張建玲，吳 晶，張成萍

青海華實科技投資管理有限公司 (西寧 810000)

黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、保護心血管、降壓、抗菌、抗病毒和抗腫瘤等多種生物活性和藥理作用[1]，是廣泛存在于植物界的一大類天然產(chǎn)物，大多數(shù)黃酮類化合物與葡萄糖或鼠李糖結(jié)合成苷，部分為游離態(tài)或與鞣質(zhì)結(jié)合存在。黃酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物， 一般具有C6-C3-C6的基本骨架結(jié)構(gòu)。近年來， 黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用倍受青睞，因此黃酮的含量測定成為研究的關(guān)鍵步驟。

藤茶是在高山峻嶺的云霧叢中生長的一種珍稀的野生藤本植物，沒有化肥、農(nóng)藥所帶來的污染，是純天然的綠色食品，采其枝葉經(jīng)傳統(tǒng)制茶工藝精制而成。藤茶含有大量的黃酮類有效成份，為我國特有茶用、藥用植物[2-3]。關(guān)于青稞總黃酮含量的報道較少，平均含量0.18%[4]。保健類茶飲品已經(jīng)成為日常生活中重要的一部分，以谷物雜糧為原料開發(fā)的谷物茶越來越受到人們的青睞[5]，將青稞與藤茶復(fù)配研制，通過青稞與藤茶中黃酮協(xié)同作用，既提高了黃酮含量，也在茶中增加了青稞的營養(yǎng)成分。本文以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，用高效液相色譜法紫外檢測器測定青稞藤茶復(fù)配茶中總黃酮含量，旨在下一步的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品與試劑

樣品，青稞藤茶復(fù)配茶(青海華實集團-高原生物食品開發(fā)研究院研制)；無水乙醇(≥99.7%)，天津市富宇精細化工有限公司；乙腈(≥99.9%)，山東禹王試劑；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(固體UV≥98%)，北京北方偉業(yè)計量技術(shù)研究院與北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司聯(lián)合研制。

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀，LC-20A配紫外檢測器，島津儀器有限公司；RE-52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置，上海亞榮生化儀器廠；BS 224S型賽多利斯電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)公司；L530型臺式低速離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司；多功能粉碎機，浙江高鑫工貿(mào)有限公司。

1.3 方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取15 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用100%甲醇(色譜級)溶解并定容至100 mL(其含量為150 μg/mL)混勻、待用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)使用液：移取0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別轉(zhuǎn)移并定容至10 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，備用。

1.3.2樣品制備

將樣品粉碎過篩(80 目，直徑0.2 mm)，準(zhǔn)確稱取2.000 g粉碎過的樣品，于錐形瓶中加入70%乙

醇溶液超聲提取3次。合并3次提取溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進行回收，溫度為55 ℃。將回收瓶用100%純甲醇清洗，并將溶液定容至100 mL。

1.3.3測定方法

采用C18色譜柱(250mm×4.6mm，5 μm)，以乙腈:0.4%磷酸水溶液=20:80進行梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，紫外檢測器檢測波長360 nm，精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液20 μL注入液相色譜進行測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程

精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別進樣20 μL，以峰面積為縱坐標(biāo)(y)，濃度為橫坐標(biāo)(x)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖1。

圖1 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 定性分析

精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，在360 nm下出峰情況如圖2。

圖2 黃酮標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2.3 精密度實驗

取統(tǒng)一濃度對照品溶液，重復(fù)進樣 6 次，按上述色譜條件進行測定，測定結(jié)果見表3，結(jié)果RSD=1.94%，表明精密度良好。

表3 精密度實驗結(jié)果(n=6) μg/mL

2.4 重復(fù)性實驗

按照樣品溶液的制備方法，對同一批樣品，同時制備6份供試品溶液，按照上述方法處理測定，測定結(jié)果見表4，RSD=0.12% (n=6)，說明本方法重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性結(jié)果(n=6) μg/mL

2.5 加標(biāo)回收實驗

在樣品的基質(zhì)中添加蘆丁的標(biāo)液進行回收實驗，是來驗證分析方法可靠性和精密度重要的手段。本研究采用在混勻的青稞藤茶中定量的添加高、中、低3個濃度蘆丁，經(jīng)6次平行提取、測定，計算回收率。表3 列出了在青稞藤茶中添加的3個濃度的回收率。

稱取已知黃酮成分含量的樣品2 g，準(zhǔn)確加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，按照樣品液制備方法制備供試液。測定總黃酮，結(jié)果見表5。

表5 加標(biāo)回收率結(jié)果(n=6)

由表3結(jié)果可得，樣品的平均回收率為98.78%，RSD=1.25%，所以采用液相色譜紫外檢測器測定黃酮結(jié)果可靠，方法可以確定。

藤茶資源豐富，目前僅僅被加工作為茶飲，其功效保健價值并沒有被進一步挖掘。黃酮類化合物因具有抗氧化、降糖降脂、保肝等生物學(xué)功效而在糖尿病、非酒精性脂肪肝、肥胖等慢性非傳染性疾病防治中備受關(guān)注[6]。

3 結(jié)論

本試驗通過乙醇提取總黃酮，用高效液相色譜法對青稞藤茶復(fù)配茶樣品總黃酮進行了含量測定，為較為缺乏的復(fù)配茶黃酮儀器分析方法提供參考，也為后續(xù)研究分析青稞藤茶復(fù)配茶中總黃酮的含量提供依據(jù)。本研究建立的黃酮類成分含量測定方法簡單、準(zhǔn)確，適用于所有樣品的含量測定。