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        芍藥苷對(duì)抗炎反應(yīng)因子TNF-a和IL6的作用研究

        2020-12-23 04:47:02劉俊彤李軼聰董麗強(qiáng)劉賀張延旭
        關(guān)鍵詞:芍藥苷

        劉俊彤 李軼聰 董麗強(qiáng) 劉賀 張延旭

        【摘要】目的 研究芍藥苷對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致炎癥因子TNF-a和IL6的影響。方法 利用Ⅱ型膠原蛋白建立小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型,采用qRT-PCR和ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)血液中炎癥因子TNF-a和IL6的變化水平。結(jié)果 芍藥苷對(duì)關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的炎癥因子TNF-a和IL6上升具有抑制作用,其作用呈現(xiàn)劑量依賴性。結(jié)論 芍藥苷對(duì)小鼠炎癥反應(yīng)具有一定的抑制作用,其作用的機(jī)制可能和免疫系統(tǒng)相關(guān)。

        【關(guān)鍵詞】芍藥苷;TNF-a;IL6

        【中圖分類號(hào)】R917 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2020.30..02

        Study on the effect of paeoniflorin on TNF-a and IL6

        LIU? Jun-tong1, LI? Yi-cong2*, DONG? Li-qiang1, ZHANG? Yan-xu1

        (1.Jiamusi University,Heilongjiang Jiamusi 154000,China;

        2.the 962 Hospital of joint logistics support force of PLA,Heilongjiang Harbin 150000,China)

        【Abstract】Objective To study the effect of paeoniflorin on TNF-a and IL6 in collagen induced arthritis.Methods A mouse model of arthritis was established with type II collagen. The levels of TNF-a and IL-6 in blood were detected by QRT PCR and ELISA.Results Paeoniflorin inhibited the rise of TNF-a and IL-6 induced by arthritis in a dose-dependent manner.Conclusion Paeoniflorin can inhibit inflammatory response in mice, and its mechanism may be related to immune system.

        【Key words】Paeoniflorin;TNF-a;IL6

        關(guān)節(jié)炎是一種慢性的全身炎癥反應(yīng),其中最為常見的病因多為風(fēng)濕和類風(fēng)濕導(dǎo)致。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病變特點(diǎn)為慢性的、對(duì)稱性的多關(guān)節(jié)以及滑膜病變[1]。目前臨床治療主要以激素為主。但是大量的應(yīng)用激素會(huì)導(dǎo)致激素性股骨頭壞死、高血壓、全身水腫等激素相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生,副作用較大。而我國(guó)傳統(tǒng)中藥在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面具有獨(dú)特的見解和療效。其中芍藥苷為近年來報(bào)道的具備抗炎、抗氧化的作用,并且其不良反應(yīng)以及相關(guān)毒副作用較少[2]。本文針對(duì)芍藥苷在關(guān)節(jié)炎小鼠的動(dòng)物模型中的作用進(jìn)行研究,主要觀察炎癥相關(guān)因子的TNF-a和IL6在應(yīng)用芍藥苷后的變化,并對(duì)其中的作用機(jī)制做出初步的探討。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        芍藥苷購自上海一基實(shí)業(yè)有限公司,生產(chǎn)包裝時(shí)的純度大于88%。小鼠關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)試劑為II型膠原(Sigma公司),RNA逆轉(zhuǎn)錄以及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒購自北京Bioteck公司。ELISA檢測(cè)試劑盒購自德國(guó)Bender公司。實(shí)驗(yàn)小鼠為DBA/1品種,購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

        1.2 方法

        小鼠關(guān)節(jié)炎模型的構(gòu)建[3]。將200 ug的II膠原溶于濃度為0.05 mol/L的100 mL醋酸中,并與相同體積的弗氏完全佐劑充分混合,注射入小鼠皮下。在14天后再次以同樣的方式重復(fù)操作。

