王 莉 王小軍

哮喘(asthma)也被稱為支氣管哮喘是一種氣道慢性炎癥性疾病，因其發(fā)病可由多種細(xì)胞以及細(xì)胞成分所引起，所以至今為止尚不能對(duì)病因做出明確解釋[1-2]。流行病學(xué)研究顯示，過(guò)敏是哮喘發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在多種細(xì)胞因子以及細(xì)胞下所引發(fā)的呼吸道變態(tài)反應(yīng)性疾病被稱為過(guò)敏性哮喘(allergic asthma)，該病的患病人群正隨時(shí)間推移而不斷增長(zhǎng)[3-6]。多種細(xì)胞及細(xì)胞因子、組分所協(xié)同影響下的氣道慢性炎性病變是哮喘根本原因，哮喘的本質(zhì)是氣道慢性炎性病變，由多種細(xì)胞及組分、細(xì)胞因子共同參與，其中CD4+T淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)失衡是其重要免疫學(xué)機(jī)制[7-8]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell, Treg)和輔助性T細(xì)胞(helper T cells)會(huì)在抗原激活CD4+T淋巴細(xì)胞時(shí)，以不同的條件分化而出[9]。而輔助性T細(xì)胞1型(Th1)/輔助性T細(xì)胞2型(Th2)細(xì)胞失衡也往往被認(rèn)為是引發(fā)哮喘的重要因素，然而現(xiàn)在已有更多的報(bào)告顯示，在引發(fā)過(guò)敏性哮喘的過(guò)程中輔助性T細(xì)胞17(Th17)連同其分泌的細(xì)胞因子也扮演著重要角色，因此僅僅依靠Th1/Th2平衡理論來(lái)判斷哮喘的發(fā)病原理已經(jīng)不再準(zhǔn)確了。有報(bào)道通過(guò)研究表明哮喘的成因與Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其代表性細(xì)胞因子IL-17、IL-10有著極其重要的聯(lián)系，且在功能上兩者相互拮抗，所以提出哮喘的病發(fā)機(jī)制中Th17、Treg細(xì)胞的免疫失衡在其中有重要的影響[10-11]。 本文旨在探討TH17及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平在過(guò)敏性哮喘發(fā)病中的作用。

資料與方法

一、一般資料

選擇2016年6月至2018年8月我院收治的符合過(guò)敏性哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者60例以及符合非過(guò)敏性哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者60例。將120例哮喘患者依據(jù)吸入物變應(yīng)原篩查特異性IgE以及外周血總免疫球蛋白E水平分成過(guò)敏性哮喘組60例以及非過(guò)敏性哮喘組60例。此外選取同期入院體檢的48例健康人作為對(duì)照組。過(guò)敏性哮喘組60例，男性18例，女性42例；平均年齡(35.15±10.38)歲；酗酒6例；平均FEV1%(%)79.49±18.86。非過(guò)敏性哮喘組60例，男性22例，女性38例，平均年齡(40.61±15.46)歲；酗酒5例，平均FEV1%(%)77.81±20.43； 對(duì)照組48例， 男性20例，女性28例；平均年齡(38.39±11.69)歲；酗酒3例。三組受試者在性別、年齡、酗酒以及FEV1%上均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

入組標(biāo)準(zhǔn)：①25歲至55歲的哮喘患者；②符合由中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組制定的“支氣管哮喘防治指南”中過(guò)敏性哮喘以及非過(guò)敏性哮喘的患者[12]；③非急性發(fā)作期患者；④患者非急性發(fā)作超過(guò)6周。排除標(biāo)準(zhǔn)：①吸煙者；②間質(zhì)性肺疾病患者；③伴支氣管擴(kuò)張者；④伴重要臟器(如心、肝、腎等)疾病患者。本項(xiàng)目已經(jīng)獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且受試者均已簽署書面知情同意書。

二、檢測(cè)方法

采用流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)法對(duì)三組受試者外周血中Th17、Treg以及Th2的比例進(jìn)行測(cè)定；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)對(duì)三組受試者血漿以及誘導(dǎo)痰中細(xì)胞因子IL-17A、IL-10、IL-4、IL-5以及IL-18的濃度水平進(jìn)行測(cè)定；細(xì)胞分類通過(guò)瑞吉氏染色法進(jìn)行染色，記錄三組受試者誘導(dǎo)痰中中性粒細(xì)胞以及嗜酸粒細(xì)胞的數(shù)目。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、受試者外周血中Th17、Treg、Th2比例

