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        青海省南部地區(qū)154株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株耐藥性檢測(cè)結(jié)果分析

        2020-12-22 12:45:40蔣明霞晁秀珍王兆芬馬斌忠馬永成王蓉王朝才李爾琛魏於家李詠雪張琪
        中國(guó)防癆雜志 2020年12期
        關(guān)鍵詞:藥率利福平抗結(jié)核

        蔣明霞 晁秀珍 王兆芬 馬斌忠 馬永成 王蓉 王朝才 李爾琛 魏於家 李詠雪 張琪

        據(jù)2018年世界衛(wèi)生組織報(bào)告, 2017年全球新發(fā)結(jié)核病患者估算約1000萬(wàn)例,耐多藥和(或)單耐利福平結(jié)核病(MDR/RR-TB)患者56萬(wàn)例。中國(guó)新發(fā)結(jié)核病患者約90萬(wàn)例,MDR/RR-TB患者7.3萬(wàn)例[1]。耐藥結(jié)核病的出現(xiàn)增大了治療難度,全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報(bào)告顯示,我國(guó)結(jié)核病患病率呈現(xiàn)西部高于中部、中部高于東部的特征,結(jié)核病總耐藥率為36.8%,耐多藥結(jié)核病(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)占6.8%[2]。青海省平均海拔3000米以上,南部(以下簡(jiǎn)稱“青南地區(qū)”)平均海拔超過(guò)4000米,面積占全省總面積的一半以上,氣溫偏低,以藏族、蒙古族為主要民族,以農(nóng)、牧業(yè)為主。為掌握青南高寒地區(qū)結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis, MTB)耐藥類型及分布情況,為改進(jìn)牧業(yè)區(qū)結(jié)核病防治措施提供依據(jù),筆者對(duì)我省結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室收集的154株MTB進(jìn)行耐藥性分析。

        資料和方法

        一、 菌株來(lái)源

        1.菌株的選?。菏占嗄系貐^(qū)(玉樹州、果洛州、黃南州)市/州級(jí)疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室2018—2019年全部518例病原學(xué)陽(yáng)性患者的標(biāo)本,進(jìn)行分離培養(yǎng),并對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性菌株進(jìn)行抗結(jié)核藥物敏感性試驗(yàn)和菌種鑒定,最終經(jīng)菌種鑒定的MTB菌株為154株。其中,玉樹州44株、果洛州12株、黃南州98株;男性95株,女性59株;年齡分布在13~79歲之間,中位年齡27歲。

        2.菌株分離:依據(jù)《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》[3],應(yīng)用改良羅氏培養(yǎng)基進(jìn)行痰分枝桿菌分離培養(yǎng)。痰標(biāo)本采用4% NaOH去污染處理后直接接種至酸性羅氏固體培養(yǎng)基上,接種后第3天和第7天觀察培養(yǎng)情況,然后每周觀察1次,直到第8周末。

        3.菌種鑒定:分離株在進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)的同時(shí),利用對(duì)硝基苯甲酸(p-nitrobenzoic acid,PNB)培養(yǎng)基生長(zhǎng)試驗(yàn)初步鑒別結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群和非結(jié)核分枝桿菌,排除非結(jié)核分枝桿菌。

        二、 研究方法

        1.主要試劑:改良羅氏培養(yǎng)基、藥物敏感性試驗(yàn)培養(yǎng)基、PNB培養(yǎng)基均購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

        2.藥物敏感性試驗(yàn):藥物敏感性試驗(yàn)操作參考《結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》[4]中的比例法,對(duì)異煙肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)、乙胺丁醇(ethambutol,EMB)、鏈霉素(streptomycin,Sm)、卡那霉素(kanamycin,Km)、氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)6種抗結(jié)核藥品進(jìn)行敏感性測(cè)定。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):含藥培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基表面菌落數(shù)之比≥0.01判斷為耐藥。

