趙月兵 王東 王鐵菊 馬學(xué)忠

（河南省南陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 473000）

1 新城疫（ND）

新城疫是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一種急性、高度致死性的禽類(lèi)傳染病，被國(guó)際獸疫局（Office International des Epizooties，OlE） 列為對(duì)畜禽危害最大的A 類(lèi)傳染病之一。自1926 年從印度尼西亞爪哇分離到NDV以來(lái)，在世界上已發(fā)生了4 次ND 大流行，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。ND 也是一直嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的疫病之一，但由于疫苗的廣泛使用，此病己基本得到較好控制，近年來(lái)ND 的流行出現(xiàn)了以下新特點(diǎn)。

（1） 免疫雞群發(fā)生雞新城疫流行。經(jīng)過(guò)多次免疫的雞群仍然發(fā)生本病，多發(fā)生在二免與三免之間。造成免疫失敗的主要原因是現(xiàn)行疫苗越來(lái)越不足以抵擋野毒的侵襲。

（2） 病雞群出現(xiàn)亞臨床癥狀或非典型癥狀，主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀和神經(jīng)癥狀，產(chǎn)蛋雞主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋量下降。由于病雞常出現(xiàn)呼吸困難、甩頭、張口呼吸等癥狀，與其他一些呼吸道疾病如傳染性喉氣管炎、傳染性支氣管炎、慢性呼吸道病等病的癥狀十分相似，給本病診斷增加了難度。

（3） 低發(fā)病率和低死亡率。目前出現(xiàn)的雞新城疫發(fā)病率一般在10%～25%，死亡率在15%～35%，產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋率下降30%左右。

（4） 剖檢病變不明顯。典型雞新城疫病變明顯部分表現(xiàn)在腺胃黏膜、肌胃角質(zhì)膜下出血，腸黏膜出血，盲腸扁桃體腫大、壞死、出血。目前經(jīng)過(guò)免疫的雞群發(fā)生雞新城疫時(shí)多數(shù)無(wú)上述明顯病變，有的只有十二指腸、直腸泄殖腔黏膜有出血點(diǎn)，腺胃、肌胃基本無(wú)病變。

（5） 雞群發(fā)生雞新城疫時(shí)多繼發(fā)大腸桿菌病。

本項(xiàng)鑒定應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)系統(tǒng)分析NDVF 蛋白生物學(xué)特性、一級(jí)結(jié)構(gòu)和二級(jí)結(jié)構(gòu)特性，應(yīng)用多肽合成技術(shù)、基因工程技術(shù)和單克隆抗體技術(shù)，通過(guò)合成全部覆蓋F 蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)序列的重疊多肽，結(jié)合F 蛋白的三維空間結(jié)構(gòu)分析、鑒定F 蛋白的B 細(xì)胞抗原表位譜。為全面認(rèn)識(shí)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)NDV 的識(shí)別規(guī)律，探討體液免疫系統(tǒng)抵抗NDV 感染的本質(zhì)提供重要的理論依據(jù)。同時(shí)，通過(guò)全面認(rèn)識(shí)和定位NDV 的B 細(xì)胞抗原表位譜為新型、高效、安全、營(yíng)養(yǎng)的新型疫苗設(shè)計(jì)和病毒抗體檢測(cè)提供特異性的參考靶點(diǎn)。傳統(tǒng)疫苗由于成分復(fù)雜，在引起保護(hù)性免疫反應(yīng)的同時(shí)，還刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)非特異性蛋白的大量無(wú)關(guān)抗體，大大消耗了機(jī)體免疫系統(tǒng)的資源，致使免疫系統(tǒng)不能最大化的充分發(fā)揮有效作用。傳統(tǒng)檢測(cè)NDV 病毒抗體的方法為HI 實(shí)驗(yàn)，該方法不僅操作煩瑣，還不能準(zhǔn)確反映血清抗體中和性，本項(xiàng)研究通過(guò)NDV 中和性抗原表位的鑒定，為篩選檢測(cè)血清中和性抗體的候選表位抗原，設(shè)計(jì)NDV 血清抗體檢測(cè)的多肽-ELISA 檢測(cè)方法奠定基礎(chǔ)，為疫苗免疫效果評(píng)價(jià)和最佳免疫時(shí)間確定提供技術(shù)依據(jù)。另外，通過(guò)全面認(rèn)識(shí)和定位NDVB 細(xì)胞抗原表位可以了解該病毒抗原變異規(guī)律。揭示其免疫保護(hù)和免疫逃逸的規(guī)律。最后，NDVB 細(xì)胞抗原表位的鑒定對(duì)進(jìn)一步研究動(dòng)物機(jī)體體液免疫的啟動(dòng)規(guī)律具有重要的指導(dǎo)意義。

2 本鑒定的創(chuàng)新點(diǎn)有

（1） 詳細(xì)地繪制NDV F 蛋白的B 細(xì)胞抗原表位圖譜。證明F 蛋白中含有4 個(gè)中和性單克隆抗體識(shí)別的線性表位： EP1：36TLRSETSTYNLTV48；EP2： 66SNGNYKF72；EP3： 210DRPRVYTITAADDYQFS226；EP4： 316SWSARGSLAVTI327 和5個(gè)多抗反應(yīng)位點(diǎn)： ES1： 81NLPASYNYCRLVSRSLTV98；ES2：311GSLAVTIHGGNYPGALRPVTLV332；ES3： 341FELIPNPELA KNLVTEYG358；ES4： 403NSPLKIAGAFGFK415；ES5： 409RA IRRIAVPVVS420。

（2） 應(yīng)用單克隆抗體識(shí)別的表位多肽187CDSSDRPRVYTIT199 和337WSARGSLAVTIHG349 與載體蛋白KLH 偶聯(lián)后，免疫小鼠能產(chǎn)生針對(duì)其多肽本身的抗體，該抗體能在雞胚成纖維細(xì)胞上中和雞NDV 血清I 型病毒的增殖。

（3） 對(duì)揭示NDV 體液免疫發(fā)生的本質(zhì)具有重要意義，同時(shí)為設(shè)計(jì)ND 新型表位疫苗奠定基礎(chǔ)。

綜上所述，本鑒定結(jié)合現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)，技術(shù)路線正確，鑒定方法先進(jìn)，設(shè)計(jì)合理，資料完整詳實(shí)，數(shù)據(jù)可靠，已達(dá)到同類(lèi)鑒定的國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平，具有較大的學(xué)術(shù)理論價(jià)值和應(yīng)用前景。