夏永欣 張 萌 張向東

食管癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，而我國是食管癌的高發(fā)國家，近年來其發(fā)病率還有逐年上升的趨勢[1-2]。因早期癥狀不明顯，所以多數(shù)患者確診時已經處于中晚期。研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，星形細胞上調基因-1(AEG-1)能夠促進人體多種腫瘤的增殖、遷移和侵襲。E-鈣黏附蛋白(E-cad)在正常生理狀態(tài)中可維持上皮細胞的基本結構和功能，而在多種腫瘤的表達中明顯減少或缺失。本研究旨在探討AEG-1和E-cad在食管鱗癌組織中的表達及相關性，以期能為患者治療和預后提供臨床指導價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年1月至2018年1月收治的64例食管癌患者，男性34例，女性30例，年齡33～75歲，平均(53.15±10.24)歲。納入標準：①符合食管癌的診斷標準[5]，且經組織病理活檢確診為食管癌者；②年齡在33～75歲之間者；③術前未行放化療及免疫治療者；④臨床資料完整者；⑤患者及家屬對本研究內容均知情同意等。排除標準：①存在手術禁忌無法提取標本者；②伴有心、肝、腎嚴重功能障礙者；③伴有嚴重感染、凝血系統(tǒng)疾病者；④臨床資料不完整者等。分別取患者食管癌組織和癌旁組織(距離癌組織≥5 cm)為食管癌組織組(n=64)和癌旁組織組(n=64)。本院醫(yī)學倫理委員會審核并通過本研究。

1.2 免疫組化法檢測

參照試劑盒說明書上的具體步驟對2組病理組織的AEG-1及E-cad進行SP免疫組化檢測。具體操作如下：取2組病理組織，切成4 μm厚的連續(xù)切片放置載玻片上，石蠟包埋，H2O2封閉，高壓抗原熱修復。滴加一抗，24 h后滴加二抗，DAB顯色后，用蘇木精復染、水洗、封片、拍照。陰性對照采用PBS替換一抗。

1.3 染色結果判定

結果判定由同一位醫(yī)師選用高倍顯微鏡采用雙盲法進行觀察、判定。計數(shù)陽性細胞(染色為棕色)占細胞總數(shù)的百分比，按照顏色和著色陽性細胞數(shù)分為：0分，無著色，著色陽性細胞數(shù)≤10%；1分，灰黃色，著色陽性細胞數(shù)>10%～50%；2分，金黃色，著色陽性細胞數(shù)>50%～75%；3分，棕黃色，著色陽性細胞數(shù)>75%。陰性：0～2分，陽性：≥3分。

1.4 觀察指標

(1)食管癌組織組及癌旁組織組AEG-1及E-cad的表達水平差異；(2)食管癌組織中AEG-1及E-cad表達的相關性；(3)AEG-1和E-cad的表達與臨床病理的關系。

1.5 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0進行處理，構成比以百分率(%)標示，采用χ2檢驗進行比較，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義，相關分析采用Spearman。

2 結果

2.1 食管癌組織組及癌旁組織組AEG-1及E-cad表達

食管癌組織組AEG-1的陽性表達率顯著高于癌旁組織組(P<0.01)，E-cad的陽性表達率顯著低于癌旁組織組(P<0.01)，差異均有統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 AEG-1及E-cad在食管癌組織組及癌旁組織組的表達(例，%)

2.2 AEG-1及E-cad在食管癌組織中表達的相關性

AEG-1及E-cad在食管癌組織中的表達呈明顯負相關性，(P<0.01)。見表2。

表2 AEG-1及E-cad在食管癌組織中表達的相關性/例

2.3 AEG-1和E-cad的表達與臨床病理特征的關系

癌細胞分化程度、浸潤程度和淋巴結轉移是AEG-1在食管癌組織中陽性表達的影響因素，癌細胞分化程度、浸潤程度、臨床分期和淋巴結轉移是E-cad在食管癌組織中陽性表達的影響因素，差異均具有統(tǒng)計學意義(P均<0.01)。見表3。

