陳清森 ，張澤宏 ，羅威才 ，公維華 ，朱麗霞

（1.閩南師范大學(xué)福建省現(xiàn)代生豬產(chǎn)業(yè)體系漳州推廣站，福建 漳州 363000；2.福建省海新集團(tuán)有限公司，福建 漳州 363100）

1 背景

伴隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，豬人工授精技術(shù)也得到了不斷發(fā)展，在2007年時我國豬平均人工授精率仍較低，為25% ～30%，其中的95%以上的精液是來自于規(guī)模化豬場的場內(nèi)公豬站，商業(yè)化公豬站所占的比例極小；而此時在養(yǎng)豬發(fā)達(dá)國家，商業(yè)化豬人工授精率占50% ～ 90%，單頭公豬精液年產(chǎn)量也高出我國 200 ～ 1 000頭份。到了2015年后，隨著國內(nèi)一批養(yǎng)豬龍頭企業(yè)，如廣西揚(yáng)翔、天邦集團(tuán)、廣東谷越、廣州豬仙子、上海祥欣等企業(yè)在種豬育種、精液與耗材業(yè)務(wù)的宣傳推進(jìn)，豬商業(yè)化供精得到基本共識，通過這些龍頭企業(yè)的頂層設(shè)計(jì)，我國豬人工授精產(chǎn)業(yè)的基因品質(zhì)、產(chǎn)精效率與產(chǎn)品效果與世界先進(jìn)水平的差距不斷縮小，在單體規(guī)模、配送距離上甚至領(lǐng)先世界。

同時自2018年起，我國也面臨著非洲豬瘟疫情的挑戰(zhàn)，豬鮮精的推廣與使用受到了一定的限制，凍精業(yè)務(wù)得到了進(jìn)一步的發(fā)展，隨著史上最好行情的到來，單頭肉豬的利潤達(dá)到4 000元，支撐了昂貴凍精的使用。

2 凍精生產(chǎn)的前提條件

2.1 首先要有優(yōu)秀的頂級公豬

1）公豬的主要經(jīng)濟(jì)性狀的表型值需要非常優(yōu)秀與穩(wěn)定，要有能夠給豬場帶來巨大經(jīng)濟(jì)價值的潛力，根據(jù)作者及團(tuán)隊(duì)測算，在核心群上1元的基因相對價值，通過擴(kuò)繁群、商品群的放大，可以實(shí)現(xiàn)10 000元回報的可能性，這個超過多數(shù)類型投資回報，這也是國家一直大力支持豬育種戰(zhàn)略的原因所在。

2）公豬的系譜信息要完整準(zhǔn)確，通過基因檢測，可以進(jìn)一步驗(yàn)證系譜的準(zhǔn)確性。作者在2013年丹麥學(xué)習(xí)時，發(fā)現(xiàn)每1頭參加國家測定站測定的送測豬，都要經(jīng)過基因檢測做系譜驗(yàn)證，一旦有誤，之前參加測定入選到公豬站的所有豬只、進(jìn)入系統(tǒng)的所有數(shù)據(jù)，都要刪除，非常嚴(yán)格。可見原始記錄是基礎(chǔ)，基因手段是驗(yàn)證，是疊加作用，不能認(rèn)為有了親子鑒定，就可以在現(xiàn)場記錄上有任何的松懈。

3）公豬的精液品質(zhì)優(yōu)良，各種指標(biāo)能適合凍精生產(chǎn)，這體現(xiàn)了公豬的個體差異，并不是所有公豬的精液都適合鮮精生產(chǎn)與凍精生產(chǎn)，并實(shí)現(xiàn)可以接受的配種成績，因此頂級公豬必須經(jīng)過生產(chǎn)驗(yàn)證以后，方可大量制作凍精，大量推廣。否則由于人工授精技術(shù)的放大作用，損失也一樣被放大。

