王常悅,盧燕
(復旦大學藥學院,上海 201203)
藏醫(yī)藥是中國醫(yī)藥領(lǐng)域的一顆明珠,它是藏民族同胞在總結(jié)了三千多年來長期醫(yī)藥實踐的基本知識理論的基礎(chǔ)上,又將漢族的中醫(yī)藥學以及天竺、大食的醫(yī)學藥學理論加以吸收融合所形成的獨特的醫(yī)藥體系[1]。青藏高原是傳統(tǒng)藏藥的主產(chǎn)地之一,其復雜的地理和生態(tài)環(huán)境造就了那里極為豐富的植物資源,也賦予了藏藥獨特的療效和藥用價值。
五味甘露是藏民族的醫(yī)療方法中不可缺少的重要方劑,也是藏藥浴應(yīng)用的基本處方,其對于配伍藥物和疾病治療的極大包容性奠定了其在藏藥中無法撼動的地位,在藏民族甚至附近其他少數(shù)民族的聚集地的應(yīng)用非常廣泛。五味甘露的主方是“杜鵑、圓柏、水柏枝、藏麻黃、青蒿”,由于疾病的多樣性和個體差異性,五味甘露藥浴在使用時往往是根據(jù)病癥增加一些配伍使用的藥物。確定復方后按照一定的制作工藝進行配制后即可使用。
《四部醫(yī)典》對五味甘露的評價極高,認為其可醫(yī)所有在藏醫(yī)理論中認為因“隆”失衡引起的疾病,而現(xiàn)代藥理研究也證明五味甘露具有極為豐富的藥理活性,也預示著針對五味甘露的研究是具有重要意義的。
五味甘露方是由宇妥寧瑪·允丹貢布于公元8 世紀最早記載于藏醫(yī)經(jīng)典《四部醫(yī)典》中,但其具體成分并沒有列于書中,《四部醫(yī)典》初刻版中亦僅僅譯出“五味甘露”和“五甘露”這個復方名。然而在馬世林譯本中,在初刻版中“五甘露”對應(yīng)的位置則直接出現(xiàn)了“藥用青蒿、杜鵑花、藏麻黃、圓柏枝、水柏枝”這樣的譯文。后來在《四部醫(yī)典》的注釋本《祖先言教》和《醫(yī)學四續(xù)注釋·藍琉璃》中都分別給出了一樣的五味甘露的組成成分:杜鵑、圓柏、藏麻黃、水柏枝和青蒿。
1.1 杜鵑 藏藥名為“達里”,現(xiàn)知的藏醫(yī)應(yīng)用過的杜鵑超過20 種,在藏醫(yī)理論中將杜鵑分為黑白兩種,其中應(yīng)當入藥的為白杜鵑,常見的植物基源有杜鵑科(Ericaceae)杜鵑屬(Rhododendron)植物烈香杜鵑(R.anthopogonoides)和櫻草杜鵑(R.primuliflorum)的花和葉[3-5]。杜鵑屬植物最有代表性的成分是黃酮類的成分,其他成分還包括揮發(fā)油、三萜類、二萜類、甾體類等[6-7]。根據(jù)目前的研究,烈香杜鵑中的槲皮素(quercetin)、槲皮苷(quercitrin)等黃酮類成分可以提供鎮(zhèn)咳、平喘的功效,其揮發(fā)油成分在抗菌、抗炎、松弛平滑肌等方面都具有一定的活性[8]。對櫻草杜鵑的研究相對更少,但可以明確的是櫻草杜鵑中也含有大量的黃酮類成分,其在抗氧化方面顯示出良好的活性[9]。
1.2 圓柏 藏藥名為“徐巴”,柏科(Cupressaceae)刺柏屬(Juniperus)的多種植物的枝葉都可以入藥,包括大果圓柏(J.tibetica)、滇藏方枝柏(J.wallichiana)、叉子圓柏(J.vulgaris)、祁連圓柏等(J.przewalskii),且刺柏屬植物的化學成分非常多元化,包括揮發(fā)油、萜類、黃酮類、木脂素類、香豆素類、甾體類等化合物[10-12]。以往的研究表明,刺柏屬植物的揮發(fā)油成分顯示出一定的抗菌、抗腫瘤和殺菌作用[13-14],而黃酮類成分,如柏木雙黃酮(cupressuflavone)等,無論是在抗炎、抗氧化方面還是在解熱鎮(zhèn)痛方面,甚至在降壓、降脂、降血栓、抗病毒和殺蟲方面都呈現(xiàn)出了良好的活性[15-16]。
