何鑫，張鳳清

（長春工業(yè)大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，吉林長春130012）

體力疲勞又稱為運(yùn)動性疲勞，指由機(jī)體運(yùn)動所引起的“生理過程不能持續(xù)，其機(jī)能在一特定水平上或不能維持預(yù)定的運(yùn)動強(qiáng)度”的機(jī)體運(yùn)動能力下降的現(xiàn)象。中醫(yī)學(xué)中“疲勞”屬于“虛”的范疇，含“虛勞”“虛損”。《黃帝內(nèi)經(jīng)》中疲勞多稱為“倦”、“解墮”、“困薄”、“身重”、“體重”等，《素問·示從容論篇》中指出“肝虛、腎虛、脾虛，皆令人體重?zé)┰盵1]，中醫(yī)針對“虛勞”采取的措施主要為增強(qiáng)人體的正氣，即《素問·刺法論篇》所言“正氣內(nèi)存，邪不可干”。人的正氣主要由精氣等物質(zhì)構(gòu)成，《素問·金匱真言論》說：“夫精者，身之本也。故藏于精者，春不病溫”，可見對于精的保養(yǎng)十分重要，精的生成是要靠食物化生的氣血不斷來充養(yǎng)，因此補(bǔ)氣血類藥物對于增強(qiáng)人體正氣，緩解疲勞有顯著作用。人參大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺；鹿茸壯腎陽，益精血，強(qiáng)筋骨；黃精可滋陰潤肺、益腎填精；紅景天益氣活血[2]。在《神農(nóng)本草經(jīng)》中，人參、黃精、紅景天均被列為上品，鹿茸為滋補(bǔ)中品。均有千余年食用歷史，可“滋補(bǔ)強(qiáng)壯，延年益壽”。黃精為《衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號）中附件1“既是食品又是藥品的物品名單”收錄，人參、鹿茸、紅景天均為附件2“可用于保健食品的物品名單”收錄。通過查閱現(xiàn)代藥理學(xué)的相關(guān)國內(nèi)外報(bào)道，發(fā)現(xiàn)人參[3-5]、鹿茸[6-8]、黃精[9-11]、紅景天[12-14]在緩解體力疲勞方面有較為顯著的作用。同時(shí)有報(bào)道人參、鹿茸配伍制劑有緩解體力疲勞作用[15]，黃精和紅景天合用也可以抗疲勞[16]，但是作用機(jī)制尚不明確，并且人參、鹿茸、黃精、紅景天合用緩解體力疲勞的研究也未見文獻(xiàn)報(bào)道。同時(shí)深入探討作用機(jī)理，單個組分的研究是必不可少的，可以說復(fù)方的研究是總體的綜合過程，而單組分的探究則是獨(dú)立的分析過程[17]。因此本研究針對人參鹿茸復(fù)方酒劑以及單個組分酒劑進(jìn)行了負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、血漿尿素測定、血乳酸測定以及肝糖原測定，以期研究復(fù)方的活性增強(qiáng)效果，進(jìn)一步發(fā)掘配方的緩解疲勞機(jī)制。

1 材料

1.1 動物

選用清潔級健康雄性ICR小鼠360只，體重為19.0 g～21.0 g，購自長春生物制品研究所有限責(zé)任公司，動物室環(huán)境條件：溫度為19℃～23℃，相對濕度40%～65%。

1.2 儀器

T-1000型電子天平：深圳市博途電子科技有限公司；JA-2003型電子天平：上海越平科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；JJ-100型電子天平：天津盛鑫泰科技有限公司；TDZ5WS離心機(jī)：張家港市銳騰機(jī)械制造有限公司；HH系列-8水浴鍋：青島聚創(chuàng)環(huán)保集團(tuán)有限公司；HBS-1096A多功能酶標(biāo)儀：南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DB080小鼠恒溫游泳池：北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司；PD866E-345K計(jì)時(shí)器：湖南興科達(dá)電氣有限公司。