2.2 備份特別的基因類型

1）凍精技術(shù)在瀕危動物的保種上有著廣泛的應(yīng)用，如犀牛、熊貓、東北虎等數(shù)量極少，在野外自然條件下存活量極少的物種。

2）通過凍精技術(shù)來備份與中華文明相伴而行的古老動物品種，未來可能有很強(qiáng)的戰(zhàn)略價值，如我國的地方品種豬、牛、羊等。其主要原因是：第一，地方品種豬、牛、羊數(shù)量相對較少；第二，相對于主流的商業(yè)程度高的畜禽品種，這些品種存在獨(dú)特性，如太湖豬的超長、超明顯發(fā)情與高產(chǎn)特征，如陸川豬的肉質(zhì)細(xì)膩、風(fēng)味獨(dú)特、性格溫和、適應(yīng)高溫高濕環(huán)境的特性。

2.3 良好的凍精應(yīng)用推廣能力

1）顯然養(yǎng)豬龍頭企業(yè)，在豬凍精生產(chǎn)應(yīng)用上比較有條件與必要性。除了前文所述的企業(yè)，還有如廣東早期的種豬企業(yè)、溫氏、天兆等企業(yè)，對凍精都有廣泛的應(yīng)用。

2）國內(nèi)外也有公豬站生產(chǎn)凍精出售，如美國的SGI、加拿大的OSI、北京的百鈞達(dá)等，通過引入經(jīng)過權(quán)威機(jī)構(gòu)嚴(yán)格認(rèn)證的優(yōu)質(zhì)公豬，不做專業(yè)化的育種飼養(yǎng)，而只做專業(yè)化公豬站管理與精液生產(chǎn)銷售，這時公豬的品質(zhì)與來源就非常重要了，以美國SGI為例，當(dāng)年測定拍賣排名第一的優(yōu)秀公豬，購買價格達(dá)到10萬～20萬元人民幣，為公司帶來巨大的經(jīng)濟(jì)與品牌價值。

3）現(xiàn)在國內(nèi)還出現(xiàn)了第三方制作凍精服務(wù)業(yè)務(wù)，擁有成熟的技術(shù)與解決方案，可以幫助有需求的企業(yè)實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，一次投入較大，但從長遠(yuǎn)發(fā)展來看，更方便，維持費(fèi)用低。

3 凍精標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)工藝與流程

豬的凍精有多種規(guī)格，如5 mL大管、0.5 mL細(xì)管、袋裝等，這里以生產(chǎn)0.5 mL細(xì)管、含精子總數(shù) 5億個來介紹生產(chǎn)流程。

3.1 鮮精的采集與檢測

1）精液采集

技術(shù)人員需手戴一次性無菌乳膠手套，利用徒手法進(jìn)行精液采集，采用帶有過濾網(wǎng)的通用型無菌精液袋，濾掉膠狀物，只收集中間富含精子部分的精液。

2）精液的檢測

①精液體積

將精液袋放入容器中，用電子天平可準(zhǔn)確測定質(zhì)量，以1 g約等于1 mL計(jì)算。

②精子濃度

采用美國MOFA公司的光度計(jì)進(jìn)行測定，按照說明書進(jìn)行操作。具體操作步驟如下：用標(biāo)準(zhǔn)板對光度計(jì)進(jìn)行3次讀數(shù)校正，3次讀數(shù)應(yīng)完全一致；測定時移取 20 μL精液于一次性加樣板中，避免產(chǎn)生氣泡或溢出，將加樣板置于光度計(jì)中讀出精子濃度，讀取3次，取平均值。

③精子活力、細(xì)菌污染等級與結(jié)團(tuán)等級

采用 Olympus CX-41相差顯微成像系統(tǒng)，參照陳清森等（2005）的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測。分別檢測定以下性狀：精子活力、細(xì)菌污染等級、結(jié)團(tuán)等級。

④精子形態(tài)的檢測

計(jì)數(shù)中間型幼稚型精子比例、頸部脂滴幼稚型精子比例，總異常精子比例。

⑤計(jì)算精液有效總精子數(shù)，理論生產(chǎn)頭份數(shù)與實(shí)產(chǎn)頭份數(shù)