1.3 藏麻黃 藏藥名為“策敦木”,本味藥材的基源比較明確,入藥植物為麻黃科(Ephedraceae)麻黃屬(Ephedra)植物藏麻黃(E.saxatilis)的地上部分,也有地方以山嶺麻黃(E.gerardiana)和西藏中麻黃(E.intermediavar.tibetica)等代替藏麻黃使用[17]。目前對于藏麻黃的研究較少,化學成分和藥理活性方面主要是對麻黃屬的其他植物進行較為深入的研究,從以草麻黃(E.sinica)為典型的麻黃屬植物中分離鑒定出145 種化合物[18],最典型的化學成分是生物堿類,以麻黃堿類及其類似物為主,在體內(nèi)具有較強的抗炎活性,咪唑類生物堿則顯示出抗氧化和保肝活性,除此以外還包括黃酮類、鞣質(zhì)類、多糖類、揮發(fā)油類等[19]。麻黃水提物顯示出抗腫瘤活性[20],酚類和黃酮類成分具有抗氧化作用[21],麻黃提取物在鎮(zhèn)痛方面有顯著作用且在體外有抗HIV活性[22-23],而去除麻黃堿類成分的麻黃提取物則表現(xiàn)出抗流感病毒作用[22-23]。另外麻黃多糖具有抗炎鎮(zhèn)痛的作用[25]。
1.4 水柏枝 藏藥名為“翁布”,怪柳科(Tamaricaceae)水柏枝屬(Myricaria)的多種植物都可以作為本味藥材的植物基源,如三春水柏枝(M.paniculate)、寬苞水柏枝(M.bracteate)和小花水柏枝(M.wardii)等[26],主要入藥部位為花、枝葉和嫩芽。至今對多種水柏枝的化學成分均有研究,主要成分包括黃酮類、鞣質(zhì)類、三萜類、酚酸類、木脂素類和長鏈脂肪酸等[27]。水柏枝的水提物及醇提物均具有較為廣譜的抑菌作用[28],其水提物在抗炎鎮(zhèn)痛、提高細胞免疫、抗自由基、抗氧化等方面都顯示出良好的活性,且證明其中黃酮成分對抗炎活性有較大貢獻[27,29-31]。水柏枝中的鞣質(zhì)類具有體內(nèi)抗腫瘤作用和體外細胞毒活性[32-33],萜類則具有鎮(zhèn)靜和抗菌的作用[34-35]。對于藏藥水柏枝的質(zhì)量標準的建立現(xiàn)在也已經(jīng)有比較全面地研究,《中國藥典》對原植物性狀鑒別和顯微鑒別進行了規(guī)定[36],也有研究者補充了TLC鑒別、水分測定、灰分測定、浸出物測定、含量測定等方面[37]:TLC鑒定以沒食子酸作為對照,以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1,V/V/V)為展開劑,并以0.5%三氯化鐵乙醇溶液顯色,于日光燈下進行檢視;以烘干法測定其水分,擬定水柏枝藥材水分不得超過10.0%;擬定水柏枝藥材的總灰分不得超過6.0%,酸不溶性灰分則不得超過2.5%;擬定水柏枝藥材的水浸出物不得低于15.0%,醇浸出物則不得低于10.0%;以C18柱為固定相、乙腈- 0.1%磷酸溶液(5∶95,V/V)為流動相測定沒食子酸的含量要求不得少于4 mg·g-1。
1.5 青蒿 藏藥名為“坎巴”,對于藥用青蒿的基源,也一直存在著較大的爭議,目前可查歷史上多用的包括大籽蒿(Artemisiasieversiana)、黃花蒿(A.annua)、青蒿(A.carvifolia)等多種菊科(Compositae)蒿屬(Artemisia)植物的地上部分,在現(xiàn)在的應(yīng)用中基本確定本味藥材的植物基源為大籽蒿。大籽蒿中主要含有倍半萜類、黃酮類、甾類、木脂素類及揮發(fā)油類等[38-39]。根據(jù)目前的報道,大籽蒿具有祛痰平喘的藥效,醇提物具有抗人大腸癌細胞作用;倍半萜類成分,如苦艾素(bacosine)和蓍草苦素(achillin),顯示出體外抗腫瘤作用和抗過敏作用;黃酮類化合物如蘆丁(rutin)具有抗炎作用;甾類化合物則有強抗炎、強抗菌和抗病毒作用[40-41]。