過(guò)敏性哮喘組Th17比例高于對(duì)照組(P<0.05)；過(guò)敏性哮喘組Treg比例低于對(duì)照組(P<0.05)；過(guò)敏性哮喘組Th17比例低于非過(guò)敏性哮喘組(P<0.05)；三組間Th2比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 受試者外周血中Th17、Treg 、Th2比例(%)

二、受試者血IL-17A、IL-4、IL-5、IL-10及IL-18

過(guò)敏性哮喘組IL-17A、IL-4以及IL-5水平高于對(duì)照組(P<0.05)；過(guò)敏性哮喘組IL-10及IL-18水平低于對(duì)照組(P<0.05)，過(guò)敏性哮喘組IL-17A水平低于非過(guò)敏性哮喘組(P<0.05)；過(guò)敏性哮喘組IL-4水平高于非過(guò)敏性哮喘組(P<0.05)，過(guò)敏性哮喘組IL-17A、IL-4、IL-5、IL-10及IL-18水平均高于對(duì)照組，見(jiàn)表2。

三、受試者誘導(dǎo)痰中IL-17A、IL-4、IL-5、IL-10及IL-18

過(guò)敏性哮喘組IL-17A以及IL-18水平低于非過(guò)敏性哮喘組(P<0.05)；過(guò)敏性哮喘組IL-4水平高于非過(guò)敏性哮喘組(P<0.05)；兩組間IL-5、IL-10水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

四、受試者誘導(dǎo)痰中中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞比例比較

過(guò)敏性哮喘組60例患者中性粒細(xì)胞比例(25.18±3.16)%，嗜酸粒細(xì)胞比例(3.27±2.16)%。非過(guò)敏性哮喘組60例中性粒細(xì)胞比例(35.86±9.63)%，嗜酸粒細(xì)胞比例(1.76±0.96)%；對(duì)照組48例健康人群，中性粒細(xì)胞比例(4.79±2.88)%，嗜酸粒細(xì)胞比例(1.19±0.58)%。過(guò)敏性哮喘組中性粒細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞比例均高于對(duì)照組(P<0.05)，過(guò)敏性哮喘組中性粒細(xì)胞比例低于非過(guò)敏性哮喘組，且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；過(guò)敏性哮喘組嗜酸粒細(xì)胞比例高于非過(guò)敏性哮喘組，且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

討 論

過(guò)敏性哮喘是一種慢性氣道炎癥，由許多類型的細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞以及肥大細(xì)胞等)共同參與[13]。在易感者中此種炎癥可引起反復(fù)發(fā)作的喘息、氣促、胸悶和/或咳嗽等癥狀，好發(fā)于夜間或/和凌晨，氣道對(duì)各種刺激因子的敏感性增加[14]。國(guó)內(nèi)外哮喘患者的人數(shù)以及死亡率呈現(xiàn)逐年增加的趨勢(shì)，據(jù)統(tǒng)計(jì)哮喘已經(jīng)成為一種嚴(yán)重威脅群眾身體健康甚至生命的慢性疾病，全世界的患病人數(shù)高達(dá)一億患者。國(guó)內(nèi)整體人群哮喘的患病率為1%左右，我國(guó)兒童哮喘的患病率高達(dá)3%。相關(guān)報(bào)道已經(jīng)證實(shí)CD4+T細(xì)胞亞群是能夠引發(fā)哮喘病的決定性因素之一，其中包括了Th1、Th2、Th17、Treg等，細(xì)胞會(huì)對(duì)哮喘的病因構(gòu)成影響[15]。

表2 受試者血漿IL-17A、IL-4、IL-5、IL-10及IL-18(ng/L)

表3 受試者誘導(dǎo)痰中IL-17A、IL-4、IL-5、IL-10及IL-18(ng/L)

我國(guó)專家通過(guò)試驗(yàn)證明哮喘組的Th17以及Treg細(xì)胞比例較正常組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[16-18]，這與本研究過(guò)敏性哮喘組外周血中Th17比例高于對(duì)照組，Treg比例低于對(duì)照組，且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)的結(jié)論相一致。一些相關(guān)的報(bào)道中提到體內(nèi)與體外的條件差異會(huì)對(duì)T細(xì)胞的分化構(gòu)成影響，比如在一些共生菌的影響下T細(xì)胞在體內(nèi)會(huì)傾向于Th17，而在體外則傾向于Treg細(xì)胞。不同分化階段的Treg細(xì)胞為部分體內(nèi)共生菌維持黏膜的耐受性[19]，但是在體內(nèi)有炎癥或者抵抗力降低時(shí)反而誘導(dǎo)對(duì)Th17的分化[20]。由此可以推斷細(xì)胞微環(huán)境中Th17、Treg的比例失衡，在過(guò)敏性哮喘的病發(fā)原理中占據(jù)了重要的一環(huán)。

