李沁 夏菁 施蕊

摘要：為分析和鑒定辣木葉低極性成分的組成，采用硅膠層析柱、薄層色譜分析法以及重結(jié)晶等方法對(duì)辣木葉石油醚提取物進(jìn)行分離純化，再運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析分離得到的結(jié)晶，質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng)數(shù)據(jù)庫檢索鑒定確定成分，并應(yīng)用面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)含量。結(jié)果表明，從辣木葉石油醚提取物中共分離純化得到3個(gè)結(jié)晶，GC-MS分析鑒定后得出3個(gè)物質(zhì)，分別是棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、β-谷甾醇，這3種物質(zhì)都具有較好的生物活性且在工業(yè)上得到廣泛利用。結(jié)果可為今后辣木葉功能成分的研究和開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：辣木葉;低極性成分;分離純化：GC-MS分析;棕櫚酸甲酯;硬脂酸甲酯;β-谷甾醇

中圖分類號(hào)：S184?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A? 文章編號(hào)：1002-1302（2020）20-0229-05

辣木（Moringa oleifera Lam.）別稱鼓槌樹，為辣木科辣木屬多年生喬木，該科僅有1個(gè)屬14個(gè)種[1]。目前所有品種中生長快、分布廣且利用和研究最多的是辣木。早在古羅馬時(shí)期就有種植和利用辣木的記載，因辣木具有極強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力，現(xiàn)已在亞洲、非洲和中美洲的30多個(gè)熱帶、亞熱帶國家和地區(qū)廣泛種植[2]。2012年11月，我國衛(wèi)生部已將辣木葉納入新資源食品名錄，2014年7月，習(xí)近平總書記將辣木種子作為國禮贈(zèng)送給古巴革命領(lǐng)導(dǎo)人菲德爾·卡斯特羅，這讓更多的國人知道并開始了解這一神奇的植物。云南省是我國最早開展辣木引種種植及科學(xué)研究的地區(qū)，目前全國辣木種植面積約4 000 hm2，其中云南省約 2 800 hm2，占全國種植面積的70%，廣西、福建、廣東、重慶、湖南、海南等地也有種植[3]。現(xiàn)代社會(huì)生活節(jié)奏加快，工作壓力加大，隨著人們健康意識(shí)的不斷增強(qiáng)，辣木以其近乎完美的營養(yǎng)及功效逐漸走入人們的視野。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，辣木除了富含蛋白質(zhì)、膳食纖維、多種維生素和礦物質(zhì)外[4]，還含有多種活性成分如胡蘿卜素、酚類、黃酮類植物甾醇、苷類、多糖、生物堿、有機(jī)酸、細(xì)胞分裂素等[5]，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)能力、抗腫瘤、抗氧化、抑菌、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂等作用[6-8]。但目前對(duì)辣木葉活性物質(zhì)的研究主要集中在粗提物上[9-11]，對(duì)于粗提物的進(jìn)一步分離純化以及單體化合物結(jié)構(gòu)分析的探討還比較少。本研究采用有機(jī)溶液萃取法、薄層色譜分析法、結(jié)晶法、GC-MS法對(duì)辣木葉低極性組分進(jìn)行分離和鑒定，旨在為更好地了解辣木生物活性物質(zhì)和成分以及辣木葉進(jìn)一步的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 辣木葉 辣木葉樣品于2018年7月采自云南省大理州賓川縣，將其陰干，備用。

1.1.2 試驗(yàn)儀器 主要儀器包括旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、循環(huán)水式多用真空泵、電爐、電子天平、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（HP6890GC/5973MS）、薄層色譜展開缸、硅膠柱、硅膠板、移液管、移液槍、鐵夾子、膠頭滴管、試管、毛細(xì)管、洗耳球、玻璃棒、鑷子。

1.1.3 試驗(yàn)試劑 石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇、丙酮、1%硫酸-甲醇、氯仿、柱層析硅膠、正己烷。

1.2 辣木葉石油醚層的化學(xué)成分

1.2.1 辣木葉石油醚層的制備 稱取辣木葉 10 kg，用75%乙醇冷浸3次，每次48 h，合并3次濾液，55 ℃下旋蒸濃縮，再用等體積石油醚萃取，重復(fù)3次，合并在35 ℃下旋蒸濃縮，得到辣木葉石油醚層浸膏218.5 g。

1.2.2 單體化合物的分離純化 依次用石油醚 ∶ 乙酸乙酯=100 ∶ 1、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=100 ∶ 3、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=20 ∶ 1、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=100 ∶ 7、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=10 ∶ 1、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=8 ∶ 1、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=5 ∶ 1、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=3 ∶ 1、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=2 ∶ 1、石油醚 ∶ 乙酸乙酯=1 ∶ 1、100%乙酸乙酯（以上均為體積比）對(duì)所得的辣木葉石油醚層通過硅膠柱進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法（TLC）檢測(cè)洗脫液成分，將不同比移植（Rf）分開，待洗脫液揮干，結(jié)晶。

1.2.3 甲酯化 石油醚提取物含大量脂肪酸類物質(zhì)，如果直接進(jìn)行GC-MS分析，通常柱溫偏高，容易出現(xiàn)色譜峰拖尾和假峰現(xiàn)象，故需先進(jìn)行甲酯化處理。稱取辣木葉石油醚層各單體化合物0.05 g加入1%硫酸-甲醇2 mL置于70 ℃水浴加熱 30 min，加入1 mL正己烷，再加入幾滴蒸餾水萃取，取上清液，重復(fù)以上步驟再萃取1次，合并上清液，放入小瓶中待測(cè)。

1.2.4 辣木葉石油醚層成分的鑒定 此次成分鑒定主要在云南省林業(yè)和草原科學(xué)院進(jìn)行，使用的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀購自美國安捷倫公司，型號(hào)為HP6890GC/5973MS。GC（氣相色譜）條件為HP-5MS石英毛細(xì)管柱（30.00 mm×0.25 mm×0.25 m）;柱溫起始溫度80 ℃，程序升溫3 ℃/min升至280 ℃，保持30 min;柱流量為1.0 mL/min;進(jìn)樣口溫度250 ℃;柱前壓100 kPa;進(jìn)樣量0.4 L;分流比30 ∶ 1; 載氣為高純氦氣。質(zhì)譜（MS）的條件：電離方式EI;電子能量70;傳輸線溫度250 ℃;離子源溫度230 ℃;四極桿溫度150 ℃;質(zhì)量范圍35～500。質(zhì)譜數(shù)據(jù)采用Wiley7n.l標(biāo)準(zhǔn)譜庫進(jìn)行檢索定性和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 辣木葉低極性組分的分離純化

通過將試驗(yàn)分離得到的辣木葉石油醚層提取物進(jìn)行硅膠柱洗脫后，收集到570個(gè)流分洗脫液;根據(jù)薄層色譜（TLC）檢測(cè)后合并為12個(gè)流分洗脫液，其中有3個(gè)結(jié)晶，硅膠柱洗脫結(jié)果見表1。

2.2 辣木葉低極性組分的分析鑒定

選取洗脫得到的辣木葉石油醚層的3個(gè)結(jié)晶，131號(hào)、148號(hào)和252號(hào)點(diǎn)分別進(jìn)行GC-MS分析，得到離子流圖。經(jīng)過人工解析及計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索比對(duì)，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，用面積歸一化法確定各組分相對(duì)含量分別對(duì)各色譜峰加以確認(rèn)。3個(gè)結(jié)晶點(diǎn)的GC-MS離子流圖和化合物百分含量表見圖1和表2。