作為藏藥浴的經(jīng)典,五味甘露只是一個基礎(chǔ)方,其組方具有很強的開放性,在實際應(yīng)用中往往循證進行輔助藥物的辯證加減,也常常與其他藥物聯(lián)用。用以與五味甘露配伍的藥物很多,包括植物類藥物、動物類藥物和礦物類藥物,且多以清熱燥濕的藥物為主。
2.1 植物類配伍藥物 植物類配伍藥物是五味甘露藥浴應(yīng)用時最常使用的配伍藥物,常見的有文冠木、決明子、天門冬、紅景天、藏紅花等。
2.2 動物類配伍藥物 動物類配伍藥物比較少見,常用的有犀牛角、麝香以及動物的內(nèi)臟、肉、骨及糞便等,如獐子糞和麝糞。
2.3 礦物類配伍藥物 礦物類藥物也常常作為配伍藥物出現(xiàn)在藏藥浴的復方中,如珍珠母、滑石、硼砂等。值得注意的是,藏藥浴是源于對天然溫泉的仿制,礦泉浴中富含礦物質(zhì),是藏族浴療法不可忽視的一部分。
五味甘露藥浴作為藏藥經(jīng)典方劑,其制作工藝在很長一段時間內(nèi)處于保密狀態(tài),但可以知道的是,五味甘露絕不僅僅只是將五味藥材簡單地經(jīng)過打粉后混合,而是利用藏藥材常用的發(fā)酵法炮制而成。根據(jù)目前的研究,林扎西卓瑪[42]認為五味甘露藥浴液制作需要發(fā)酵、煎熬及輔助藥物的配伍這3個步驟:首先將等比例五味藥材或刺柏葉、杜鵑、水柏枝、藏麻黃、野蒿以1∶1∶2∶2∶3晾干切碎置于銅鍋并加水沒過藥物,浸泡后加熱煮沸直至鍋內(nèi)水蒸完,再冷卻至溫熱后與酒曲混合密封于容器中,10~15 ℃發(fā)酵5~7 d,此時藥物表面應(yīng)當發(fā)白似霜狀并伴有酸味和酒味;然后將輔助藥物添加于發(fā)酵后藥物中并置于銅鍋加水淹沒,浸泡30 min后煎煮至原水量一半時過濾收集濾液,再向濾渣中加水淹沒煮至1/3時取汁并重復一遍;最后將3次濾液混合放冷至50~55 ℃,添加白酒和輔助方的藥粉或藥液,攪勻即成。而根據(jù)艾措千等[43]的專利,制作本藥浴需要等比例的烈香杜鵑、圓柏、大籽蒿、水柏枝、麻黃,洗凈干燥后用水煎煮,取出之后置于發(fā)酵裝置中加入酒曲和糧食白酒(原料∶酒曲∶糧食白酒=100 kg∶2 kg∶2~3 kg)拌勻后于37~40 ℃發(fā)酵48 h,取出曬干并用水蒸氣蒸餾法對揮發(fā)油成分進行富集,再用30%~70%的水或乙醇加熱回流提取3 次,每次提取2 h將提取液合并后濃縮至體積等于原投料量后冷卻沉淀48 h,過濾后再將濾液經(jīng)2~4 萬分子量的分子篩超濾柱后收集或收集濾液經(jīng)大孔樹脂的30%~90%乙醇洗脫液,濃縮至一定體積后加入之前富集的揮發(fā)油和0.1%~2%乙醇或者吐溫增溶,攪勻即成。具體的標準化的五味甘露的制作工藝還有待進一步地考證和規(guī)范。
在藏醫(yī)理論中,認為人體健康的狀態(tài)是由隆、赤巴、培根3種構(gòu)造(又稱“三因”)的平衡維持的,而這三者中任一或若干因素偏盛或偏衰則是疾病的根源[44]。根據(jù)《四部醫(yī)典》的記載,凡是因為隆這個因素失衡導致的“隆類疾病”都可以用浸浴療法治療,書中有言 “可浴四肢僵蜷與腐跋,核與炭疽陳瘡與新瘡,險癥駝背肌骨黃水浮腫,凡屬風癥無遺皆可除”,即可以治療四肢僵硬蜷縮、腿腳瘸跛、疔瘡、新舊瘡、身體浮腫、駝背以及骨內(nèi)黃水病等[44]。采用藥浴的方法可以使得藥物在較高溫度下較長時間地通過皮膚、血管等吸收藥物中的有效成分,再結(jié)合臥于熱炕的物理作用調(diào)節(jié)機體寒熱,調(diào)整三因使三者重新趨于平衡,從而治療疾病[42]。高溫藥浴的形式使得五味甘露藥浴中的藥效成分透過皮膚吸收后經(jīng)血液循環(huán)達到全身各處,尤其是患處,從而發(fā)揮藥效;而藥浴之后的臥炕發(fā)汗則利于祛風排毒[4]。
