59種除草劑及58種抗菌劑進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示,化學(xué)類“非規(guī)范藥品”存在添加藥品甚至違禁用藥情況,檢出藥品添加樣品51個,整體檢出率17.29%。
2.1.1 “非規(guī)范藥品”中藥品成分檢出和濃度情況
根據(jù)《水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥明白紙》(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)漁政管理局發(fā)布,以下簡稱“明白紙”)中藥品類別進(jìn)行判定,檢出禁用藥2種(孔雀石綠和克百威),占檢出樣品總數(shù)的3.92%。檢出批準(zhǔn)用水產(chǎn)獸藥4種(甲霜靈、恩諾沙星、辛硫磷和敵百蟲),占檢出樣品總數(shù)的31.38%。其他未明確的殺菌劑、除草劑和甚至人用抗生素種類27種,分別為:二甲戊靈、魚藤酮、敵草隆、紅霉素、馬拉硫磷、西草凈、喹烯酮、替米考星、撲滅津、西瑪津、莠滅凈、敵敵畏、甲胺磷、啶蟲脒、環(huán)丙沙星、撲草通、噻嗪酮、苯噻草胺、異丙威、雙氯芬酸、撲草凈、醚菊酯、己唑醇、吡蟲啉、林可霉素、吡蚜酮和特丁凈,占檢出樣品總數(shù)的78.43%。
從檢出濃度上看,隱性添加藥品濃度范圍較大,為2.02~28 060.00 mg/kg,其中33個樣品超過1 000 mg/kg,涉及藥品種類9種,包括紅霉素、西草凈、魚藤酮、敵草隆、辛硫磷、替米考星、敵百蟲、喹烯酮和二甲戊靈等。
2.1.2 不同類型“非規(guī)范藥品”檢出情況
根據(jù)化學(xué)類“非規(guī)范藥品”使用功能上的差異,將其初步分為11類,包含水質(zhì)或底質(zhì)改良劑、免疫增強(qiáng)劑、中草藥制劑、外用消毒劑、殺菌劑、殺藻與除草劑、化學(xué)增氧劑、誘食劑、著色或增色劑、促生長劑及酶制劑。其中殺菌劑檢出率最高26.67%,檢出樣品4個,其次為外用消毒劑檢出率26.09%,檢出樣品6個,中草藥制劑檢出率25.00%,檢出樣品7個(圖1)。
圖1 化學(xué)類“非規(guī)范藥品”不同類別的檢出情況Fig.1 The detection of different types in chemical “nonspecification drugs”
共采集102個微生物類“非規(guī)范藥品”,參考《農(nóng)用微生物菌劑標(biāo)準(zhǔn)》(GB 20287—2006)[12],對其檢測結(jié)果進(jìn)行判定。從產(chǎn)品質(zhì)量上看,微生物類“非規(guī)范藥品”質(zhì)量問題主要體現(xiàn)在標(biāo)注微生物與內(nèi)含菌種不符、有效活菌數(shù)不足。從產(chǎn)品安全性上看主要體現(xiàn)在糞大腸菌群、霉菌超標(biāo)以及具有溶血性。
2.2.1. “非規(guī)范藥品”質(zhì)量檢測情況
從質(zhì)量上看,102個樣品中24個有效活菌數(shù)不足,不合格率23.53%;雜菌超標(biāo)的36個,不合格率35.29%,其中2個樣品未檢測到活菌。對照樣品包裝標(biāo)注信息,37個樣品包裝未標(biāo)注菌含量,未標(biāo)注率36.27%,16個樣品實(shí)測菌含量低于包裝標(biāo)注量的60%以上,占包裝標(biāo)注樣品總數(shù)的24.62%。從實(shí)際內(nèi)含微生物種類上看,36個樣品雜菌率超標(biāo),不合格率35.29%。102個樣品包裝標(biāo)注了數(shù)十種微生物,但是僅檢出11種具有明確功能的微生物(圖2)。
圖2 微生物類“非規(guī)范藥品”菌種種類檢測情況Fig.2 The detection of different bacterial species in microbial “nonspecification drugs”
2.2.2 “非規(guī)范藥品”安全性檢測情況
從安全性上看,102個“非規(guī)范藥品”中,16個樣品霉菌超標(biāo)(復(fù)合微生態(tài)制劑7個、芽孢桿菌制劑5個及乳酸菌制劑4個),不合格率15.69 %。霉菌最高檢出量1.23×107個/g,為標(biāo)準(zhǔn)限量40倍。從糞大腸菌群數(shù)上看,11個樣品糞大腸菌群數(shù)檢出量超標(biāo),不合格率10.78%。超標(biāo)樣品均為復(fù)合微生態(tài)制劑,占復(fù)合微生態(tài)制劑總數(shù)32.35%。雖糞大腸菌群樣品檢出個數(shù)相對較少,但檢出量嚴(yán)重超標(biāo),其中產(chǎn)品名稱為“EM水產(chǎn)菌”的樣品,糞大腸菌群數(shù)2.56×105MPN/mL,為標(biāo)準(zhǔn)限量的2 560倍。8個樣品檢測出具有溶血性,不合格率7.84%。其中4個乳酸菌制劑檢測結(jié)果超標(biāo),占不合格樣品總數(shù)50%。從致病菌檢測結(jié)果上看,本次排查檢出2種疑似致病菌,分屬弓形桿菌屬(Arcobacter)和擬桿菌屬(Bacteroides)。
