吳 遲，歐陽(yáng)小慶，才 冰，湯從峰，王長(zhǎng)賓，何明遠(yuǎn)

（北京依科世福科技有限公司，北京 101102）

甘藍(lán)（Brassica oleracea L.）又名卷心菜、洋白菜等，富含蛋白質(zhì)、糖類、微量元素以及維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是世界公認(rèn)的保健蔬菜之一[1]。菜青蟲(chóng)是危害甘藍(lán)的一種重要害蟲(chóng)，幼蟲(chóng)取食葉肉不僅形成蟲(chóng)洞，而且傷口易誘發(fā)軟腐病，嚴(yán)重影響甘藍(lán)的產(chǎn)量與品質(zhì)[2-3]。目前，對(duì)菜青蟲(chóng)的防治主要依賴于高毒化學(xué)農(nóng)藥，楊海珍等[4]進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（以下簡(jiǎn)稱甲維鹽）乳油對(duì)甘藍(lán)菜青蟲(chóng)病防效好，王旭民等[5]發(fā)現(xiàn)25%除蟲(chóng)脲可濕性粉劑對(duì)甘藍(lán)菜青蟲(chóng)具有持效性，通常采用葉面直接噴霧防治菜青蟲(chóng)，為保證甘藍(lán)的食用安全性，開(kāi)展甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的殘留和消解動(dòng)態(tài)研究具有重要意義。

甲維鹽的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1，其是一種超高效綠色殺蟲(chóng)劑，通過(guò)作用于昆蟲(chóng)神經(jīng)元突觸或神經(jīng)肌肉突觸，阻斷神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)而使昆蟲(chóng)麻痹、拒食、死亡[6]。除蟲(chóng)脲是苯甲酸基苯基脲類殺蟲(chóng)劑，具有胃毒和觸殺作用[7]，其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。除蟲(chóng)脲主要抑制昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)合成酶的合成，從而抑制幼蟲(chóng)、卵、蛹表皮幾丁質(zhì)的合成，使昆蟲(chóng)不能正常蛻皮、化蛹、羽化和產(chǎn)卵，從而影響害蟲(chóng)的整個(gè)世代[8]。目前甲維鹽和除蟲(chóng)脲的殘留檢測(cè)方法主要包括高效液相色譜-熒光法（HPLC-FLD）[9]、液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）[10]、氣相色譜法（GC）[11]等，前處理大多采用液液萃取[9]、固相萃取[11]、QuEChERS[12]法。其中QuEChERS前處理方法結(jié)合UPLC-MS/MS，靈敏度高，重復(fù)性好，已有研究報(bào)道除蟲(chóng)脲在荔枝[13]、蘋(píng)果[14]、棉葉[15]中的殘留與消解，但有關(guān)除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的殘留與消解未見(jiàn)報(bào)道。

圖1 甲維鹽和除蟲(chóng)脲的結(jié)構(gòu)式

目前，我國(guó)規(guī)定甲維鹽在甘藍(lán)上的最大殘留量（Maximum Residue Limit, MRL）為0.1 mg/kg，除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)上的MRL值為2 mg/kg[16]。為評(píng)價(jià)甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)上的殘留水平及消解動(dòng)態(tài)，筆者開(kāi)展了甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)上的田間消解動(dòng)態(tài)研究，并建立UPLC-MS/MS快速檢測(cè)甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的殘留分析方法，為這2種藥劑的安全使用及安全食用甘藍(lán)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

參照NY/T788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[17]于2019年5—10月分別在湖南張家界、云南昆明、江蘇句容、貴州貴陽(yáng)4個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行10%甲維·除蟲(chóng)脲懸浮劑在甘藍(lán)中的殘留消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)。每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)設(shè)1個(gè)處理小區(qū)和1個(gè)對(duì)照小區(qū)，每小區(qū)面積不小于50 m2，小區(qū)設(shè)置在相鄰區(qū)域，設(shè)置隔離行，避免污染。處理小區(qū)施藥2次，于甘藍(lán)小菜蛾低齡幼蟲(chóng)盛發(fā)期2次噴霧施藥，施藥間隔10 d，施藥制劑量為750 g/hm2（3.75 g/50 m2），末次施藥2 h，1、3、7、10 d后分別采集樣本，切成1～2 cm大小的碎塊，混勻后，四分法縮分，取2份樣本，每份樣本150 g左右，分別裝入可封口的樣品袋中，在低于-18℃條件下保存。