根據(jù)《四部醫(yī)典》,浸浴法可驅(qū)除濕毒、黃水,能鎮(zhèn)風消腫,使瘦者肌肉豐潤[44]。從幾百年的應(yīng)用中,人們總結(jié)出一定的經(jīng)驗,認為五味甘露藥浴對于多種疾病的治療都能夠顯示非常好的功效。五味甘露藥浴的功效包括:發(fā)汗利水,舒筋活絡(luò),散瘀消腫,祛風散寒,扶正壯陽,提高免疫[45]。藥浴的高溫能夠激發(fā)機體汗水的產(chǎn)生并利于風寒的祛除,由此可見五味甘露藥浴對于小便不利、浮腫等積水性病癥以及類風濕性關(guān)節(jié)炎等寒痹性疾病都有一定緩解能力;而藥物浸浴利于機體筋脈活絡(luò),從而散瘀消腫并達到止痛的效果,從而對風濕性關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎等疾病所引起的強直痙攣和關(guān)節(jié)積液與腫脹產(chǎn)生很好的療效;同時,五味甘露浴能幫助調(diào)節(jié)人體的免疫功能,提高各類疾病的治療概率;另外,結(jié)合其他輔助藥物的功能,以五味甘露為基礎(chǔ)方的各種藥浴可以用于治療皮膚病、婦科病、尿路感染等各種各樣的疾病[45]。
由于五味甘露悠久的使用歷史,各大藏醫(yī)院、蒙醫(yī)院以及中醫(yī)院都長期采用五味甘露藥浴治療多種屬于隆病范圍內(nèi)的疾病并且也取得了良好的療效。應(yīng)用最廣泛的是類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療。青海省藏醫(yī)醫(yī)院[46]在對223例類風濕性關(guān)節(jié)炎患者進行添加文冠木和麝香、五根散及驅(qū)黃水散的五味甘露藥浴和文冠丸等口服治療后,成功治愈65 例,顯著有效者89例,有一般效果者56 例,無效者13 例,總有效率達94.15%。天峻縣藏醫(yī)院對收治的60 例類風濕性關(guān)節(jié)炎患者給予每天兩次的五味甘露藥浴并輔以二十五味兒茶丸等藏藥口服制劑, 最后有顯著藥效的17 例,有藥效的34 例、無效9 例,總有效率達85%[47];而也有研究者發(fā)現(xiàn)五味甘露與小葉毛球蕕藥浴聯(lián)用對類風濕性關(guān)節(jié)炎有更好的療效:青海省玉樹州藏醫(yī)院[47]將100 例類風濕性關(guān)節(jié)炎患者隨機列分為兩組,一組以單純五味甘露藥浴治療,另一組以五味甘露藥浴聯(lián)合小葉毛球蕕藥浴治療,得到了聯(lián)合組的治療總有效率高于單用組的治療總有效率的結(jié)論。
除了類風濕性關(guān)節(jié)炎,也有其他研究者嘗試以五味甘露治療其他隆性疾病,如青海省藏醫(yī)醫(yī)院對48 例銀屑病患者采用五味甘露連續(xù)治療3 周后真菌鏡檢及培養(yǎng)均顯陰性有43 例,治愈率高達89.6%[49];西藏自治區(qū)山南地區(qū)藏醫(yī)院在五味甘露主方基礎(chǔ)上依癥加減硫磺、白蕓香、生黃等藥物并配合十五味乳鵬丸等口服制劑對65例帶狀皰疹患者進行了治療[50],均獲得滿意療效。
綜上所述,五味甘露藥浴的治療范圍是非常廣泛的,其藥效潛力還有待繼續(xù)開發(fā)。