3.1.1 隱形添加禁用藥物對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的隱患
從檢出藥品類別上看,共檢出2種禁用藥,其中孔雀石綠是一種化工染料,曾一度用于治療水霉病和對原蟲病的控制,其代謝產(chǎn)物無色孔雀石綠在魚體內(nèi)和環(huán)境中殘留時間長,具有潛在的致癌、致畸和致突變等危害[13-14];克百威(呋喃丹)是一種殺蟲劑,根據(jù)中國農(nóng)藥毒性分級標(biāo)準(zhǔn),屬高毒農(nóng)藥,且持效期長,因此,原農(nóng)業(yè)部第193號公告明確禁止在所有食品動物養(yǎng)殖過程中使用孔雀石綠和克百威[15-18]。禁用藥物的隱形添加不僅對養(yǎng)殖環(huán)境造成污染,同時對水產(chǎn)動物及人類的健康安全構(gòu)成風(fēng)險隱患。
3.1.2 隱形添加其他藥品對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的隱患
除禁用藥檢出以外,其他藥品的隱性添加對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的風(fēng)險隱患也不容小覷。檢出的殺藻與除草劑中,二甲戊靈含量最高,其屬于苯胺類除草劑,在水產(chǎn)養(yǎng)殖中用于防治車輪蟲病害,但易在魚體肝臟中富集,導(dǎo)致肝臟發(fā)生病變,且持效期長[19-21]。其次是敵草隆,其雖屬低毒除草劑,但對水生生物有極高毒性,具有潛在致癌風(fēng)險[22]。二甲戊靈和敵草隆如在水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)長期使用,可能對養(yǎng)殖水環(huán)境、水生生物及人體健康構(gòu)成安全隱患。檢出的抗菌藥中,紅霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星和替米考星含量均較高,其在水產(chǎn)品中殘留會危害人體健康,產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性,加大防治難度[23-25]。檢出的殺蟲劑中,部分藥品對水生生物具有一定的毒性,如魚藤酮、醚菊酯、敵敵畏、甲胺磷和辛硫磷等[26-29]。其中魚藤酮對水生生物有極高毒性,多數(shù)魚類的致死濃度為0.025 mg/L[30-31]。
由于檢出的所有隱性添加藥物均未在產(chǎn)品標(biāo)簽上標(biāo)識,并且部分“非規(guī)范藥品”藥物成分添加濃度較高,養(yǎng)殖者在不知情的情況下使用,經(jīng)養(yǎng)殖環(huán)境不斷蓄積,很容易給水產(chǎn)品和人類健康帶來隱患。
3.2.1 致病菌對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的隱患
水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)常見致病菌和條件致病菌有副溶血性孤菌(Vibrioparahaemolyticus)、創(chuàng)傷孤菌(Vibriovulnificus)、霍亂孤菌(Vibriocholerae)、沙門氏菌(Salmonella)、氣單胞菌(Aeromonas)和大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)等。本次排查有2種疑似致病菌(弓形桿菌屬、擬桿菌屬)和大腸桿菌被檢出,其中11個樣品大腸桿菌檢測結(jié)果超標(biāo),不合格率10.78%。弓形桿菌主要分離于水體環(huán)境、畜禽制品中,可通過水體環(huán)境介導(dǎo)到人體腸道環(huán)境中,為水源性致病菌,與人類胃腸炎和菌血癥有關(guān)[32-33]。擬桿菌可寄居于人和動物腸道內(nèi),過量寄生會引起人類顱內(nèi)、腹腔和盆腔內(nèi)感染[34]。大腸桿菌主要分布在水體環(huán)境及人和動物的腸道中,可引起出血性腸炎、溶血性貧血和溶血尿毒癥等疾病[35]。
3.2.2 霉菌對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的隱患
