廣東省江門市新會區(qū)司前人民醫(yī)院（529159）李妍

脊髓性肌萎縮癥（SMA）作為臨床中較為常見的運動神經(jīng)元遺傳性疾病，其是嬰幼兒階段中最為常見的疾病，發(fā)病率約為1/6000～1/11000，攜帶率為1/38～1/70[1][2]。本研究以江門區(qū)作為觀察對象，利用江門市婦幼保健院在江門地區(qū)最大孕婦產(chǎn)檢量這一獨特的優(yōu)勢，分析了先進(jìn)技術(shù)對孕婦SMA篩查率和產(chǎn)前診斷的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究于2017年1月～2018年12月選取江門地區(qū)8431名孕婦作為調(diào)查對象，采用熒光定量PCR方法對脊髓性肌萎縮癥（Spinal muscular atrophy，SMA）攜帶率進(jìn)行篩查，并采用第二代高通量測序技術(shù)（NGS）結(jié)合第三代測序方法，對SMNI第7外顯子缺失區(qū)域和斷裂點進(jìn)行分析。所有孕婦的年齡范圍為23歲～45歲，平均年齡范圍（27.35±2.14）歲。經(jīng)江門市婦幼保健院、司前人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并與患者簽署知情同意書后進(jìn)行外周血樣采集。

1.2 方法 在展開研究的過程中，首先對DNA進(jìn)行提取，采用的方法是血液標(biāo)本采集，樣本量為3mL。在血樣采集的過程中，采用由上海生工生物技術(shù)有限公司提供的全血DNA提取試劑盒（Universal Genomic DNA Extaction Kit Ver.3.0）提取DNA。與此同時，采用分光光度計對提取的DNA濃度進(jìn)行檢測。在研究的過程中，將DNA濃度統(tǒng)一為50μg/μL，并將其放置在溫度為4℃的環(huán)境下進(jìn)行保存有備使用。

篩查結(jié)束后，建立江門地區(qū)孕婦SMA攜帶者人群庫，并利用由美國llumina公司提供的二代測序儀以及由Sequel該公司提供的三代測序平臺，對全基因組進(jìn)行測序和數(shù)據(jù)分析，以對該地區(qū)SMA的攜帶情況等進(jìn)行整理和分析。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察指標(biāo)為SMA攜帶率以及SMNI外顯因子的缺失情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件，對攜帶率等計數(shù)資料進(jìn)行統(tǒng)計，并采用（%）表示。

2 結(jié)果

8431名孕婦中，SMA攜帶者190例，攜帶率為2.25%。其中，83名孕婦存在SMNI第7外顯子缺失，占比為43.68%。51名孕婦存在第8外顯子缺失，占比為26.84%。SMNI第7外顯子缺失中，純合缺失攜帶者26例，占比為31.33%，雜合缺失攜帶者57例，占比為68.67%。對7對SAM攜帶者夫婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，避免2例SAM患兒出生。

3 討論

現(xiàn)階段，我國是SMA發(fā)病率最高的國家之一，其攜帶者已高達(dá)3000萬人。也就是說，目前SMA是一種世界性的常見常染色體隱性遺傳神經(jīng)肌肉疾病之一，其也是影響嬰幼兒生存的關(guān)鍵[3]。在孕期對孕婦SMA攜帶情況進(jìn)行篩查，屬于一級預(yù)防，其不僅能夠避免SMA患兒的出生，而且還能夠提高我國新生兒的人口質(zhì)量。除此之外，在對SMA患兒展開治療的過程中，其每年的治療費用高達(dá)75萬美元左右，因而采用先進(jìn)的技術(shù)，對孕婦SMA攜帶率進(jìn)行篩查，以預(yù)防SMA患兒的出生，也是一種經(jīng)濟(jì)且有效的SMA防治方法，進(jìn)而對減輕家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和社會的負(fù)擔(dān)均有較好的價值。本研究依托江門地區(qū)作為篩查對象，并結(jié)合所擁有的資源，對SMA篩查率進(jìn)行篩查，以對該地區(qū)孕婦SMA攜帶率情況進(jìn)行分析，進(jìn)而為預(yù)防該地區(qū)SMA患者的出生以及提高該地區(qū)人口質(zhì)量提供參考和依據(jù)。