五味甘露對于疾病治療的作用機制是極其復雜的,但目前為止對其藥理作用的研究非常欠缺。迄今對五味甘露的藥理學實驗主要是針對完全弗氏佐劑誘導造模的大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎,從組織器官層面來說,五味甘露藥浴給藥組的大鼠足趾腫脹程度、免疫器官(胸腺和肝臟)臟器系數(shù)、踝關(guān)節(jié)滑膜切片等[51-52]都表現(xiàn)出與模型組非常顯著的差異并趨向于正常對照組的指標。踝關(guān)節(jié)的滑膜組織中JNK1蛋白的表達水平[53]在給予高劑量的五味甘露藥浴后也出現(xiàn)了大幅降低,而JNK對于參與關(guān)節(jié)滑膜中的炎癥反應(yīng)的MAPK信號通路有明顯活化作用,所以抑制JNK1蛋白的表達對于類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療具有一定意義。而同時五味甘露藥浴給藥組大鼠的血清中NF-κB、TNF-α、IL-4、EGF含量都非常接近于正常對照組的值,而TNF-α、IL-4是促進炎性細胞的浸潤以及滑膜組織和血管增生的炎癥因子,NF-κB則會促進這兩種炎癥因子的產(chǎn)生,TNF-α、IL-4又能夠反饋激活NF-κB的產(chǎn)生,從而進入惡性循環(huán);而EGF則會在一定程度上刺激關(guān)節(jié)炎滑膜細胞的過度增生,故這幾個指標的正?;急硎境鑫逦陡事秾τ谘装Y治療的有效性[52]。研究者在研究了各組大鼠下丘腦中5-羥色胺、多巴胺和去甲腎上腺素的含量[54]后發(fā)現(xiàn),五味甘露藥浴的給藥可以大大降低5-羥色胺的含量,而作為一種促炎致病因子,5-羥色胺水平的降低意味著本藥浴具有能夠抑制多種炎癥的能力。另外在測定了各組大鼠的痛閾值后發(fā)現(xiàn),經(jīng)五味甘露藥浴治療的大鼠痛閾更高,對小鼠而言也是無論在醋酸扭體反應(yīng)還是光熱致痛甩尾反應(yīng)中,五味甘露藥浴的治療可以使得小鼠對痛覺的靈敏度下降[55],也可以對大鼠的體溫升高有一定降低作用,這也證明了五味甘露藥浴具有的解熱鎮(zhèn)痛作用。
根據(jù)劉彥平等[56-57]對類風濕性關(guān)節(jié)炎的病人給予五味甘露藥浴治療前后的檢測結(jié)果則可以得出五味甘露藥浴對于人體的免疫系統(tǒng)有很明顯的調(diào)節(jié)作用這一結(jié)論。類風濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清中常常會表現(xiàn)出抗變性IgG的自身抗體,又稱類風濕因子;變性IgG與類風濕因子可以結(jié)合并形成大分子量的免疫復合物,這種復合物會沉積于關(guān)節(jié)滑膜處,從而導致關(guān)節(jié)炎,且類風濕因子和免疫復合物的產(chǎn)生可能與患者體內(nèi)的IgM、IgA、IgG的增高密切相關(guān);劉彥平等的研究表明五味甘露藥浴可以減少類風濕因子的形成,從而治療類風濕性關(guān)節(jié)炎[56]。而趙淑蘭等[57]的研究則進一步對T細胞亞群進行了一系列的分析,結(jié)果表明五味甘露藥浴治療可以使得患者體內(nèi)CD8+細胞增多,CD4+/CD8+比值基本處于健康指標,這也證明了五味甘露藥浴可以幫助恢復免疫系統(tǒng)的平衡,穩(wěn)定機體免疫功能。
另一方面,微量元素,尤其是鋅,同樣也在人體各項功能的發(fā)揮中扮演著重要角色。有研究證明類風濕性關(guān)節(jié)炎患者體液內(nèi)的微量元素含量與健康人相比具有顯著區(qū)別[58],尤其是鋅和鐵元素含量大大低于正常指標,而五味甘露藥浴中含有豐富的微量元素,認為可能是五味甘露藥浴可以幫助補充患者體內(nèi)的鋅含量,從而增強免疫能力。