霉菌是形成分枝菌絲的真菌的統(tǒng)稱,有著極強(qiáng)的繁殖能力,其可通過寄生或分泌有毒代謝產(chǎn)物,使水產(chǎn)養(yǎng)殖動物感染真菌性疾病、產(chǎn)生急性或慢性中毒、嚴(yán)重?fù)p傷多種臟器、有致畸或致癌作用[36-38]。霉菌毒素為霉菌分泌的有毒代謝產(chǎn)物,通過飼料或養(yǎng)殖環(huán)境進(jìn)入水產(chǎn)養(yǎng)殖動物體內(nèi),通過抑制水產(chǎn)動物免疫機(jī)能,引起繼發(fā)性感染,或引起動物體急性或慢性毒性,嚴(yán)重?fù)p害肝臟、腎臟及腸道組織等多種器官[36-37]。本次排查發(fā)現(xiàn)16個樣品霉菌檢測結(jié)果超標(biāo),不合格率15.69%。本次排查出的水霉病為霉菌寄生在水生動物體表引起的典型真菌類疾病之一,感染部位主要為體表受傷組織,病癥表現(xiàn)為早期無明顯癥狀,中期于病灶部位形成灰白色如棉絮狀覆蓋物,晚期可導(dǎo)致養(yǎng)殖生物細(xì)胞組織黏附、皮膚潰爛和肌肉組織大量壞死,嚴(yán)重時可導(dǎo)致死亡[38-39]。
3.2.3 微生物溶血性對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的隱患
溶血性試驗(yàn)是觀察受試物是否能夠引起細(xì)胞溶血和紅細(xì)胞凝聚等反應(yīng),是藥物安全性評價的重要組成部分[40-41]。本次排查發(fā)現(xiàn)8個樣品溶血性檢測結(jié)果超標(biāo),不合格率7.84%。水產(chǎn)養(yǎng)殖病原菌可產(chǎn)生細(xì)菌性溶血素,引起紅血球細(xì)胞溶解,產(chǎn)生溶血性[42]。其中溶血性鏈球菌(Streptococcushemolyticus)在自然界中分布較廣(水、空氣、塵埃及糞便),通過直接接觸或食用對人類(上呼吸道、下消化道和泌尿生殖道)造成化膿性感染,食用后易引起急性腸胃炎,嚴(yán)重時會引起脫水及其他并發(fā)癥[43-44]。
考慮到中國水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)際,對水產(chǎn)“非規(guī)范藥品”管理既不能一禁了之,也不能放任其無序發(fā)展。建議根據(jù)“應(yīng)藥則藥,宜非則非”原則,對“非規(guī)范藥品”實(shí)施分類管理使用。對于確有治療功能除抗菌藥以外的“非規(guī)范藥品”,應(yīng)加快開展研究和評估工作,建議實(shí)施“先登記注冊并逐步過渡到審批”的管理政策。如魚藤酮(殺蟲劑)、二硫氰基甲烷(消毒劑)及硫醚沙星(消毒劑)等。
對于環(huán)境改良類和微生態(tài)制劑類等“非規(guī)范藥品”,建議組織相關(guān)技術(shù)力量深入研究,規(guī)范使用方法,降低市場準(zhǔn)入門檻,借鑒農(nóng)用肥料登記管理制度進(jìn)行管理。如有機(jī)肥、無機(jī)肥類產(chǎn)品,研究建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和使用規(guī)范;微生態(tài)制劑類產(chǎn)品,研究建立可以用于水產(chǎn)微生態(tài)制劑的微生物菌種名單,加強(qiáng)上市前的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測和安全性審查。
在前期排查的基礎(chǔ)上,聚焦“非規(guī)范藥品”排查種類,更加精準(zhǔn)地確定篩查目錄和范圍,增加先鋒類、百草枯、草甘膦、沙拉沙星、亞甲基藍(lán)、代森銨和代森錳鋅等藥品的排查。對已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的使用量大、范圍廣、危害大的藥品,如西草凈、特丁凈和二甲戊靈等開展深入評估,掌握其代謝消除規(guī)律,提出防控措施。同時開展抗生素類水產(chǎn)“非規(guī)范藥品”管控措施研究,掌握主要國家和國際組織對此類物質(zhì)的管控措施,提出適合國情的管控措施建議。
依據(jù)《中華人民共和國產(chǎn)品質(zhì)量法》、《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》和《獸藥管理?xiàng)l例》等法律法規(guī)要求,嚴(yán)格“非規(guī)范藥品”包裝標(biāo)識。對于產(chǎn)品成分標(biāo)識不明確、功能標(biāo)注不實(shí)、使用方法不詳、成分含量不準(zhǔn)或者不標(biāo)明有效成分的產(chǎn)品等,依法依規(guī)進(jìn)行處罰。同時,借助國家實(shí)施食用農(nóng)產(chǎn)品合格證的歷史機(jī)遇,通過推行水產(chǎn)品合格證制度,強(qiáng)化落實(shí)生產(chǎn)經(jīng)營者的主體責(zé)任,不斷加大對養(yǎng)殖戶的科普宣傳和技術(shù)培訓(xùn),引導(dǎo)養(yǎng)殖生產(chǎn)者科學(xué)認(rèn)識和規(guī)范使用“非規(guī)范藥品”,防范降低盲目用藥給水產(chǎn)品造成的安全隱患。