方 萍 蔡德成 沈 菲 張成芳

(1.廣東省廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院 廣州 510800；2.廣東省南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院 廣州 510631)

RSA是指同一對(duì)夫婦連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)，病因復(fù)雜[1]。有研究表明，TAFI水平與RSA的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)[2]，是體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的組成部分[3]。本研究擬對(duì)RSA患者及正常妊娠婦女的TAFI基因編碼區(qū)+1040C/T(rs1926447)進(jìn)行多態(tài)性分析，探討rs1926447與RSA的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月～2019年12月在廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院就診并診斷為RSA的137例患者作為RSA組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)夫妻雙方既往體健，無(wú)家族遺傳病史；(2)女方為育齡婦女，成功分娩一胎以上，有2次或2次以上的自然流產(chǎn)史；(3)經(jīng)檢查未發(fā)現(xiàn)任何導(dǎo)致流產(chǎn)的常見病因，符合RSA診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。另以103例同期在我院健康產(chǎn)檢的女性作為對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1基因組DNA提取

抽取外周靜脈血2.0ml，采用經(jīng)典酚/氯仿方法抽提基因組DNA，保存于-20℃。

1.2.2SNaPshot法SNP分型

DNA預(yù)擴(kuò)增→模板DNA制備和引物設(shè)計(jì)→SNaPshot PCR制備和產(chǎn)物純化→電泳樣品制備→光譜校正→毛細(xì)管電泳檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般資料

兩組年齡和妊娠次數(shù)均有顯著性差異(P<0.05)，見表1。

表1 一般資料比較

2.2 兩組rs1926447不同基因型間Fib、D-dimer水平差異分析

RSA組rs1926447-C/C和C/T的Fib與D-dimer水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

3 討論

TAFI是存在于血漿中的一種蛋白酶原，能被多種物質(zhì)激活而具有抑制纖維蛋白溶解的作用，不僅具有抑制纖溶的作用，而且參與炎癥性疾病的調(diào)節(jié)。TAFI基因編碼區(qū)+1040位點(diǎn)存在C/T多態(tài)性，導(dǎo)致325位由異亮氨基酸(Ile-325)突變?yōu)樘K氨酸(Thr-325)，Ile-325比Thr-325表達(dá)高60%的抗纖溶活性，而且活化TAFI(TAFIa)的半衰期有所延長(zhǎng)。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)塞爾維亞人群中TAFI基因編碼區(qū)+1040位點(diǎn)的多態(tài)性與血液中TAFI水平相關(guān)，攜帶純合突變型T/T發(fā)生RSA的風(fēng)險(xiǎn)是野生型C/C的1.23倍，是雜合子C/T的1.34倍。而在本研究人群中，C等位基因常見于對(duì)照組中，而T等位基因多見于病例組中，但是兩者沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示+1040C/T的多態(tài)性不能作為RSA的預(yù)測(cè)因素，無(wú)法表明TAFI的分子或抗原水平在妊娠或RSA中的作用，這意味著TAFI基因編碼區(qū)+1040位點(diǎn)的多態(tài)性可能在不同RSA人群中存在種族特征的不同。

表2 RSA組與對(duì)照組rs1926447不同基因型的Fib與D-dimer水平比較

綜上所述，人群中存在TAFI基因的遺傳易感性，RSA患者組中C/T與T/T基因型的頻率增加，暗示等位基因T可能是發(fā)生RSA的潛在危險(xiǎn)因素。