袁 野，范增光

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是由脂質(zhì)驅(qū)動(dòng)的一種緩慢進(jìn)展的炎癥過程，當(dāng)粥樣斑塊破裂時(shí)會(huì)導(dǎo)致冠心病、腦卒中及外周動(dòng)脈疾病等的發(fā)生，已成為危害人類健康的主要危險(xiǎn)因素[1-2]。已有研究表明，血清總膽固醇(TC)及白細(xì)胞介素-18(IL-18)在AS的形成中均具有明顯的促進(jìn)作用，是預(yù)測(cè)AS發(fā)生、發(fā)展的重要指標(biāo)。在我國，中藥尤其是一部分活血化瘀藥物在抗AS方面具有較好的療效，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[3]。而中藥蘇木具有活血祛瘀等作用，在臨床上得到反復(fù)的驗(yàn)證。近年來，隨著蘇木現(xiàn)代藥理研究的不斷深入，進(jìn)一步證實(shí)蘇木及其提取物具有抗炎、免疫抑制、抗氧化、保護(hù)血管、抗心臟移植排斥反應(yīng)等藥理作用[4-5]?；诖耍狙芯坑^察蘇木乙酸乙酯提取物對(duì)AS模型大鼠TC及IL-18水平的影響，探討其抗AS的部分機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年雄性SD大鼠40只，體重(200±20)g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證書號(hào)：SCXK-(黑)2013-004，在適宜溫度、濕度、風(fēng)速的室內(nèi)飼養(yǎng)，12 h明暗循環(huán)，24 h自由獲取食物和水。

1.2 蘇木提取物的制備 蘇木產(chǎn)地云南，藥材購于黑龍江省藥材公司，委托黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院進(jìn)行提取和制備。具體方法：經(jīng)生藥鑒定制成蘇木粗粉(40目)，浸泡于75%的乙醇溶液中，經(jīng)重復(fù)回流2次，去渣，加熱，水浴蒸干制成蘇木醇提取干粉，將提取的干粉與雙蒸水混勻得到混懸液，再用乙酸乙酯萃取，進(jìn)而回收得到蘇木提取物。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 辛伐他汀片(杭州默沙制藥有限公司生產(chǎn))，羧甲基纖維素鈉(河北石家莊森隆化工有限公司生產(chǎn))，維生素D3注射液(上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))1 mL；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)試劑盒(上海信裕生物生產(chǎn))。辛伐他汀混懸液制備：將辛伐他汀溶于羧甲基纖維素鈉溶液中，得到濃度為0.42 mg/mL的混懸液；將蘇木乙酸乙酯提取物同樣溶于羧甲基纖維素鈉溶液中，得到濃度為0.115 g/mL的混懸液。

1.4 AS模型建立 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，然后腹腔注射維生素D3注射液7×105U/(kg·d)，每日1次，共注射3 d，同時(shí)喂高脂飼料12周(93.4%普通飼料+5%豬油、0.1%丙硫氧嘧啶、1%膽固醇、0.5%膽酸鈉)。

1.5 實(shí)驗(yàn)分組與給藥 將全部SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后采用隨機(jī)分組方法分為空白組、模型組、辛伐他汀組及蘇木乙酸乙酯提取物組，每組10只。喂養(yǎng)12周后，第13周對(duì)各組大鼠進(jìn)行灌胃，連續(xù)4周。根據(jù)課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及人鼠劑量換算后給藥，其中空白組、模型組均灌服等體積的羧甲基纖維素鈉10 mL/(kg·d)；辛伐他汀組：灌服含0.42 mg/mL辛伐他汀的羧甲基纖維素鈉混懸劑10 mL/(kg·d)；蘇木乙酸乙酯提取物組：灌服含生藥0.115 g/mL的羧甲基纖維素鈉10 mL/(kg·d)。

1.6 標(biāo)本取材 實(shí)驗(yàn)16周后，將大鼠充分麻醉后固定四肢，進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，經(jīng)離心10 min后取得血清，于冰箱內(nèi)冷藏待檢，然后檢測(cè)TC，ELISA法檢測(cè)血清IL-18的表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般狀態(tài) 在12周模型復(fù)制期間，40只大鼠未出現(xiàn)死亡情況，給藥灌胃期間模型組死亡2只，辛伐他汀組死亡1只，蘇木乙酸乙酯提取物組死亡1只，大鼠總死亡率為10%，將死亡大鼠解剖發(fā)現(xiàn)，辛伐他汀組1只大鼠無明顯誘因?qū)е滤劳?，其?只由于灌胃時(shí)操作不當(dāng)液體進(jìn)入氣管導(dǎo)致死亡。

