趙 飛， 張顯波， 韓碧澤， 陳飛雄， 周其椿， 楊 興， 李建光

(貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 水產(chǎn)研究所/貴州省特種水產(chǎn)工程技術(shù)中心， 貴州 貴陽 550025)

鱘魚隸屬于硬骨魚綱輻鰭亞綱、軟骨硬鱗總目鱘形目、鱘科、鱘屬，是現(xiàn)存最古老的脊椎動(dòng)物之一，有活化石之稱[1]。鱘魚生存的溫度為1～35℃，最適溫度為15～25℃[2]。貴州山區(qū)水資源豐富，水質(zhì)優(yōu)良。據(jù)不完全調(diào)查，貴州地下水年排泄量為259億m3，深層地下水儲量181億m3，大部分水溫保持在15～20℃，全省還具有大量大中型水庫、河流等養(yǎng)殖鱘魚的良好資源條件，是養(yǎng)殖鱘魚的理想地。1999年貴州開始引進(jìn)鱘魚進(jìn)行商業(yè)養(yǎng)殖試驗(yàn)，并陸續(xù)在全省各地推廣，取得了良好的效果[3-8]。近年來，貴州鱘魚養(yǎng)殖年產(chǎn)量位居全國前列，并對鱘魚人工繁殖進(jìn)行了研究[9-10]，取得了一定效果，但目前養(yǎng)殖的鱘魚苗種大部分從外省購入。鑒于此，筆者等對鱘魚人工繁殖進(jìn)行深入研究，總結(jié)出規(guī)范化繁殖技術(shù)，有助于提升省內(nèi)苗種供應(yīng)能力，促進(jìn)貴州漁業(yè)發(fā)展。

1 親魚培育

1.1 親魚來源

經(jīng)多年養(yǎng)殖試驗(yàn)表明，具有生長速度快、適宜貴州水環(huán)境條件的鱘魚種類主要是西伯利亞鱘(Acipenserbaeri)、史氏鱘(Acipenserschrenckii)和雜交鱘3種[3，11-15]。親本應(yīng)來源于經(jīng)國家批準(zhǔn)的苗種繁育場，并經(jīng)檢驗(yàn)合格的純種鱘魚。鱘魚親本需達(dá)8齡以上，體重20 kg以上，體質(zhì)健壯，無病無傷。親魚入場后對其進(jìn)行被動(dòng)集成應(yīng)答器(passive integrated transponder，PIT)標(biāo)記[16]，便于后期對親本的生長、繁殖情況做記錄。PIT標(biāo)記后及時(shí)對傷口清理消毒，避免傷口感染病菌。

1.2 親魚飼養(yǎng)管理

1.2.1 魚池 親魚培育池以長方形水泥池為佳，一般規(guī)格為20 m×4 m×1.5 m，有條件的盡可能修建大些。親魚培育池主要由流水渠、魚池和排水渠3個(gè)部分組成，之間有20～30 cm高程差，便于排放殘餌和糞便。魚池進(jìn)、出水口設(shè)置2層攔網(wǎng)，防止雜質(zhì)入塘和魚外逃。水體主要采用連通器原理進(jìn)行交換，以便于調(diào)節(jié)水位和排出底部污物。

1.2.2 水源 其要求水質(zhì)較好和水量充足，如山泉水、水庫水或河水等。鱘魚為亞冷水性魚類[5]，水花階段最適水溫15～19℃，苗種階段為10～22℃，pH 6.5～8.0，溶氧>6 mg/L。

1.2.3 飼養(yǎng) 鱘魚親魚飼料要求高蛋白(一般使用動(dòng)物源蛋白)，含量在40%以上；低脂肪，含量在8%～10%；添加維生素如華羅多維、Vc、EPA/DHA等[17-18]。若有條件，最好添加優(yōu)質(zhì)魚油自制顆粒飼料，其營養(yǎng)全面、均衡，適口性好，便于吸收，滿足性腺發(fā)育所需營養(yǎng)，培育親魚的效果好，其魚卵飽滿度、成熟度高于投喂配合飼料。水溫16℃以上時(shí)投喂飼料，投飼率約為魚體重的1%左右，不宜太高，否則會(huì)導(dǎo)致脂肪過剩，減弱鱘魚的催產(chǎn)效應(yīng)。水溫低于16℃停止投喂飼料，讓親魚停食過冬，消耗體內(nèi)過多脂肪。次年3月水溫升高到18℃時(shí)進(jìn)行人工繁殖。