1.3 樣品制備與試劑

人參鹿茸復(fù)方酒劑（人參∶鹿茸∶黃精∶紅景天≈3∶2∶6∶3，質(zhì)量比）、人參酒、鹿茸酒、黃精酒、紅景天酒、酒基：長春巔峰科技有限公司。人參鹿茸復(fù)方酒劑經(jīng)60℃減壓濃縮，以蒸餾水及50°酒基調(diào)配至乙醇濃度15%（體積分?jǐn)?shù)），相當(dāng)于每毫升含0.058 g原料作為低劑量組（L組）的給藥濃度，再同法分別制備相當(dāng)于每毫升含0.117、0.350 g原料作為中劑量組（M組）和高劑量組（H組）的灌胃濃度，冷藏備用。單組分酒劑經(jīng)過同人參鹿茸復(fù)方酒劑相同操作，均調(diào)配至乙醇濃度15%（體積分?jǐn)?shù)），作為各組的灌胃濃度，冷藏備用：人參樣品相當(dāng)于每毫升含原料0.025 g，鹿茸樣品相當(dāng)于每毫升含原料0.017 g，黃精樣品相當(dāng)于每毫升含原料0.050 g，紅景天樣品相當(dāng)于每毫升含原料0.025 g。

血漿尿素測定試劑盒、肝糖原測定試劑盒、乳酸測定試劑盒：南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 分組與給藥

雄性ICR小鼠360只，適應(yīng)3 d后隨機(jī)分為4大組，分別進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，血漿尿素測定，肝糖原測定和血乳酸測定，每大組90只。將每組90只雄性ICR小鼠隨機(jī)分為9劑量組，每組10只，即對照組、酒基對照組、人參鹿茸復(fù)方低劑量組（L組）、中劑量組（M組）、高劑量組（H組）、人參組、鹿茸組、黃精組、紅景天組。對照組小鼠給予蒸餾水，灌胃量10 mL/kg，每日1次；酒基對照組給予含15%（體積比）乙醇的酒基溶液，灌胃量10 mL/kg，每日1次；試驗(yàn)組分別給予相應(yīng)濃度樣品（單個組分給予量相當(dāng)于復(fù)方中劑量組各單組分的用量），灌胃量10 mL/kg，每日1次。

連續(xù)灌胃30 d后，檢測各項(xiàng)指標(biāo)，每周進(jìn)行體重測定1次，根據(jù)體重對灌胃量進(jìn)行調(diào)整。

2.2 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

末次給小鼠灌胃樣品30 min后，將小鼠尾根部固定5%體重的鉛絲，小鼠放置在游泳箱中進(jìn)行游泳試驗(yàn)測定，游泳池水深約35 cm，水溫控制在（25±1）℃。記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間，作為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。

2.3 血漿尿素測定

末次給小鼠灌胃樣品30 min后，小鼠放置在游泳箱中進(jìn)行游泳，水溫控制在（30±1）℃，游泳時(shí)間為90 min，游泳后將小鼠取出休息60 min后立即取眼球采血。將采集的血液離心后，吸取20 μL血漿，用血漿尿素測定試劑盒（二乙酰—肟法）測定血漿尿素值。

2.4 肝糖原測定

末次給小鼠灌胃樣品30 min后，立即處死，取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，準(zhǔn)確稱取肝臟75mg，用肝糖原測定試劑盒測定肝糖原含量。

2.5 血乳酸測定

末次給小鼠灌胃樣品30 min后，小鼠放置在游泳箱中進(jìn)行游泳，水溫控制在（30±1）℃，游泳時(shí)間為10 min，分別在游泳前0 min，游泳后0 min、休息20 min進(jìn)行小鼠眼內(nèi)眥靜脈叢采血，采用乳酸測定試劑盒測定小鼠血乳酸含量。血乳酸曲線下面積用下式表示：

血乳酸曲線下面積＝1/2×（游泳前血乳酸值＋游泳后0 min的血乳酸值）×10＋1/2×（游泳后0 min的血乳酸值＋游泳后休息20 min的血乳酸值）×20

2.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

3 結(jié)果與分析

3.1 小鼠負(fù)重游泳時(shí)間測定結(jié)果

小鼠負(fù)重游泳時(shí)間測定結(jié)果如表1所示。

表1 不同樣品對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（n=10，±s）Table 1 Effects of different samples on the time of load swimmingin mice（n=10，±s）