從藥浴這個形式來看,作為五味甘露的五種植物中含有很多既有親水性又有親脂性的成分,而這些成分既易揮發(fā)又易溶于藥液也易被人體從皮膚吸收,這些成分經(jīng)過毛囊壁到汗腺到皮脂腺再到角質(zhì)層細胞的過程被體表的毛細血管網(wǎng)吸收后進入全身血液循環(huán)從而達到全身各處,尤其是患處,發(fā)揮其中藥效成分所具備的各種藥理作用;而同時藥浴一般要求患者將全身或局部浸于約40 ℃的藥浴液中,高于體表溫度的水溫將使得皮膚毛細血管擴張,促進血液循環(huán),大大提高了藥物吸收效率和藥效作用程度[59-60];而血液循環(huán)的加速能促進新陳代謝,從而加速機體的組織再生和增強機體白細胞的吞噬能力,促使炎性致病因子(如5-羥色胺和氧自由基等)或異物的排除;另外高溫也可以促使揮發(fā)性藥效成分揮發(fā)于周圍空氣中,通過毛孔、口腔、鼻腔等進入體內(nèi),增強各組織器官的活動能力與循環(huán)能力;同時藥浴所獨有的溫熱作用能幫助機體進行高級神經(jīng)中樞的調(diào)節(jié),可以降低體內(nèi)末梢神經(jīng)的興奮度并松弛患者的骨骼肌,從而達到鎮(zhèn)痛的功效[59-60]。
另外,采用藥浴的方法可以使得藥物直接透過皮膚進入體內(nèi)從而發(fā)揮作用,既能避免藥物經(jīng)過口服給藥會對消化道產(chǎn)生的刺激又能減輕肝臟的代謝負擔;同時還能避免消化酶對藥物的分解,大大提高了該藥物的穩(wěn)定性和利用度[59]。
根據(jù)國家藥品標準衛(wèi)生部頒標準藏藥第一冊(標準編號:WS3-BC-0266-95),五味甘露藥浴湯散的處方為五種藥材等比搗碎而得,對其鑒別主要是顯微鑒定和TLC鑒定兩種[62]。
顯微鑒定:取本品置顯微鏡下觀察:纖維狀下皮細胞易見,木質(zhì)化或硅質(zhì)化,多成束,長480~960 μm,直徑10~16 μm;葉表皮細胞多角形或類長圓形,胞壁微彎或平直,直徑15~20 μm;不定式氣孔類圓形或長圓形,直徑17~20 μm,長約20~29 μm,副衛(wèi)細胞3~5 個;木纖維淡黃色,細胞長條形,微木化。
TLC鑒定:稱取本品約5 g,搗碎,加乙醚20 mL,與濃氨試液2 mL,密塞、放置2 h,時時振搖,濾過,殘渣用15 mL乙醚分3 次洗滌,濾過、合并濾液,加稀鹽酸試液2 滴,搖勻、蒸干、殘渣加乙醇2 mL使溶解,濾過,濾液作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品,加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄57 頁)試驗,吸取上述兩種溶液各5 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇-濃氨試液(20∶5∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以茚三酮試液,在105 ℃烘約10 min。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的顏色斑點。
由于目前鑒定方式的局限性,有研究者提出需要進行更全面的TLC和含量測定以提高鑒別方法的專屬性。郝忻偉等[63]提出需要將五味甘露復方與各種單味藥材進行TLC對照才能進行更完善地TLC鑒別,同時他們還建立了一種高效液相色譜的含量測定方法,即將五味甘露散劑用氯仿提取后以1.0 mL·min-1流速,以乙腈∶0.1 %磷酸=25∶75為流動相經(jīng)C18色譜柱在室溫下層析,在210 nm波長下檢測,以麻黃堿作為對照,用外標一點法測定方劑內(nèi)麻黃堿含量。庫進良等[64]也是以麻黃堿為對照,區(qū)別在于其采用水作為提取液,且流動相采用的是水∶乙烷∶十二烷基硫酸鈉∶磷酸=650∶350∶5∶1。但是僅測定麻黃堿含量過分片面[65],于是有研究者提出改進試驗方法,同時測定五味甘露散劑中槲皮素、山奈酚和鹽酸麻黃堿的含量[66]。