1.3 親魚篩選

1.3.1 外部觀察 選擇體質(zhì)健壯、無病無傷、游動(dòng)活潑的親魚，通過外觀初步判斷雌雄性別。成熟雌魚腹部飽滿膨脹、柔軟有彈性，肚皮薄，生殖孔紅潤外突；成熟雄魚腹部較瘦小，稍呈凹槽狀，性腺發(fā)育好的個(gè)體，輕壓其腹部有精液從生殖孔流出，精液用顯微鏡觀察是否有精子運(yùn)動(dòng)，遇水精子游動(dòng)迅速說明精子活力強(qiáng)。

1.3.2 穿刺法觀察 采用穿刺方法從鱘魚親本活體分離卵粒[19]，觀察魚卵大小、色澤及發(fā)育狀態(tài)，雌性親本需選擇性腺發(fā)育處于IV期中以上，卵為橢圓形、深褐色，卵粒大小均勻，色素圈明顯。用小刀順著動(dòng)物極與植物極切開，測量PI值(卵徑和核的極化程度)，其值越小說明卵子成熟越好，即卵黃偏離中心(卵徑在3 mm左右，極斑明顯，邊緣清晰)。注意卵穿刺處要消毒。

輕壓雄魚腹部沒有精液流出，也需要進(jìn)一步采用穿刺法檢測精巢發(fā)育狀態(tài)。用取卵器取出少許精槽組織灑在水中立即散開，說明精巢發(fā)育到IV期末期或V期，可用于繁殖。

2 人工催產(chǎn)

2.1 催情

人工養(yǎng)殖環(huán)境缺乏適宜的水流、溫度、產(chǎn)卵場等刺激，親魚不能產(chǎn)生足量的性激素，達(dá)到性成熟的鱘魚很難自行排卵、排精，不能實(shí)現(xiàn)自然繁殖，需要外源促性激素的作用。

2.1.1 催情劑 選用促黃體素釋放激素類似物(LRH-A2，寧波第二激素廠生產(chǎn))催情的效果較好[20-21]。催情效應(yīng)時(shí)間長短主要由親魚性腺的發(fā)育程度、催產(chǎn)時(shí)機(jī)、水溫等綜合因素決定，在同一溫度范圍，效應(yīng)時(shí)間24 h左右排出的卵子質(zhì)量較好，受精率、孵化率均較高；效應(yīng)時(shí)間30 h以上的卵子質(zhì)量較差，受精率、孵化率均偏低。因此，要控制好影響催情效應(yīng)時(shí)間長短的因素，確保效應(yīng)時(shí)間在24 h左右。

2.1.2 注射 雌魚采用二次注射，第1次注射LRH-A2總劑量的1/3左右，12～14 h后注射第2次。雄魚采用雌魚劑量的一半一次性注射。首次催情親魚建議采用最低劑量3 μg/kg，對同一尾魚的催情劑量逐年提升，年齡大的親魚應(yīng)加大劑量。注射部位為背骨板左右兩側(cè)兩骨板之間的肌肉部位或胸鰭基部。催情后的親魚放置于產(chǎn)卵池，定時(shí)觀察池中有無魚卵。