1.2 儀器和試劑

Waters Xevo TQD超高壓液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、色譜柱：ACQUITY UPLCBEH C1（82.1 mm×50 mm，1.7 μm），沃特世科技上海有限公司；MS105分析天平，梅特勒-托利多儀器上海有限公司；YP502N電子天平，上海菁海儀器有限公司；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Eppendorf移液器、TG-18臺(tái)式高速離心機(jī)，四川蜀科儀器有限公司；0.22 μm微孔濾膜，天津博納艾杰爾公司；UMV-2多管旋渦混合器，北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司。1 mL注射器，無(wú)錫市宇壽醫(yī)療器械有限公司。

甲維鹽標(biāo)準(zhǔn)品（純度甲維鹽B1a：95.2%；甲維鹽B1b：3.1%）、除蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.3%），北京勤誠(chéng)亦信科技開(kāi)發(fā)有限公司；N-丙基乙二胺（PSA），天津博納艾杰爾公司；乙腈、甲酸（色譜純，分析純），賽默飛世爾科技有限公司；氯化鈉（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；10%甲維·除蟲(chóng)脲懸浮劑，北京依科世?？萍加邢薰?。

1.3 分析方法

1.3.1 檢測(cè)條件

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，正離子電離模式（ESI+）；毛細(xì)管電壓為3.70 kV，離子源溫度為150℃，去溶劑溫度為500℃，去溶劑氣（N2）流量為1 000 L/Hr，錐孔反吹氣（N2）流量為0 L/Hr。采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），以保留時(shí)間和離子對(duì)（母離子和2個(gè)子離子）信息比較進(jìn)行定性分析，以母離子和響應(yīng)值最高的子離子進(jìn)行定量分析。具體質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

表1 梯度洗脫條件

表2 多重反應(yīng)檢測(cè)（MRM）質(zhì)譜參數(shù)

1.3.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取10.00（±0.05）g甘藍(lán)于50 mL離心管中，加入10 mL去離子水，10 mL乙腈，混勻，超聲提取15 min，然后向離心管中加入5 g NaCl，2 400 r/min渦旋2 min，再4 000 r/min離心5min，移取上清液1.500 mL于裝有50 mg PSA的離心管中，2 400 r/min渦旋2 min，10 000 r/min離心2 min，取上清液過(guò)0.22 μm微膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制及基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用電子天平分別準(zhǔn)確稱取甲維鹽標(biāo)準(zhǔn)品0.010 52 g，除蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)品0.010 12 g，分別用乙腈定容至10.0 mL，配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈作溶劑，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成質(zhì)量濃 度 分 別 為0.01、0.02、0.03、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00 mg/L的甲維鹽、除蟲(chóng)脲的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，單獨(dú)配制質(zhì)量濃度為20.0 mg/L的除蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

分別采用甘藍(lán)基質(zhì)空白提取液作溶劑，將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋10倍，得到質(zhì)量濃度分別為0.001、0.002、0.005、0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L的甲維鹽、除蟲(chóng)脲混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液及2.00 mg/L的除蟲(chóng)脲基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。按1.3.1條件進(jìn)行檢測(cè)，分別以甲維鹽和除蟲(chóng)脲的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 添加回收試驗(yàn)

在空白甘藍(lán)中添加3個(gè)水平濃度甲維鹽、除蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，甲維鹽添加水平分別為0.001、0.10、1.00 mg/kg，除蟲(chóng)脲添加水平分別為0.002、0.20、2.00 mg/kg，每個(gè)水平重復(fù)5次。甲維鹽添加水平為1.00 mg/kg的提取液及除蟲(chóng)脲添加水平為2.00mg/kg的提取液經(jīng)甘藍(lán)空白基質(zhì)溶液10倍稀釋后進(jìn)樣檢測(cè)。按1.3.1條件進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理

甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的殘留量隨時(shí)間變化，可用一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程式（1）表示。

式中：Ct為時(shí)間t時(shí)的農(nóng)藥殘留量，mg/kg；C0為施藥后的原始沉積量，mg/kg；k為消解系數(shù)；t為施藥后時(shí)間，d。

通過(guò)式（1）得到消解系數(shù)k，再通過(guò)式（2）即可計(jì)算消解半衰期T1/2。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)條件優(yōu)化

為了獲得甲維鹽、除蟲(chóng)脲多反應(yīng)監(jiān)測(cè)參數(shù)，采用在質(zhì)譜直接進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg/L）的方式，在100～500 m/z范圍內(nèi)掃描，對(duì)正離子電離（ESI+）和負(fù)離子電離（ESI-）同時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。結(jié)果表明，在ESI+模式下，甲維鹽和除蟲(chóng)脲具有明顯的特征離子峰［M＋H］。再調(diào)整合適的錐孔電壓選定母離子，調(diào)節(jié)碰撞能量，進(jìn)一步獲得定量和定性離子及相應(yīng)的碰撞能量，最終優(yōu)化條件如1.3.1所述。進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件，最終采用乙腈＋0.01%甲酸水溶液體系為流動(dòng)相，在所設(shè)梯度洗脫條件下得到較好的靈敏度、重現(xiàn)性及峰形（圖2）。

