刺梨是貴州的特色食品資源[1]，含有豐富的活性成分黃酮類物質(zhì)，貴州省生產(chǎn)的刺梨鮮果，加工產(chǎn)品主要以刺梨原汁為主，然后再利用刺梨原汁加工成濃縮汁、飲料等多種營養(yǎng)食品和保健品[2]，刺梨原汁中含有豐富的活性成分總黃酮，是一種很強的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生，改善心腦血管疾病的癥狀[3][4]。建立一種適合刺梨原汁中總黃酮含量的測定方法，為檢測機構(gòu)和相關(guān)企業(yè)提供更適合的檢測方法，提高檢測效率，也對于規(guī)范刺梨產(chǎn)品加工企業(yè)質(zhì)量管理、強化市場監(jiān)管、促進貴州刺梨產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義和作用。

一、儀器、試劑及材料

1.儀器

TU-1901 紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

2.對照品

蘆丁對照品（供UV 法測定，含量為92.4%），中國食品藥品檢定研究院。

3.試劑

無水乙醇、甲醇，均為分析純。

4.樣品

“刺梨原汁”（貴州天瀧集團投資開發(fā)有限公司，樣品1）；“刺梨原汁”（貴州貴定敏子食品有限公司，樣品2）；“刺梨原汁”（貴州山果王健康實業(yè)有限公司，樣品3）；“刺梨汁”（貴州綠視野綠色開發(fā)有限公司，樣品4）。

二、方法與結(jié)果

1.試樣制備

稱取1g（精確至0.01g）的試樣至25ml 容量瓶中，用乙醇定容，搖勻后，超聲提取20min，室溫靜置30min，取上清液1mL 于25mL 比色管中，用甲醇定容后待測。

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

以蘆丁為對照品，精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品109.7mg（含量為92.4%）于100mL 容量瓶內(nèi)，用甲醇定容至刻度，得1.014mg/mL 蘆丁儲備溶液。依次稀釋至濃度為1.01μg/mL、2.03μg/mL、3.04μg/mL、4.06μg/mL、5.07μg/mL、6.08μg/mL 蘆丁對照品溶液，以甲醇溶液為零點，于360nm 處測量吸光度。以蘆丁對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制校準(zhǔn)曲線，線性方程為y=0.0299x-0.0003，R2=0.9999，表明蘆丁含量在0～6.08μg/mL 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，經(jīng)計算，該方法在0～380mg/100g 范圍內(nèi)，樣品中總黃酮濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

3. 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）實驗

樣品空白獨立測試20 次實驗，計算結(jié)果為0.63 mg/100g，計算標(biāo)準(zhǔn)偏差（s）為2.278×10-16。

根據(jù)LOD=樣品空白平均值+3s，即LOD=0.63+3×2.278×10-16，計算結(jié)果保留小數(shù)點后兩位，LOD=0.63 mg/100g。

為增加數(shù)據(jù)可信度，且檢測樣品的結(jié)果范圍為55～90 mg/100g，取LOQ 值=10×LOD 值，即LOQ=6.30 mg/100g，最終取值LOQ=7.00mg/100g。

4.精密度實驗

精確稱取1 號樣品12 份，其中6 份分別加入3mg 蘆丁對照品，按照“1.試樣制備”方法處理并測定，結(jié)果如表1 所示。結(jié)果顯示本方法在常見樣品濃度和檢出最高限的測試結(jié)果變異系數(shù)（CV 值）分別為2.3%、1.9%，均符合GB/T 27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》中相關(guān)規(guī)定，表明方法精密度良好。

表1 1 號樣品總黃酮含量測定結(jié)果

5. 樣品檢測及回收率實驗

分別取樣品1、2、3、4 號樣品做加標(biāo)回收試驗，然后按照“1.試樣制備”處理，結(jié)果如表2 所示，樣品1、2、3、4 中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/mL，且平均回收率為100.3%，表明方法準(zhǔn)確性好。

表2 回收率實驗結(jié)果

1 80.24 79.53 160.17 100.5 2 72.34 80.32 154.31 102.1 3 86.69 79.53 164.56 97.9 4 74.39 79.53 154.31 100.5 100.3

三、結(jié)語

綜上所述，本文以蘆丁為對照品，通過紫外分光光度法測定總黃酮含量，操作簡單、結(jié)果可靠、測定成本較低，在總黃酮含量為7～380mg/100g 范圍內(nèi)，精密度良好，測試結(jié)果準(zhǔn)確，適用于刺梨原汁中總黃酮的測定。測試樣品1、2、3、4 中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/100g，而相關(guān)報道中提到刺梨鮮果中總黃酮含量高達(dá)0.89%[4]，說明在加工過程中，刺梨鮮果中的大部分黃酮類化合物殘留在刺梨果渣內(nèi)，如何將總黃酮類化合物更有效地提取到刺梨原汁中，本方法可以為下一步研究奠定基礎(chǔ)。