        三、質(zhì)量控制

        每批試驗(yàn)均以MTB標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv作為對(duì)照。省級(jí)結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室人員和市/州級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室人員每年均參加國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室組織的全國(guó)抗結(jié)核藥物敏感性試驗(yàn)熟練度測(cè)試并獲得優(yōu)秀和合格證書,保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)性和質(zhì)量。

        四、耐藥結(jié)核病評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

        單耐藥結(jié)核病(mono-resistant tuberculosis, MR-TB)、多耐藥結(jié)核病(poly-resistant tuberculosis, PR-TB)、MDR-TB、準(zhǔn)廣泛耐藥結(jié)核病(pre-extensively drug-resistant tuberculosis, Pre-XDR-TB)、廣泛耐藥結(jié)核病(extensively drug-resistant tuberculosis, XDR-TB)、利福平耐藥結(jié)核病(rifampicin-resistant tuberculosis, RR-TB)6種耐藥類型,參考中國(guó)防癆協(xié)會(huì)《耐藥結(jié)核病化學(xué)治療指南(2019年簡(jiǎn)版)》[1]的概念。

        五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        應(yīng)用Excel 2010軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù),采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料采用“率 (%)”表示,以χ2檢驗(yàn)對(duì)組間差異進(jìn)行比較,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        結(jié) 果

        一、 不同地區(qū)耐藥類型與耐藥率

        154株MTB菌株中全敏感菌株97株,耐藥菌株57株,總耐藥率為37.01%(57/154),單耐藥率為23.38%(36/154),多耐藥率為3.25%(5/154), 耐多藥率為10.39%(16/154),利福平耐藥率為18.18%(28/154),廣泛耐藥率為0.00%。不同地區(qū)總耐藥率、單耐藥率、多耐藥率、耐多藥率、利福平耐藥率的比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.21、72.00、5.00、22.49、27.15,P值均<0.05),3個(gè)地區(qū)均為黃南州的耐藥率高于玉樹州和果洛州。見表1。

        二、 初、復(fù)治耐藥類型與耐藥率

        初、復(fù)治患者總耐藥率相比,復(fù)治患者明顯高于初治患者。復(fù)治患者的總耐藥率、單耐藥率、耐多藥率、利福平耐藥率明顯高于初治患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=123.00、28.12、11.68、24.07,P值均<0.05),復(fù)治患者的多耐藥率與初治患者多耐藥率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.00,P>0.05)。見表2。

        三、 任何耐藥率情況

        6種抗結(jié)核藥品的任何耐藥率為69.48%(107/154),由高到低依次為:異煙肼(24.68%,38/154)>利福平(18.18%,28/154)>鏈霉素(11.04%,17/154)>氧氟沙星(8.44%,13/154)>乙胺丁醇(5.84%,9/154)>卡那霉素(1.30%,2/154)。

        四、 不同社會(huì)學(xué)特征患者耐藥情況分析

        154例患者的性別(χ2=57.00,P<0.01)、年齡(χ2=118.51,P<0.01)、民族(χ2=288.37,P<0.01)和職業(yè)(χ2=371.17,P<0.01)的總耐藥率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

        討 論

        在全球30個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家中,中國(guó)的結(jié)核病死亡率為2.6/10萬(wàn),結(jié)核病死亡率排在30個(gè)高負(fù)擔(dān)國(guó)家中的第29位,僅高于巴西[6]。耐藥結(jié)核病,尤其MDR-TB是全世界面臨的巨大挑戰(zhàn),MDR-TB治愈率低,約為50%[7-8],病死率卻高達(dá)52%[9]。據(jù)2010年全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查顯示,西部地區(qū)結(jié)核病疫情嚴(yán)重,患病率高達(dá)695/10萬(wàn),高于全國(guó)平均水平[2]。2009—2012年青海省在農(nóng)、牧民中發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者10 393例,占全部活動(dòng)性肺結(jié)核患者總數(shù)的73.62%,提示農(nóng)牧區(qū)的活動(dòng)性、涂陽(yáng)和菌陽(yáng)肺結(jié)核患病率高于城鎮(zhèn)[10]。

