閻曉紅

（山西省畜牧獸醫(yī)學(xué)校 030024）

新城疫又稱為亞洲雞瘟，是由新城疫病毒引起雞和火雞的急性、高度接觸性傳染病，是嚴(yán)重危害家禽的重要傳染病之一，在我國(guó)被列為一類傳染病。實(shí)際中，常檢測(cè)雞群新城疫抗體水平了解雞群的健康狀況，從而判斷接種疫苗之后機(jī)體的保護(hù)力。紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)（HI） 可簡(jiǎn)單、快速檢測(cè)出新城疫的免疫狀態(tài)，多種因素影響檢疫結(jié)果的準(zhǔn)確性，常見影響因素有以下幾種。

1 試驗(yàn)材料

1.1 抗原

抗原是影響新城疫檢測(cè)結(jié)果的主要因素之一，抗原不新鮮或過期時(shí)會(huì)使紅細(xì)胞的凝集能力下降，所以，檢測(cè)雞群抗體水平時(shí)要用新鮮抗原。

1.2 紅細(xì)胞懸液

在HI 試驗(yàn)中常使用1%的紅細(xì)胞懸液，一定要配制準(zhǔn)確，否則會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。如果紅細(xì)胞懸液的濃度較大，測(cè)出的HI值相對(duì)較小；如果紅細(xì)胞懸液的濃度較小，測(cè)出的HI 值相對(duì)較大[1]。用5ml 一次性采血器抽取0.5ml 抗凝劑，在翅靜脈采血2.5ml 血液，兩者混合后注入離心管中進(jìn)行離心，用移液器將離心管中的上清液和白細(xì)胞棄去，向沉淀的紅細(xì)胞泥中加入PBS 液反復(fù)吹打洗滌，再次離心，重復(fù)上述操作3 次，最后準(zhǔn)確制備好1%的紅細(xì)胞懸液。在吸取紅細(xì)胞泥配制紅細(xì)胞懸液時(shí)，紅細(xì)胞泥不能過多，否則會(huì)使紅細(xì)胞液濃度變大，影響檢測(cè)結(jié)果。

1.3 被檢血清

正常的動(dòng)物血清清亮、淡黃色，無異味。如果被檢血清陳舊、溶血或變質(zhì)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，所以操作每批樣品時(shí)都應(yīng)用生理鹽水和標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清對(duì)照，以防判定結(jié)果出現(xiàn)偏差。

2 儀器的清潔及正確使用

2.1 反應(yīng)板

HI 抗體檢測(cè)時(shí)，96 孔V 型反應(yīng)板底部應(yīng)干凈、清潔，沒有沉淀物。首先用1%的鹽酸溶液浸泡，再用1%的火堿溶液浸泡，接下來用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水浸泡烘干方可使用。從浸泡到烘干整個(gè)過程需24h 以上。

2.2 移液器

在HI 試驗(yàn)過程中，移液器使用不當(dāng)會(huì)使移液量不準(zhǔn)確，發(fā)生移液量不足或排出不夠，造成檢測(cè)結(jié)果的誤差。所以在移液前要認(rèn)真挑選吸頭，選擇移液器與吸頭安裝緊密、沒有變形的吸頭。并且在液體中不斷吸排，選擇吸頭內(nèi)不殘留液體者為佳。移液器吸取液體時(shí)應(yīng)做到“慢吸快打”，即在吸液時(shí)要慢而準(zhǔn)，排出液體時(shí)對(duì)準(zhǔn)后排出速度快，這樣可保證打入的液體量一致，避免排出后吸頭內(nèi)殘留有液體，影響結(jié)果。同時(shí)移液器吸液時(shí)應(yīng)垂直吸液，吸頭尖端離液面約3mm，吸液時(shí)按到第一檔，慢慢放開按鈕；放液時(shí)快速按下第一檔、第二檔，排出液體。

2.3 離心機(jī)

血清離心時(shí)，先將離心機(jī)放置在平穩(wěn)處，打開電源，調(diào)節(jié)好轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間，再將裝有血液的離心管放入。要求離心管內(nèi)的液體不能太滿，離心管對(duì)稱放入并保持平衡。離心時(shí)要控制離心時(shí)間和離心速度，一般轉(zhuǎn)速為2000～3000/min，離心時(shí)間為5～10min/次[2]。

3 環(huán)境溫度

血凝抑制試驗(yàn)反應(yīng)的最佳溫度是25℃。

4 結(jié)果判定時(shí)間

反應(yīng)時(shí)間結(jié)束后立即將96 孔反應(yīng)板豎起讀取結(jié)果，并迅速記下結(jié)果。一般來說，陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照成立，紅細(xì)胞對(duì)照孔完全沉淀的前后5min 內(nèi)判定試驗(yàn)結(jié)果較好。

總之，在新城疫抗體水平檢測(cè)過程中，需要嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行操作，從使用器具的清洗、試劑配制到整個(gè)操作過程都要認(rèn)真、細(xì)心，做到一絲不茍，避免干擾，不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)改正，才能保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確無誤，更好地指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)際。