2.2 各組TC水平比較 與空白組對(duì)比，模型組大鼠血清TC水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組對(duì)比，辛伐他汀組及蘇木乙酸乙酯提取物組TC水平均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與辛伐他汀組對(duì)比，蘇木乙酸乙酯提取物組TC水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠TC水平比較(±s) 單位：mmol/L

2.3 各組血清IL-18水平比較 與空白組對(duì)比，模型組大鼠血清IL-18水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組對(duì)比，辛伐他汀組及蘇木乙酸乙酯提取物組IL-18水平均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與辛伐他汀組對(duì)比，蘇木乙酸乙酯提取物組IL-18水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 各組大鼠血清IL-18 水平比較(±s) 單位：pg/mL

3 討 論

蘇木，又名赤木、蘇方、蘇方木等，為豆科植物蘇木的干燥心材，在我國主要分布于兩廣、四川、貴州等地，但以廣西為主要產(chǎn)地，其味甘、咸，微澀，性平，歸心、肝脾經(jīng)，是一味常用活血化瘀藥，具有活血化瘀、消腫止痛的作用[6-8]。趙煥新等[9]為證實(shí)蘇木的主要化學(xué)成分，從蘇木乙酸乙酯提取物中分離出8個(gè)化合物，同時(shí)，將這8種化合物在體外培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有明顯的保護(hù)作用。有研究表明，蘇木乙酸乙酯提取物具有明顯的抗炎及抗血脂的藥理作用[10]。近年來，蘇木在心血管領(lǐng)域，尤其在抗AS方面的應(yīng)用越來越廣泛。

在AS的形成過程中，脂肪浸潤(rùn)學(xué)說、炎癥反應(yīng)學(xué)說等受到了人們的廣泛關(guān)注。特別在AS發(fā)生、發(fā)展的過程中，炎癥與血脂代謝紊亂兩者往往有著一定的聯(lián)系，相互影響，加快了AS的形成。血脂代謝異常會(huì)刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放炎性細(xì)胞，而炎性細(xì)胞移至內(nèi)皮下，會(huì)轉(zhuǎn)換成巨噬細(xì)胞，形成泡沫細(xì)胞貼敷于血管壁上，后逐漸演變?yōu)橹|(zhì)斑塊，而斑塊不斷聚集會(huì)導(dǎo)致動(dòng)脈壁增厚變硬，血管腔狹窄，甚至?xí)l(fā)生完全閉塞，此外，不穩(wěn)定的粥樣斑塊破裂極易導(dǎo)致局部血管出血、鈣化等，繼而導(dǎo)致急性心腦血管事件的發(fā)生[11]。而血清TC是血脂成分中的一項(xiàng)極為重要的指標(biāo)，其含量增加會(huì)促使紅細(xì)胞的硬化，進(jìn)而影響紅細(xì)胞的變形能力，使血液黏稠性增加、細(xì)胞膜的流動(dòng)性下降，引起血脂代謝紊亂[12]。師豪等[13]研究表明TC等血脂指標(biāo)異常的表達(dá)可能是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的重要機(jī)制之一。而炎癥反應(yīng)是由一系列致炎因子及細(xì)胞因子參與的復(fù)雜過程。研究表明，白細(xì)胞介素常作為炎癥的特異指標(biāo)在AS發(fā)生發(fā)展的過程中都有不同程度的表達(dá)，其變化與AS的程度具有顯著的關(guān)系。IL-18是一種多效性前炎性細(xì)胞因子，也是強(qiáng)大的致炎誘導(dǎo)劑，在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起重要作用[14]。胡秋玲等[15]研究也表明，IL-18可上調(diào)多種炎性因子，比如上調(diào)干擾素-γ(INF-γ)的表達(dá)和誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)，增加斑塊易損性效應(yīng)及促進(jìn)AS形成，是AS形成的重要生化標(biāo)志物。他汀類藥物既具有降血脂的作用，又具有抗炎作用，在AS的治療中起重要的作用。而中藥對(duì)AS的療效同樣顯著，越來越受到人們的重視。有研究證明，降血脂與抗感染治療可以減慢甚至?xí)孓D(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣斑塊的病變過程，調(diào)控粥樣斑塊，減輕病人的臨床癥狀，減少急性心腦血管事件發(fā)生[16]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在給予高脂飲食的基礎(chǔ)上腹腔注射維生素D3可使SD大鼠血清TC及IL-18水平升高，而給予辛伐他汀和蘇木乙酸乙酯提取物治療后可不同程度降低TC及IL-18水平。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以初步得出結(jié)論：蘇木乙酸乙酯提取物可降低AS模型大鼠血清TC及IL-18水平，其機(jī)制可能是通過抑制炎癥反應(yīng)及改善血脂水平兩方面同時(shí)對(duì)AS起作用。但其抗AS的另一些機(jī)制還有待今后進(jìn)一步的研究。