        表1 青南地區(qū)MTB臨床分離菌株的耐藥類型分布[耐藥株數(shù)(耐藥率,%)]

        表2 初、復(fù)治患者M(jìn)TB臨床分離株的耐藥類型分布[耐藥株數(shù)(耐藥率,%)]

        表3 不同社會(huì)人口學(xué)特征患者耐藥情況分布[耐藥株數(shù)(耐藥率,%)]

        本研究結(jié)果顯示,青南地區(qū)結(jié)核病患者總耐藥率為37.01%,耐多藥率為10.39%;復(fù)治患者總耐藥率為64.52%,復(fù)治患者耐多藥率為35.48%,分別高于全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果(36.8%、6.8%;35.9%、15.4%)[2]??偰投嗨幝蕿?0.39%,復(fù)治患者耐多藥率為35.48%,初治患者耐多藥率為4.07%;復(fù)治患者耐多藥率遠(yuǎn)高于全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果,初治患者耐多藥率略低于全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果(分別為15.4%、5.4%)[2]。復(fù)治患者耐多藥率遠(yuǎn)高于初治患者,原因可能一方面與長(zhǎng)期服用以異煙肼和利福平為主要方案的抗結(jié)核藥品有關(guān),增加了MTB耐藥性的產(chǎn)生。另一方面可能因?yàn)樘幱谄h(yuǎn)地區(qū),經(jīng)濟(jì)條件相對(duì)比較落后,很多農(nóng)牧民族在發(fā)現(xiàn)得了結(jié)核病后在藥店自行購(gòu)買藥品,癥狀有所緩解后便停藥,服藥很不規(guī)范; 當(dāng)知道結(jié)核病的免費(fèi)政策后到疾病預(yù)防控制中心(或定點(diǎn)醫(yī)院)就診,也不能按時(shí)服藥,造成大量耐藥患者的發(fā)生[11]。因此,筆者認(rèn)為對(duì)青南地區(qū)應(yīng)該進(jìn)一步加強(qiáng)耐藥結(jié)核病患者的歸口管理,規(guī)范合理臨床用藥,控制耐藥性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

        利福平耐藥涵蓋所有對(duì)利福平耐藥的情況,包括單耐藥、耐多藥、多耐藥和廣泛耐藥[12]。2007—2018年的研究結(jié)果顯示,初治患者利福平耐藥率為6.6%,復(fù)治患者利福平耐藥率為30.0%;2013年初治患者利福平耐藥率為7.1%,復(fù)治患者利福平耐藥率為24.0%;高于全球初治和復(fù)治患者利福平耐藥率(3.6%、17.0%)[13]。本次研究結(jié)果顯示利福平耐藥率為18.18%,其中初治患者為13.01%,復(fù)治患者為38.71%,高于2007—2018年和2013年兩次全國(guó)耐藥基線調(diào)查結(jié)果,提示該地區(qū)利福平耐藥結(jié)核病疫情非常嚴(yán)重。楊儀等[14]認(rèn)為,利福平耐藥會(huì)明顯降低一線抗結(jié)核藥品的療效,同時(shí)MTB也會(huì)很快發(fā)展為對(duì)異煙肼耐藥,成為MDR-TB。據(jù)WHO 2019年全球結(jié)核病報(bào)告,2018年全球估計(jì)約有48.4萬(wàn)例新發(fā)利福平耐藥結(jié)核病患者,而這些患者中有78%為MDR-TB。在MDR-TB患者中,有6.2%估計(jì)為XDR-TB。有3個(gè)國(guó)家占了全球50%的MDR/RR-TB患者,分別為印度(27%)、中國(guó)(14%)和俄羅斯(9%)[6]。所以在今后的工作中更應(yīng)該重視利福平耐藥結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷,加大政府投入,規(guī)范、合理臨床用藥,早發(fā)現(xiàn)、早診療,有效阻止MDR/RR-TB的傳播。