有效總精子數(shù)＝ 體積（mL）×濃度（Bill/mL）×活力（%）

可稀釋頭份數(shù)與實(shí)產(chǎn)頭份數(shù)按每份含有效精子數(shù)40億來計(jì)算。

3.2 精液的稀釋與離心

1）計(jì)算好將與精液等溫的專用稀釋液混合到精液中，混勻；

2）把混合液放進(jìn) 17 ℃ 恒溫箱，液體溫度達(dá) 17 ℃ 后平衡后，進(jìn)行離心操作；

3）把混合液裝入 50 mL的離心瓶里，在 17 ℃ 和離心力 800 g 的條件下離心 20 min；

4）吸走上清液，測量上清液的體積和濃度，計(jì)算出上清液中總精子數(shù)并減掉，即可算出可用精子數(shù)。

3.3 加冷卻營養(yǎng)稀釋劑與冷卻

1）加冷卻營養(yǎng)稀釋劑， 最后要調(diào)到10 億/mL精子的最終濃度， 把 17 ℃ 的冷卻營養(yǎng)稀釋液緩慢地加到沉淀精液中，以吸吐方式混合均勻，合并。 此時當(dāng)中大約一半是冷卻營養(yǎng)稀釋液，另一半是凍凝營養(yǎng)稀釋液。

2）把精液瓶置于 17 ℃ 的水浴杯里，再一同放進(jìn) 5 ℃ 冰箱冷卻1.5 h，要觀測精液溫度，達(dá)到 5 ℃ 時，再繼續(xù)冷卻 45 min。

3.4 加凍凝營養(yǎng)稀釋劑，裝管封口

1）按計(jì)算好的量，把 5 ℃的凍凝營養(yǎng)稀釋劑緩慢地加到 5 ℃ 的精液中， 輕輕晃動使其混合均勻。

2）在 5 ℃的冷卻室或操作箱里，加入凍凝劑后 15 min內(nèi)，把精液裝入 0.5 mL事先打印好標(biāo)記的吸管里，封口。把吸管里的氣泡搖到中間，以防吸管解凍時發(fā)生泄漏，甚至爆裂。

3.5 凍凝精液細(xì)管

1）在程序降溫儀的凍腔里，以1 min下降30 ℃ 的速度充液氮把精液細(xì)管凍凝，凍凝曲線可參考見表1。

2）用夾鉗把凍好的精液細(xì)管從凍腔里拿出，立即將細(xì)管全身浸入液氮中并整理到細(xì)管架中，迅速把細(xì)管架轉(zhuǎn)移到液氮罐中。

4 凍精成品的日常管理要點(diǎn)

1）凍精必須時刻儲藏在液氮罐中，并保持液氮罐中有充足的液氮，以維持足夠合適的低溫。通過監(jiān)測液氮罐的重量變化，與確定好的最小重量進(jìn)行比對，一旦液氮罐接近最小重量，需要馬上補(bǔ)充液氮。通常各種類型的液氮罐每天揮發(fā)的液氮重量是0.14～0.5 kg，需要4～20 d補(bǔ)充1次液氮。

2）備份并打印出液氮罐中各個細(xì)管架上各細(xì)管的信息，與公豬的系譜信息相對應(yīng)，才能在需要時方便快速取出所需要的凍精。

3）操作過程當(dāng)中，要注意通風(fēng)、防凍傷等，嚴(yán)格按照各種規(guī)范要求操作。

5 小結(jié)

對于公豬種群極其優(yōu)秀與特別的企業(yè)，若有制作凍精的必要性，可以自行制作，也可以外包。但無論是凍精的生產(chǎn)還是使用，均需要優(yōu)秀的豬群建設(shè)與日常管理，才能實(shí)現(xiàn)價值的最大化與高程度的生產(chǎn)力轉(zhuǎn)化。

借此感謝美國MOFA公司、美國SGI公司、加拿大OSI等同行朋友對本文的支持。

表 1 降溫參考曲線

參考文獻(xiàn)（略）