王晶瑩，劉 洋，劉啟迪

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 a.檢驗(yàn)科;b.呼吸內(nèi)科,吉林 長(zhǎng)春130033；2.吉林大學(xué)第二臨床醫(yī)院 放射線科)

全球每年的新增肺癌數(shù)量高達(dá)180萬(wàn)，其中一半以上死于該病[1]。流行病學(xué)對(duì)肺癌的15年生存率調(diào)查結(jié)果顯示，不同地區(qū)不同疾病進(jìn)展階段的患者的生存率從4%到17%不等[2]。而較為常規(guī)的治療手段是手術(shù)切除[3],此外，肺癌的5年生存率也基于不同的病理分區(qū)，呈現(xiàn)出較大的差異[4]。因此發(fā)現(xiàn)可以用于早期診斷的腫瘤標(biāo)志物對(duì)于改善患者的預(yù)后是十分有意義的。

紫蘇脂素2(Plin2)是一種與細(xì)胞內(nèi)脂滴(LDs)代謝有關(guān)的蛋白質(zhì)。然而，對(duì)其表達(dá)的調(diào)控會(huì)影響多種代謝和年齡相關(guān)疾病的嚴(yán)重程度，如脂肪肝、胰島素抵抗和2型糖尿病(T2D)、心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、肌萎縮和癌癥[5,6]，研究顯示該蛋白可能在這些病理狀態(tài)中起作用。本研究目的在于尋找肺癌的差異表達(dá)蛋白，探索其作為腫瘤標(biāo)志物的意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象收集手術(shù)中切取的新鮮腫瘤組織、正常組織，置于無(wú)菌容器內(nèi)，PBS沖洗，液氮速凍。

1.2 方法通過(guò)生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)TCGA檢索，初步確認(rèn)Plin2的表達(dá)情況，免疫印跡進(jìn)一步觀察其在肺癌組織及癌旁組織中的差異表達(dá)情況，免疫組化染色，探討Plin2的表達(dá)意義。

1.3 主要試劑N,N’-亞甲雙丙烯酰胺，蛋白定量試劑盒，甘氨酸，無(wú)水乙醇，蛋白抽提試劑盒，丙烯酰胺，DAB 試劑盒，Tris-base，二甲苯。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用卡方檢驗(yàn)，用SPSS12.0軟件分析，P<0.05定義為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)檢索差異表達(dá)基因Plin2

通過(guò)在線檢索TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)，搜索肺癌中的差異表達(dá)基因，發(fā)現(xiàn)Plin2基因在肺癌組織中的轉(zhuǎn)錄水平顯著低于癌旁組織。如圖1所示。

圖1 差異表達(dá)基因Plin2在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)檢索檢索結(jié)果

2.2 Plin2在肺癌組織與癌旁組織表達(dá)水平的比較

通過(guò)免疫印跡法，觀察肺癌以及癌旁組織中Plin2的表達(dá)水平，Plin2在肺癌的腫瘤組織的表達(dá)水平顯著低于配對(duì)的癌旁組織，見(jiàn)圖2。

圖2 Plin2在肺癌及癌旁組織中的表達(dá)A:肺癌組織；B：肺癌癌旁組織

2.3 Plin2在結(jié)腸腺癌組織與癌旁組織的表達(dá)意義

經(jīng)免疫組化染色，我們直觀地看到Plin2的表達(dá)，如圖3。分析本研究收集的60例組織樣本，發(fā)現(xiàn)Plin2蛋白在71.2%(43/60)肺癌組織中低表達(dá)，僅在46.7%(28/60)肺癌旁組織中低表達(dá)(詳見(jiàn)表1)。結(jié)果說(shuō)明：Plin2蛋白在肺癌組織中低表達(dá)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見(jiàn)表1。

圖3 Plin2在肺癌及癌旁正常組織中的表達(dá)(×200)

表1 肺癌與癌旁組織中Plin2蛋白表達(dá)情況對(duì)比

3 討論

最近的研究表明，在某些類型的癌癥中，循環(huán)系統(tǒng)[7]和體液(如尿液[8]和癌癥組織)中的Plin2水平都會(huì)增加。與健康受試者相比，結(jié)直腸癌[7]、伯基特淋巴瘤[9]、肺腺癌[10]、透明細(xì)胞癌和乳頭狀腎癌[8]患者的Plin2水平表現(xiàn)出較為明顯的差異。血液或體液中Plin2水平的增加預(yù)示著其可能成為早期檢測(cè)特定癌癥的潛在有意義的生物標(biāo)志物[11]。雖然這一研究領(lǐng)域還處于初級(jí)階段，但至少對(duì)于某些類型的癌癥，Plin2過(guò)表達(dá)在腫瘤發(fā)生或發(fā)展中的作用是可以進(jìn)行探索的。有人提出因?yàn)镻lin2的表達(dá)是由HIF-1誘導(dǎo)的，進(jìn)而推斷Plin2可以通過(guò)對(duì)缺氧的適應(yīng)在腫瘤發(fā)生中起作用。本研究以生物信息分析，對(duì)肺癌中的差異表達(dá)基因進(jìn)行篩查，發(fā)現(xiàn)Plin2在肺癌中低表達(dá)，經(jīng)免疫印跡技術(shù)，我們進(jìn)一步驗(yàn)證了蛋白Plin2在肺癌中低表達(dá)的狀態(tài)?；谇捌诘慕M織標(biāo)本收集，我們分析了Plin2的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，Plin2在78%的肺癌中低表達(dá)，在24%的肺癌癌旁組織中低表達(dá)，進(jìn)而我們認(rèn)為Plin2可能是肺癌的潛在的腫瘤標(biāo)志物。