        本研究結(jié)果顯示,異煙肼、利福平、乙胺丁醇、氧氟沙星的任何耐藥率分別為24.68%、18.18%、5.84%、8.44%,均高于2013年全國(guó)耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)核病患者單耐藥譜構(gòu)成比(14.69%、9.55%、3.5%、6.2%)[13]。提示青南地區(qū)MDR/RR-TB疫情較為嚴(yán)重。

        本次研究結(jié)果顯示,性別、年齡、民族、職業(yè)等人群特征總耐藥率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。耐藥MTB流行因素多而復(fù)雜,居住地為農(nóng)村、文化程度為初中及以下、當(dāng)?shù)蒯t(yī)療水平、患者家庭收入、治療不規(guī)范、年齡、性別等均是MTB產(chǎn)生耐藥性的危險(xiǎn)因素[15-17];男性總耐藥率高可能與抽煙、不良生活習(xí)慣等有關(guān);本次研究顯示中青年組(<45及45~60歲)總耐藥率高,與陳燕梅等[18]的研究結(jié)果相近。原因可能與中青年為家庭中的主要經(jīng)濟(jì)來(lái)源,生活、工作壓力大,出入環(huán)境復(fù)雜,生活不規(guī)律造成免疫力下降而成為高危人群。藏族、蒙古族總耐藥率高,一方面是本次樣本收集人群主要以藏族為主,另一方面與該民族長(zhǎng)期居住在帳房的生活習(xí)慣相關(guān),為便于保暖,帳房通風(fēng)較差,造成空氣不能流通,易造成呼吸道疾病的傳播。學(xué)生總耐藥率高,可能與生活環(huán)境及飲食有關(guān)。學(xué)生發(fā)病主要在牧區(qū),學(xué)校以寄宿制為主,群體較為聚集。另外,青少年處于生長(zhǎng)階段,而寄宿制學(xué)校的食堂能否滿足學(xué)生生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)需進(jìn)一步了解,如此環(huán)境易患結(jié)核病[19]。另外,可能與學(xué)校結(jié)核病防控工作不完善有關(guān)。梁軍和文國(guó)穎[20]對(duì)青海農(nóng)牧區(qū)居民的結(jié)核病防治行為傾向調(diào)查顯示: 如果有類似肺結(jié)核的癥狀,約40.00%的人選擇不就醫(yī),高達(dá)10.00%的人表示不知道如何處理。農(nóng)牧民對(duì)結(jié)核病防治知識(shí)認(rèn)識(shí)不足、就醫(yī)不及時(shí)、患者自行買藥或不按照抗結(jié)核治療規(guī)則服藥,這些因素都極易導(dǎo)致抗結(jié)核治療失敗,并有可能產(chǎn)生耐藥性。由于本次樣本量較小,對(duì)人群特征耐藥類型未作進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

        本研究廣泛耐藥率可能比實(shí)際情況略低,因?yàn)槎€抗結(jié)核藥品在本次試驗(yàn)中只選擇Ofx和Km兩種,MDR-TB還可能對(duì)其他未測(cè)二線抗結(jié)核藥品耐藥,而使XDR-TB未檢測(cè)出,造成其比率可能比實(shí)際低。

        綜上所述,青海南部地區(qū)MTB對(duì)6種常用抗結(jié)核藥品的耐藥率較高,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)中青年、學(xué)校、農(nóng)牧民等重點(diǎn)人群耐藥性監(jiān)測(cè)與治療,強(qiáng)化農(nóng)牧區(qū)工作,進(jìn)一步落實(shí)農(nóng)牧民等重點(diǎn)人群薄弱環(huán)節(jié)的結(jié)核病防治措施[21],早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療,減少耐藥的產(chǎn)生。

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