此外，本文結(jié)果表明，過(guò)敏性哮喘組與對(duì)照組以及非過(guò)敏性哮喘組血漿中IL-17A、IL-4、IL-5、IL-10及IL-18水平均存在顯著差異(P<0.05)?；罨腡h17能夠促進(jìn)炎性病變局部具有生物活性的IL-17A、IL-4、IL-5等細(xì)胞因子的釋放，內(nèi)皮細(xì)胞活化后會(huì)分泌IL-18等趨化因子。相關(guān)試驗(yàn)證明Treg細(xì)胞通過(guò)分泌IL-10可以對(duì)氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥進(jìn)行控制[21-23]。也有研究表明對(duì)于IL-17依賴性過(guò)敏性哮喘患者血漿中的IL-10比例無(wú)法進(jìn)行有效的控制[24]。有報(bào)道通過(guò)研究表明哮喘的成因與Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其代表性細(xì)胞因子IL-17、IL-10有著極其重要的聯(lián)系，且在功能上兩者相互拮抗，綜上所述，多種細(xì)胞因子對(duì)初始CD4+T淋巴細(xì)胞形成刺激，促進(jìn)初始CD4+T淋巴細(xì)胞分化或增殖為Th17細(xì)胞，比例失衡的Th17細(xì)胞最終參與過(guò)敏性哮喘的發(fā)生與發(fā)展。

本文結(jié)果表明，過(guò)敏性哮喘組與對(duì)照組、非過(guò)敏性哮喘組誘導(dǎo)痰中中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞比例均存在顯著差異。已有研究證實(shí)，難治性哮喘、重癥哮喘、以及哮喘的持續(xù)狀態(tài)等與中性粒細(xì)胞性氣道炎性病變關(guān)系密切。過(guò)敏性哮喘患者常伴隨嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的氣道炎性病變；非過(guò)敏性哮喘常伴隨Th17介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的氣道炎性病變，且IL-17A以及IL-18水平增加[25-26]。由此可以推斷Th17的與哮喘類型密切相關(guān)。

過(guò)敏性哮喘組與對(duì)照組、非過(guò)敏性哮喘組外周血中Th2比例無(wú)顯著差異。在Th2與IL-17A的共同作用下，中性粒細(xì)胞以及嗜酸粒細(xì)胞聚集于氣道中，進(jìn)而引起氣道反應(yīng)性增加，然而僅僅憑借Th2的免疫應(yīng)答無(wú)法引起氣道反應(yīng)性增加，由此可以推斷，Th2的免疫應(yīng)答無(wú)法獨(dú)立導(dǎo)致哮喘的發(fā)生。然而Th17能夠在不依靠Th2免疫應(yīng)答的時(shí)候?qū)獾赖闹貥?gòu)進(jìn)行誘導(dǎo)[27]，由此可以推斷Th17可能獨(dú)立導(dǎo)致哮喘的發(fā)生。綜上所述，過(guò)敏性哮喘患者的Th2比例及IL-4水平升高，氣道炎性病變以嗜酸粒細(xì)胞為主[28-30]。結(jié)果表明，Th17在過(guò)敏性哮喘以及非過(guò)敏性哮喘患者中的比例均增加，而Th2只在過(guò)敏性哮喘患者中比例增加。故而得出結(jié)論，相較于Th2而言，Th17的細(xì)胞失衡在哮喘的致病機(jī)理中的作用更為重要。

綜上所述，過(guò)敏性哮喘的病因及嚴(yán)重程度可能是由于Th17細(xì)胞的比例失衡導(dǎo)致細(xì)胞微環(huán)境發(fā)生變化所影響的，這對(duì)傳統(tǒng)的哮喘免疫學(xué)機(jī)制產(chǎn)生了重大影響，也為更加深入的對(duì)哮喘的免疫學(xué)機(jī)制進(jìn)行研究提供了嶄新的方向。