表1 不同樣品對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（n=10，±s）Table 1 Effects of different samples on the time of load swimmingin mice（n=10，±s）

注：*表示與對照組比較P<0.05，#表示與酒基對照組比較P<0.05。

組別 動物只數(shù)初始體重/g終末體重/g負(fù)重游泳時(shí)間/s P水 P酒基對照組 10 20.1±1.1 38.4±2.3 612±407 0.992酒基對照組 10 20.1±1.2 37.9±1.8 636±486 0.992 L 組 10 20.1±1.1 38.7±2.1 853±929 0.653 0.612 M 組 10 20.1±1.1 37.8±2.3 1191±1241*#0.016 0.018 H 組 10 20.1±1.1 38.4±2.3 920±448*# 0.031 0.025人參組 10 20.1±1.0 39.0±0.6 900±616*# 0.024 0.030鹿茸組 10 20.1±1.1 38.6±1.3 913±1013*# 0.025 0.028黃精組 10 20.1±1.1 38.1±1.6 958±220*# 0.012 0.010紅景天組 10 20.1±1.1 37.8±1.2 949±372*# 0.011 0.009

酒基對照組同對照組相比，無顯著性差異，表明酒基對小鼠負(fù)重游泳無影響。中劑量組（M組）、高劑量組（H組）、人參組、鹿茸組、黃精組、紅景天組可延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，同對照組和酒基對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。游泳時(shí)間中劑量組（M組）＞黃精組＞紅景天組＞高劑量組（H組）＞鹿茸組＞人參組。

A.通過天街美好生活的描繪，表現(xiàn)了詩人對黑暗現(xiàn)實(shí)的痛恨，對理想生活的向往，激發(fā)人們?yōu)閷?shí)現(xiàn)這一理想而奮斗。

3.2 血漿尿素水平測定結(jié)果

血漿尿素水平測定結(jié)果如表2所示。

表2 不同樣品對小鼠血漿尿素水平的影響（n=10，±s）Table 2 Effect of different samples on the blood urea nitrogen content in mice（n=10，±s）

表2 不同樣品對小鼠血漿尿素水平的影響（n=10，±s）Table 2 Effect of different samples on the blood urea nitrogen content in mice（n=10，±s）

注：*表示與對照組比較P<0.05，#表示與酒基對照組比較P<0.05。

組別 動物只數(shù)初始體重/g終末體重/g血漿尿素/(mmol/L) P水 P酒基對照組 10 20.1±1.3 38.9±1.6 8.50±1.28 0.999酒基對照組 10 20.1±1.1 38.7±1.0 8.36±1.15 0.999 L 組 10 20.1±1.1 38.7±1.8 7.51±1.40 0.670 0.721 M 組 10 20.1±1.1 38.0±2.1 5.76±0.83*#0.001 0.000 H 組 10 20.1±1.2 38.9±1.6 6.96±0.93 0.078 0.066人參組 10 20.1±1.1 38.9±1.0 6.10±0.81*#0.015 0.020鹿茸組 10 20.1±1.1 38.7±2.1 8.28±0.49 0.972 0.912黃精組 10 20.1±1.1 39.1±1.3 8.04±0.83 0.542 0.652紅景天組 10 20.1±1.1 38.1±1.4 6.23±0.55*#0.022 0.018

酒基對照組同對照組相比，無顯著性差異，表明酒基對小鼠血漿尿素水平無影響。中劑量組（M組）、人參組、紅景天組可降低小鼠血漿尿素水平，同對照組和酒基對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血漿尿素清除能力中劑量組（M組）＞人參組＞紅景天組。

3.3 肝糖原測定結(jié)果

肝糖原測定結(jié)果如表3所示。

表3 不同樣品對小鼠肝糖原含量的影響（n=10，±s）Table 3 Effects of different samples on glycogen in liver content in mice（n=10，±s）

