陳雯

重慶中藥材有限公司 重慶 401120

續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷（Dipsacus asperoids C．Y．chenget．T．M．Ai）的干燥根，又名川斷，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、續(xù)折傷、止崩漏、安胎等功效[1]秋季采挖，除去根頭及須根，用微火烘至半干，堆置“發(fā)汗”至內(nèi)部變綠色時(shí)，再烘干。續(xù)斷味苦、辛，性微溫，歸肝、腎經(jīng)。酒續(xù)斷多用于風(fēng)濕痹痛，跌撲損傷。鹽續(xù)斷多用于腰膝酸軟。續(xù)斷始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，主要分布于四川、湖北、云南、貴州等地。續(xù)斷中主要成分為皂苷類成分，而續(xù)斷中還含有綠原酸、原兒茶酸、阿魏酸等多種具有顯著療效的酚酸。綠原酸（chlorogenic acid）是由咖啡酸（caffeic acid）與奎尼酸組成的縮酚酸，異名咖啡鞣酸，化學(xué)名3-O-咖啡?？崴幔?-O-caffeoylquinic acid），分子式：C16H18O9，分子量：345．30，是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。綠原酸是抗菌、止血、消炎、利膽、增高白血球、抗病毒藥物的重要原料，具有腎上腺素類似的作用[2]；綠原酸對人有致敏作用，吸人含有綠原酸的植物塵埃后，可發(fā)生氣喘、皮炎等，但食人后可經(jīng)小腸分泌物作用，變?yōu)闊o致敏性物質(zhì)；綠原酸具有降壓和抗腫瘤作用；綠原酸及其衍生物具有比抗壞血酸，咖啡酸和生育酚更強(qiáng)的自由基清除效果，可有效清除DPPH 自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基；它還可抑制低密度脂蛋白的氧化；綠原酸對體內(nèi)自由基的有效清除，對于維持機(jī)體細(xì)胞正常的結(jié)構(gòu)和功能，防止和延緩腫瘤、突變和衰老等現(xiàn)象的發(fā)生具有中藥作用；綠原酸是一種有效的酚型抗氧化劑，其抗氧化能力要強(qiáng)于咖啡酸、對羥苯酸、阿魏酸和丁香酸，以及常見的抗氧化劑，如丁基羥基茴香醚（BHA）和生育酚，但和丁基羥基甲苯（BHT）的抗氧化能力相當(dāng)[3]。本實(shí)驗(yàn)通過分析資料，采取了正交實(shí)驗(yàn)法續(xù)確定續(xù)斷中綠原酸的提取工藝，并對續(xù)斷中綠原酸的含量進(jìn)行了分析。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

中藥粉碎機(jī) 上海淀久中藥機(jī)械制造有限公司

HH-6恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋 江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司

SHZ-D(III)循環(huán)水式真空泵 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司

KQ5200DA型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司

島津LC－20AD高效液相色譜儀 日本島津公司

AL204型電子天平（萬分之一） 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司

DGG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品

續(xù)斷

綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

普惠牌醫(yī)用乙醇 重慶普惠有限公司

鹽酸 重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司

甲醇 重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司

鹽酸 重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司

磷酸 重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司

乙腈（色譜純）

甲醇（色譜純）

超純水

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果分析

2.1 綠原酸含量測定

（1）色譜條件。色譜柱：Hypersil-C18 BDS色譜柱（5μm，250mm＊4．6mm）；流動(dòng)相：

0．5%磷酸溶液-乙腈（17:83）；流速：1ml/min；柱溫：室溫；檢測波長：323nm

（2）標(biāo)準(zhǔn)品配置。精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品3．8mg，置于5ml容量瓶中，用甲醇定容至5ml，即得。

（3）供試品溶液配置。將續(xù)斷藥材置于烘箱中65℃兩小時(shí)烘干，粉碎，過三號(hào)篩，精密稱取5g置于250ml圓底燒瓶中，按表5試驗(yàn)方法加入ph為4的乙醇溶液，靜置2-3h，水浴，過濾取濾液過微孔濾膜（0．45μm），即得。

（4）精密度實(shí)驗(yàn)。取濃度0．226mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每次精密吸取20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積如表1：

表1 記錄峰面積表

計(jì)算得RSD=1．05%，結(jié)果表明，精密度良好。

（5）穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取濃度0．226mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別在0,1h，2h，4h，8h進(jìn)樣，每次精密吸取20μl，記錄峰面積如表2：

表2 記錄峰面積表

計(jì)算得RSD=1．35%,結(jié)果表明，在8小時(shí)內(nèi)，綠原酸樣品穩(wěn)定。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

實(shí)驗(yàn)選取乙醇濃度，提取溫度，物料比，提取次數(shù)4個(gè)因素，設(shè)計(jì)四因素三水平L9（34）正交實(shí)驗(yàn)，正交實(shí)驗(yàn)因素水平表3：

表3 實(shí)驗(yàn)因素水平表

根據(jù)以上兩個(gè)表中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析得出續(xù)斷中提取綠原酸的影響因素順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞乙醇濃度＞物料比＞溫度，較佳工藝條件為：乙醇濃度60%，提取溫度80℃，物料質(zhì)量體積比為20ml/g，提取次數(shù)為3次。

（3）優(yōu)化工藝驗(yàn)證。取續(xù)斷粉末2g，按最優(yōu)工藝進(jìn)行提取，重復(fù)3次，測得綠原酸的平均得率為3．74mg/g。

3 結(jié)語

通過對續(xù)斷中綠原酸提取的正交實(shí)驗(yàn)分析，對各個(gè)數(shù)據(jù)具體而細(xì)致的分析，發(fā)現(xiàn)對提取的綠原酸含量影響最大的因素是提取次數(shù)，其次為物料比，再次為乙醇濃度，影響最小的為提取溫度，進(jìn)而對比選擇出最佳工藝條件為：乙醇濃度60%，提取溫度80℃，物料質(zhì)量體積比為20ml/g，提取次數(shù)為3次。后通過驗(yàn)證試驗(yàn)證明在該條件下，綠原酸平均得率較高。但是本實(shí)驗(yàn)僅僅得到綠原酸的粗品，對續(xù)斷中綠原酸的純化工藝有待進(jìn)一步的研究，也希望通過本實(shí)驗(yàn)使大家引起對續(xù)斷中綠原酸的重視，對續(xù)斷進(jìn)一步的開發(fā)利用。