圖2 甲維鹽和除蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2.2 方法的線性范圍、準(zhǔn)確度和精密度

基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量分析在0.001～2 mg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，甲維鹽和除蟲(chóng)脲的峰面積（y）與其質(zhì)量濃度（x）呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。其回歸方程分別是：y=2 133 344.295 2 x＋5 143.362 9，r=0.999 8（甲維鹽）；y=124 538.882 2 x＋2 240.770 8，r=0.998 6（除蟲(chóng)脲）。在0.001、0.10和1.00 mg/kg添加水平下，甲維鹽在甘藍(lán)中的平均回收率在99.1%～105%，RSD值為3.02%～8.70%；在0.002、0.20和2.00 mg/kg添加水平下，除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的平均回收率在97.2%～101%，RSD值為4.03%～6.96%（表3）。甲維鹽和除蟲(chóng)脲的LOQ值分別為0.001、0.002 mg/kg，該方法的回收率、準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度均滿足NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[17]的檢測(cè)要求（回收率在70%～120%，RSD值不大于20%）。

表3 甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的添加回收率及RSD 值（n=5）

2.3 甲維鹽、除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的消解動(dòng)態(tài)

在4個(gè)消解試驗(yàn)點(diǎn)中甲維鹽在甘藍(lán)中的平均原始沉積量不大于7.06×10-3mg/kg，不符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，無(wú)法擬合降解曲線。湖南張家界試驗(yàn)點(diǎn)中除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的平均原始沉積量為0.122 mg/kg，檢測(cè)數(shù)據(jù)不符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，無(wú)法擬合降解曲線。云南、江蘇、貴州3個(gè)試驗(yàn)地區(qū)除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的消解動(dòng)態(tài)均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程回歸曲線Ct=C0e-kt（表4），其消解動(dòng)態(tài)見(jiàn)圖3。除蟲(chóng)脲在云南、江蘇、貴州3個(gè)試驗(yàn)地區(qū)甘藍(lán)中的消解半衰期分別為2.31、6.08、2.51 d；可見(jiàn)，除蟲(chóng)脲在云南和貴州消解較快，在江蘇消解較慢。

圖3 除蟲(chóng)脲在不同地區(qū)的消解動(dòng)態(tài)

表4 除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中消解動(dòng)態(tài)

3 結(jié)論與討論

本研究建立了UPLC-MS/MS測(cè)定甘藍(lán)中甲維鹽和除蟲(chóng)脲的殘留分析方法。在0.01～2 mg/L范圍內(nèi)，甲維鹽和除蟲(chóng)脲的濃度與色譜峰面積均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系；在0.001、0.10和1.00 mg/kg添加水平下，甲維鹽在甘藍(lán)中的平均回收率在99.1%～105%，RSD值為3.02%～8.70%；在0.002、0.20和2.00 mg/kg添加水平下，除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)中的平均回收率在97.2%～101%，RSD值為4.03%～6.96%。甲維鹽和除蟲(chóng)脲的LOQ值分別為0.001、0.002 mg/kg。與Du等[10]建立的HPLC-MS/MS測(cè)定甲維鹽的方法以及徐娟等[17]建立的HPLC-MS/MS測(cè)定除蟲(chóng)脲的方法相比，本研究的定量限更低，靈敏度更高，且該方法快速簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠。

據(jù)文獻(xiàn)[18]報(bào)道，除蟲(chóng)脲在蘿卜上的消解半衰期為5.87～5.92 d，在荔枝上的消解半衰期為3.5～4.9 d[13]，在棉葉中的消解半衰期為5.0～8.6 d[15]，在土壤中的消解半衰期為3.8～14 d[15]。本研究中除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)上的消解半衰期為2.31～6.08 d。除蟲(chóng)脲在不同作物的消解半衰期差異不大，屬于易消解農(nóng)藥。甲維鹽在水稻植株、水樣和土壤中的消解半衰期分別為1.52～1.61、1.93～2.04和2.01～2.14 d[20]；在黃瓜中的消解半衰期為0.1～0.6 d[21]；在煙葉中的消解半衰期為2.13 d[22]。甲維鹽在不同的基質(zhì)中消解半衰期均較短，易降解，在本研究中各試驗(yàn)點(diǎn)甲維鹽在甘藍(lán)上的原始沉積量不大于7.06×10-3mg/kg。除施藥劑量低的原因外，可能還存在消解較快的因素。本研究提供了甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)上的殘留分析方法以及除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)上的消解動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)，為甲維鹽和除蟲(chóng)脲在甘藍(lán)上的安全使用提供數(shù)據(jù)支持。