在高益槐等[66]的專利中,將槲皮素、山奈素和鹽酸麻黃堿作為五味甘露藥浴成分檢測分析的標準,以“Zorbax SB-C18色譜柱,流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液,檢測波長360 nm,體積流量1.0 mL·min-1,柱溫30 ℃”的條件分析槲皮素和山奈素,以“Zorbax SB-C18色譜柱,以乙腈-0.092%磷酸溶液以流動相,檢測波長210 nm,體積流量1.0 mL·min-1,柱溫30 ℃” 的條件分析鹽酸麻黃堿,并用外標法計算五味甘露復方中3種物質(zhì)的含量,從而反應(yīng)整個復方制劑的質(zhì)量。劉鴻雁等[68]則對五味甘露復方各種制劑統(tǒng)一進行了檢測方法的規(guī)范和總結(jié),包括利用植物的粉末顯微特征對復方制劑中的刺柏和水柏枝進行顯微鑒別、將復方提取物與烈香杜鵑、刺柏及大籽蒿對照藥材提取液通過薄層色譜對比進行鑒別、利用HPLC技術(shù)測定復方提取液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量(麻黃所含成分,每1 g制劑所含的鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿總量不少于3.82 mg)以及艾黃素的含量(大籽蒿所含成分,每1 g制劑中艾黃素含量不少于238 μg)。
綜上所述,經(jīng)典藏藥浴五味甘露的組方復雜,各味藥材的基源尚未明確。鑒于同屬植物間化學成分和藥理活性的差異,確定各味藥材的具體植物基源,尤其是優(yōu)質(zhì)基源,是五味甘露現(xiàn)代研發(fā)與質(zhì)量控制的首要任務(wù)。雖然研究者對單獨的各味藥材進行了一定的化學成分的分離和分析,但是對于復方整體的成分并沒有報道。作為經(jīng)過發(fā)酵處理的復方制劑,諸藥的成分之間極有可能發(fā)生一定的相互作用,從而發(fā)生巨大的改變,故全面地對本復方的化學成分進行分析與鑒定是未來對本復方進行系統(tǒng)研究和闡述的必經(jīng)之路。
根據(jù)《四部醫(yī)典》的記載,五味甘露藥浴對于藏醫(yī)所歸屬的“隆”病均可治療,而目前對于本復方的藥理研究,基本都是針對類風濕關(guān)節(jié)炎模型,這是極為不全面的。在未來的研究中,首先需要大范圍地對五味甘露的藥理活性進行篩選,再利用不同疾病模型,測試其在不同疾病領(lǐng)域的治療潛力,同時密切關(guān)注五味甘露藥浴的臨床應(yīng)用,綜合評價本方劑的藥理藥效意義。另外,為了更好地臨床應(yīng)用,必須以更系統(tǒng)的檢測和鑒定方法對五味甘露的方劑進行規(guī)范。目前已有研究者提出對于五味甘露這樣一個復雜方劑的檢測不能只設(shè)立一兩項標準。五味藥材在本方中均占有非常大的比例且各自作用亦不可替代,以任何一種單獨藥物的標準來規(guī)范本方的檢測都是以偏概全。同時,僅以各味藥材作為對照標準也是不夠的,需要在對復方整體進行系統(tǒng)研究并闡明其主要成分及特征后,制定具有專屬性和特異性的鑒定方法。
藏醫(yī)理論與中醫(yī)理論一樣,都是長期的、全面的、自成體系的一套醫(yī)藥學系統(tǒng)。其對于人體疾病的認知和治療都自有其道理。作為藏醫(yī)藥學的經(jīng)典,只有系統(tǒng)地闡述五味甘露藥浴的方方面面,才能讓全世界的人民認識到藏醫(yī)之瑰寶,讓這樣一個經(jīng)歷了時間長河的洗禮和無數(shù)病例的打磨的復方被更多人接受,更好地應(yīng)用于臨床,實踐于治療,造福更多的患者。