        1.3 實(shí)驗(yàn)分組

        將小鼠分為5組,正常組、關(guān)節(jié)炎組、芍藥苷25 mg/kg組、芍藥苷50 mg/kg組、芍藥苷100 mg/kg組.給藥途徑為經(jīng)口注射。于2周后應(yīng)用摘眼球取血法獲得血液。提取血液中的有核細(xì)胞,裂解液裂解細(xì)胞后獲得血液中的RNA,其后按照RNA總量為1000 ng進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,將逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)。所用引物為 TNF順向CAGGCGGTGCCTATGTCTC,反向CGATCACCCCGAAGTTCAGTAG。IL6順向TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC,反向TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC, GAPDH:AGGTCGGTGTGAACGGATTTG,反向TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA。聚合酶鏈反應(yīng)和ELISA檢測(cè)過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        全部數(shù)據(jù)使用SPSS 18在計(jì)算機(jī)上完成操作,數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

        2 結(jié) 果

        2.1 芍藥苷對(duì)炎癥因子mRNA的檢測(cè)

        經(jīng)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)芍藥苷組的炎癥因子TNF-a和IL6較正常組(TNF-a:7.47±1.12,IL6:6.13±2.12)均表達(dá)升高。但是隨著芍藥苷劑量的增加,兩種炎癥因子的差異表達(dá)倍數(shù)明顯下降,并且在藥苷25 mg/kg組(TNF-a:1.51±0.11,IL6:0.98±0.07)、芍藥苷50 mg/kg組(TNF-a:3.21±0.67,IL6:2.86±0.13)、芍藥苷100 mg/kg(TNF-a:5.51±0.12,IL6:3.78±0.28)組表達(dá)量依次下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明芍藥苷能夠抑制機(jī)體內(nèi)關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的炎癥反應(yīng),并且抑制效果呈現(xiàn)劑量依從性。

        2.2 芍藥苷對(duì)炎癥因子表達(dá)量的檢測(cè)

        經(jīng)ELISA反應(yīng)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)芍藥苷組的炎癥因子TNF-a和IL6較正常組(TNF-a:2.9±0.2 pg/mL,IL6:3.3±0.2 pg/mL)均表達(dá)升高。但是隨著芍藥苷劑量的增加,兩種炎癥因子的表達(dá)量明顯下降,并且在藥苷25 mg/kg組(TNF-a:13.7±2.3 pg/mL,IL6:17.1±2.5 pg/mL)、芍藥苷50 mg/kg組(TNF-a:9.8±2.1 pg/mL,IL6:13.4±2.8 pg/mL)、芍藥苷100mg/kg組(TNF-a:5.3±1.9 pg/mL,IL6:7.9±2.1 pg/mL)表達(dá)量依次下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明芍藥苷能夠抑制機(jī)體內(nèi)關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的炎癥反應(yīng),并且抑制效果呈現(xiàn)劑量依從性。

        3 討 論

        芍藥苷是一種新型的具有抗炎、抗氧化功能的中草藥制劑,在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療方面,較傳統(tǒng)的激素治療有一定的優(yōu)勢(shì)。本研究通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)以及ELISA反應(yīng)證實(shí),應(yīng)用芍藥苷對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的炎癥因子的表達(dá)具有抑制作用。并且隨著芍藥苷給藥劑量的逐漸增大,抗炎效果逐漸增強(qiáng),表現(xiàn)為TNF-a和IL6的降低。而在應(yīng)用芍藥苷以及加大劑量的過程中,動(dòng)物模型未出現(xiàn)因使用芍藥苷而致死的情況,說明芍藥苷在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的過程中具有明顯的療效。

        參考文獻(xiàn)

        [1] Chen M,Amerigos J C KD,Su Z,et al. Folate Receptor-Targeting and Reactive Oxygen Species-Responsive Liposomal Formulation of Methotrexate for Treatment of Rheumatoid Arthritis[J].Pharmaceutics.2019,11(11).pii: E582.

        [2] 鄭世存,李曉宇,歐陽兵,等.芍藥苷藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國(guó)藥物警戒,2012,9(2):100-103.

        [3] 劉芳蘭,蔣 瑩.芍藥苷對(duì)小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎抑制作用[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2015,17(11):10-11.

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