3 討論

近年來，世界許多國家和地區(qū)食管癌發(fā)病率都呈逐年升高的趨勢[6]。目前生物學指標的檢測在食管癌患者治療及預后評估中的價值日漸凸顯，了解這些生物學指標對于指導治療、預測預后具有積極的作用[7]。

AEG-1是新近發(fā)現(xiàn)的原癌基因，位于8號染色體上。大量研究[8]表明，AEG-1可有效促進腫瘤細胞的增殖和轉移。相關研究[9]發(fā)現(xiàn)，AEG-1在多種惡性腫瘤中都處于高表達狀態(tài)。本結果顯示，食管癌組織中AEG-1的陽性表達率顯著高于癌旁組織。同時本研究通過分析AEG-1的表達與臨床病理特征的關系，結果顯示：癌細胞分化程度、浸潤程度和淋巴結轉移是AEG-1在食管癌組織中陽性表達的影響因素。大量研究[10]發(fā)現(xiàn)，AEG-1的表達與食管鱗癌組織的浸潤程度和淋巴結轉移具有顯著的相關性，與患者的不良預后存在密切聯(lián)系?；A研究[11]證實，AEG-1在淋巴結轉移的腫瘤組織中表達量異常增加，顯著高于未發(fā)生轉移的腫瘤組織，提示AEG-1與腫瘤組織的浸潤和轉移存在密切聯(lián)系。同時本研究還發(fā)現(xiàn)在食管癌組織中AEG-1的表達與腫瘤的分化程度存在密切聯(lián)系，而與患者的性別、年齡及腫瘤的病理類型、部位無關，其具體機制還需進一步探討。

表3 AEG-1和E-cad的表達與臨床病理特征的關系(例，%)

E-cad是鈣黏蛋白家族的一種，其基因位于16q22-1。生理狀態(tài)中，E-cad能夠介導細胞與細胞外基質間的黏附反應，維持組織結構完整性。研究[12]發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞會穿透基膜和細胞外基質，浸潤至機體的血管、淋巴中，提示，腫瘤組織的轉移與細胞連接結構的破壞密切相關。研究[13-14]證明，E-cad的表達缺失將會降低細胞間的黏附力，促進癌組織去分化和轉移，影響患者預后。沈瓊等[15]研究發(fā)現(xiàn)，E-cad在正常增生期子宮內膜的表達明顯高于癌性內膜中的表達，而且隨著子宮內膜癌患者臨床分期、淋巴轉移及浸潤深度的增加，其陽性率也呈逐漸下降的趨勢。本研究通過對64例食管癌患者食管癌組織和癌旁組織進行免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中AEG-1的陽性表達率顯著高于癌旁組織，E-cad的陽性表達率顯著低于癌旁組織；癌細胞分化程度、浸潤程度、臨床分期和淋巴結轉移是E-cad在食管癌組織中陽性表達的影響因素。與相關研究[16]報道一致。

本研究通過分析AEG-1及E-cad在食管癌組織表達中的相關性，結果顯示，AEG-1及E-cad在食管癌組織表達中呈明顯負相關性。鈣黏附蛋白E是一種細胞跨膜蛋白，其作用機制為，E-cad與β連環(huán)素結合形成E-cad/β連環(huán)素復合體，維持組織結構的功能。相關文獻[17]報道，AEG-1可通過激活Wnt/β-catenin通路，降低β-catenin水平，加強表面黏附分子的表達。另外，有研究[18]證實，食管癌組織的標本中，AEG-1表達水平越高，E-cad表達就越低，提示AEG-1可能是通過Wnt/β-catenin信號通路以下調E-cad的表達。

綜上，食管癌患者病理組織AEG-1呈陽性表達，E-cad呈陰性表達，且AEG-1及E-cad在食管癌組織表達中呈明顯負相關性。