表3 不同樣品對小鼠肝糖原含量的影響（n=10，±s）Table 3 Effects of different samples on glycogen in liver content in mice（n=10，±s）

組別 動物只數(shù)初始體重/g終末體重/g肝糖原/(mg/g肝) P水 P酒基對照組 10 20.1±1.1 38.7±1.1 16.0±8.0 0.997酒基對照組 10 20.1±1.2 38.8±1.7 16.7±9.8 0.997 L 組 10 20.1±1.1 38.1±2.5 19.0±8.5 0.532 0.564 M 組 10 20.1±1.1 37.7±2.2 21.6±12.4 0.316 0.419 H 組 10 20.1±1.2 38.7±1.1 17.2±9.8 0.990 0.890人參組 10 20.1±1.1 38.9±1.3 17.4±13.3 0.941 0.933鹿茸組 10 20.1±1.1 39.3±1.8 18.4±15.0 0.617 0.598黃精組 10 20.1±1.1 38.5±1.6 20.2±1.5 0.943 0.922紅景天組 10 20.1±1.2 38.5±1.3 18.4±0.9 0.968 0.956

酒基對照組同對照組相比，無顯著性差異，表明酒基對小鼠肝糖原水平無影響。各組同對照組和酒基對照組相比均無顯著性差異。中劑量組（M組）和黃精組有一定的增高趨勢。

3.4 血乳酸曲線下面積值測定結(jié)果

血乳酸曲線下面積值測定結(jié)果如表4所示。

表4 不同樣品對小鼠血乳酸曲線下面積的影響（n=10，±s）Table 4 Effect of different samples on area under the blood lactic acid curve（n=10，±s）

表4 不同樣品對小鼠血乳酸曲線下面積的影響（n=10，±s）Table 4 Effect of different samples on area under the blood lactic acid curve（n=10，±s）

注：*表示與對照組比較P<0.05，#表示與酒基對照組比較P<0.05。

組別 動物只數(shù)初始體重/g終末體重/g血乳酸曲線下面積值 P水 P酒基對照組 10 20.1±1.2 38.4±2.4 237±33 1.000酒基對照組 10 20.1±1.1 38.6±1.8 237±39 1.000 L 組 10 20.1±1.1 38.3±1.7 225±23 0.715 0.699 M 組 10 20.1±1.2 37.6±1.2 181±16*# 0.005 0.001 H 組 10 20.1±1.2 38.6±2.4 237±9 0.912 0.901人參組 10 20.1±1.1 38.2±1.3 221±20 0.380 0.355鹿茸組 10 20.1±1.1 38.8±1.3 191±21*# 0.014 0.019黃精組 10 20.1±1.2 38.5±1.4 213±9 0.075 0.087紅景天組 10 20.1±1.0 37.9±1.1 199±12*# 0.037 0.031

酒基對照組同對照組相比，無顯著性差異，表明酒基對小鼠血乳酸含量無影響。中劑量組（M組）、鹿茸組、紅景天組同對照組和酒基對照組相比，血乳酸曲線下面積明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血乳酸曲線下面積降低程度中劑量組（M組）＞紅景天組＞鹿茸組。

3.5 對小鼠體重的影響

4 討論與結(jié)論

復(fù)方配伍一直是許多學(xué)者關(guān)注的重點(diǎn)[18]。人參、鹿茸、黃精、紅景天都被證實(shí)具有緩解體力疲勞的生理活性，但是合用是否能緩解體力疲勞并無相關(guān)研究報(bào)道，本研究針對人參鹿茸復(fù)方以及單組分進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測，期望進(jìn)一步發(fā)掘配方的緩解疲勞機(jī)制。