2.2 授精與脫黏

2.2.1 采精、采卵 發(fā)現(xiàn)產(chǎn)卵池底有深褐色游離卵粒出現(xiàn)時(shí)準(zhǔn)備采卵采精設(shè)備，1～2 h開始采集，采精采卵最好同時(shí)進(jìn)行，保證精子活力，提高魚卵受精率。用擔(dān)架將親魚抬至手術(shù)臺，充分擦干生殖孔及周邊區(qū)域水分。擠壓雌魚腹部擠出魚卵，1 000～2 000 mL時(shí)換盛卵盆，及時(shí)授精。排出一定魚卵后會(huì)排卵不暢，應(yīng)根據(jù)魚體大小在生殖孔前端4～6 cm處縱向切開1～2 cm，形成出卵口，擠壓腹部使成熟卵經(jīng)傷口排出。魚卵基本排凈后抬高親魚尾部，用生理鹽水500～1 000 mL從傷口處灌洗腹腔，以排出腹腔的游離卵并清洗腹腔。手術(shù)期間要不斷向魚鰓內(nèi)淋水，保證魚呼吸，避免造成親魚死亡。取卵結(jié)束后縫合傷口，對傷口及周圍進(jìn)行局部消毒、消炎處理。

相比采卵，采精簡單快捷，用導(dǎo)管從雄魚生殖孔插入，精液沿導(dǎo)管流出，盛于干燥容器，顯微鏡觀察精子活力，活力高的可用于授精。

2.2.2 授精 以干法授精為佳，用量為每1 000 mL魚卵配比10 mL精液。盛卵盆中裝卵1 000～2 000 mL(8萬～10萬粒)后立即加入精液，攪動(dòng)約30 s；再按精卵體積的1/2加入清水進(jìn)一步激活精子，攪拌約3 min后倒掉懸浮液，用清水快速漂洗3次。

2.2.3 脫黏 將漂洗干凈的魚卵快速放入20%的滑石粉懸浮液，充分?jǐn)嚢?0 min脫黏，每20 min換滑石粉液1次，使魚卵完全不粘手為止。魚卵脫黏后用水清洗干凈，轉(zhuǎn)入孵化器中孵化。若孵化過程中受精卵結(jié)團(tuán)，主要是脫黏不徹底和滋生水霉導(dǎo)致。

3 人工孵化

魚卵脫黏后采用瓶式孵化器孵化，最大放卵量(無水情況下)可占據(jù)孵化器的1/5。流水培育的流量視情況而定，以保證所有魚卵不沉底即可，但不宜太大，避免魚卵沿出水口沖出。鱘魚卵孵化水溫為16～19℃，約110 h后開始出膜。孵化最好使用曝氣的地下水，水溫恒定、水質(zhì)好，減少細(xì)菌和寄生蟲的感染。孵化過程中經(jīng)常翻動(dòng)受精卵，及時(shí)剔除死卵，防止水霉發(fā)生。

魚苗出膜后可隨流水在孵化器中游動(dòng)，可從頂部排水口隨流水游出。收集游出的水花，轉(zhuǎn)入苗種培育池培養(yǎng)。

4 親魚產(chǎn)后護(hù)理

親魚經(jīng)過人工繁殖后體表有受傷充血現(xiàn)象，體色變淡無光澤，游動(dòng)緩慢并有停歇現(xiàn)象，無食欲，尤其是雌魚，經(jīng)歷長時(shí)間擠卵且有手術(shù)創(chuàng)傷，身體損耗極大，加上產(chǎn)前親魚有相當(dāng)一段時(shí)間無攝食。因此，產(chǎn)后要加強(qiáng)親魚護(hù)理，減少傷口感染，避免親魚死亡。一般對產(chǎn)后親魚注射復(fù)方氨基酸、氟苯尼考、硫酸慶大霉素等消炎藥，根據(jù)說明書使用，持續(xù)注射1～2周。親魚活力增強(qiáng)，體色有所恢復(fù)，受傷部位明顯好轉(zhuǎn)時(shí)放回親魚池正常飼養(yǎng)。

5 小結(jié)

2012年，貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所雖然解決了鱘魚繁殖工藝、人工孵化設(shè)備等一系列技術(shù)難題，但技術(shù)的穩(wěn)定性及全面推廣應(yīng)用尚有欠缺。基于前期研究，通過對細(xì)節(jié)和技術(shù)的優(yōu)化，總結(jié)出貴州山區(qū)鱘魚規(guī)?；斯し敝臣夹g(shù)，為貴州鱘魚養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。