在本研究中，本研究采用熒光定量PCR法對其進(jìn)行篩查，結(jié)果顯示，8431名孕婦中，SMA攜帶者190例，攜帶率為2.25%。其中，83名孕婦存在SMN1第7外顯子缺失，占比為43.68%。51名孕婦存在第8外顯子缺失，占比為26.84%。SMN1第7外顯子缺失中，純合缺失攜帶者26例，占比為31.33%，雜合缺失攜帶者57例，占比為68.67%。對7對SAM攜帶者夫婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，避免2例SAM患兒出生。上述研究結(jié)果說明，江門地區(qū)SMA攜帶者占有一定的比重，主要以SMN1第7外顯子和第8外顯子缺失為主。SMN1基因是SMA致病的主要基因，現(xiàn)階段全國關(guān)于孕婦SMA攜帶率的篩查已經(jīng)給予了一定的關(guān)注和重視，但現(xiàn)有文獻(xiàn)關(guān)于SMA攜帶率篩查及其發(fā)病機(jī)制的研究還比較少。SMA是一組脊髓前角細(xì)胞變性，進(jìn)而導(dǎo)致以肌萎縮、對稱性肌無力作為主要特征的常染色體隱性遺傳的神經(jīng)肌肉病，其主要表現(xiàn)為肌張力低、肌肉萎縮以及腱反射減弱[4]。嬰幼兒期中，SMA是常見的致死性常染色體隱性遺傳病之一，依據(jù)病情嚴(yán)重程度以及發(fā)病的年齡可將SMA分為四型，其中約有80%以上的患兒均為I或II型。SMA主要對SMA的神經(jīng)肌肉表型、相關(guān)脊髓前角細(xì)胞缺失等進(jìn)行了描述。SMN1基因是主要致病基因，其主要有9個外顯因子。SMN1基因的全長為28072bp，其編碼在主要是由294個氨基酸RNA結(jié)合蛋白構(gòu)成。SMN1基因中內(nèi)含子6和內(nèi)含子7以及外顯子7和外顯子8。據(jù)相關(guān)報道顯示，SMN1基因純合缺失是導(dǎo)致SMA的主要致病因，約有94%的患者呈現(xiàn)出這一基因缺失。這一研究結(jié)果與本研究一致[5]。

近年來，SMN1外顯子7缺失呈現(xiàn)增長的趨勢，其對人們的身體健康和生命安全均產(chǎn)生了嚴(yán)重的威脅，國外研究學(xué)者在研究的過程中早就建議在普通人群中篩查SMA，我國是近幾年才開始給予關(guān)注和重視的。目前，我國采用的篩查技術(shù)主要是以多重PCR-DHPLC分析方法雖然具有一定的優(yōu)勢，但也存在一定的不足，如對于少數(shù)人群中攜帶SMN12+0型的患者還無法進(jìn)行確定，因而這一技術(shù)在應(yīng)用的過程中存在一定的不足。第二代高通量測序技術(shù)以及第三代測序技術(shù)結(jié)合應(yīng)用于大樣本篩查中，其不僅具有高敏感性以及高通量和高自動化的優(yōu)勢，因而比較適合大樣本的篩查。與此同時，這一技術(shù)在降低篩查成本以及提高篩查速度方面也有較好的價值。第三代測序技術(shù)的出現(xiàn)，具有長度長、單分子優(yōu)勢，可以檢測基因組區(qū)域結(jié)構(gòu)變異、重復(fù)區(qū)域、區(qū)分真假基因，因而采用先進(jìn)的技術(shù)具有更加快捷和準(zhǔn)確的優(yōu)勢，對于提高產(chǎn)前診斷的準(zhǔn)確性和可靠性更具優(yōu)勢，因而值得推廣和應(yīng)用。

綜上所述，PCR、第二代高通量測序以及第三代測序技術(shù)（TGS）應(yīng)用于孕婦SMA篩查和產(chǎn)前診斷中，對于預(yù)防SMA患兒出生以及提高江門出生人口質(zhì)量有重要的價值和意義，應(yīng)予以重視?，F(xiàn)階段，本研究雖然取得了一定的成果，但關(guān)于SMA致病基因SMN1基因缺失，尤其是第7外顯子的缺失區(qū)域和斷裂點的研究還未取得成果。因此，在數(shù)據(jù)庫完善的基礎(chǔ)上，未來在研究的過程中還應(yīng)對SMN1第7外顯子的缺失域和斷裂點還有待進(jìn)一步的研究，這也是本研究在現(xiàn)有研究結(jié)果基礎(chǔ)上的重點研究方向。