體力疲勞又稱運(yùn)動性疲勞，是機(jī)體針對過度體力活動而產(chǎn)生的一種生理保護(hù)機(jī)制，當(dāng)疲勞發(fā)生，不僅機(jī)體的工作運(yùn)動能力下降，身體也將呈現(xiàn)亞健康狀態(tài)或疾病前兆。而當(dāng)體力疲勞長期持續(xù)下去，身體過早衰老、罹患器質(zhì)性疾病的風(fēng)險(xiǎn)也將大幅增高[19]。力竭游泳實(shí)驗(yàn)、血漿尿素、肝糖原及血乳酸是檢測機(jī)體疲勞的重要指標(biāo)[20]。運(yùn)動能力的下降是體力疲勞最為直觀的外在表現(xiàn)，負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)可以反映出運(yùn)動能力的下降程度，同時(shí)也是緩解體力疲勞能力的重要指標(biāo)[21-22]。血漿尿素隨體內(nèi)氨基酸分解代謝而增高，當(dāng)運(yùn)動負(fù)荷增加，氨基酸分解加劇，血漿尿素水平也呈正向增高。緩解體力疲勞樣品抑制或清除血漿尿素的能力同其抗疲勞功效呈正相關(guān)[23]。糖原是機(jī)體重要能量來源，肝糖原是貯存糖原的主要方式之一，糖原分解為葡萄糖以滿足運(yùn)動所需，糖原儲存量同運(yùn)動耐力有密切的關(guān)系，當(dāng)糖原消耗過多會引起機(jī)體疲勞[24-25]。乳酸是在劇烈運(yùn)動的情況下，肌肉因缺氧發(fā)生糖酵解反應(yīng)而產(chǎn)生的，乳酸大量積累導(dǎo)致肌肉酸脹，引起疲勞。因此血乳酸清除能力越強(qiáng)，抗疲勞作用越顯著[26-27]。

在實(shí)驗(yàn)中，人參鹿茸復(fù)方中、高劑量組以及單組分組均可以顯著提高負(fù)重游泳時(shí)間，按照游泳時(shí)間排序，中劑量組（M組）＞黃精組＞紅景天組＞高劑量組（H組）＞鹿茸組＞人參組。其中中劑量組（M組）效果最優(yōu)。復(fù)方中劑量組（M組）、人參組、紅景天組可顯著降低小鼠血漿尿素水平，按降低水平排序中劑量組（M組）＞人參組＞紅景天組，血漿尿素清除能力也以中劑量組（M組）為最優(yōu)。中劑量組（M組）、鹿茸組、紅景天組同對照組和酒基對照組相比，血乳酸曲線下面積明顯降低。按血乳酸曲線下面積降低程度中劑量組（M組）＞紅景天組＞鹿茸組，中劑量組（M組）的血乳酸清除能力最優(yōu)。各組均不能增加肝糖原儲備量，但中劑量組（M組）和黃精組有一定的增高趨勢。

結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1）復(fù)方中劑量組（M組）不僅在負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、血漿尿素檢測、血乳酸曲線下面積都具有陽性結(jié)果，同時(shí)該3項(xiàng)指標(biāo)均超過單組分單獨(dú)使用。推測人參、鹿茸、黃精、紅景天合用，具有協(xié)同增效的作用，可以增強(qiáng)抗疲勞能力。2）人參鹿茸復(fù)方抗疲勞效果明顯，但是當(dāng)劑量加大后，各項(xiàng)指標(biāo)均呈現(xiàn)減弱趨勢，推測人參鹿茸復(fù)方酒劑隨劑量加大后存在一定的疲勞拮抗作用，但作用機(jī)制尚待進(jìn)一步驗(yàn)證。3）單組分中，紅景天組在負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、血漿尿素檢測、血乳酸曲線下面積3項(xiàng)指標(biāo)都呈陽性結(jié)果，人參組和鹿茸組次之，黃精組僅在負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)中呈陽性結(jié)果，但黃精組的游泳時(shí)間僅次于復(fù)方中劑量組（M組），在肝糖原檢測中，各組均無陽性結(jié)果，但復(fù)方中劑量組（M組）和黃精組存在一定的肝糖原儲備增加趨勢，推測各組分在緩解體力疲勞作用方面有各自的作用機(jī)制，且作用靶點(diǎn)不盡相同，尚待進(jìn)一步研究。