劉浪，李衛(wèi)，賈浩然，張?jiān)拢堣D，李保同

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 國土資源與環(huán)境學(xué)院，江西 南昌 330045)

雜草是稻田中最主要的有害生物，嚴(yán)重影響作物的產(chǎn)量和品質(zhì)[1-2]。除草劑的使用保證了糧食產(chǎn)量，而且也是目前最普遍高效的除草方式[3-4]。精噁唑甘草胺(Glyamifop)是江蘇中旗科技股份有限公司最新開發(fā)的新型除草劑，分子式為C20H19ClN2O6，結(jié)構(gòu)式見圖1。該藥劑對禾本科雜草具有良好的防除效果，且對作物生長較安全。該制劑的分析方法目前國內(nèi)外尚未見報(bào)道。高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用是檢測農(nóng)藥制劑中有效成分的常用方法[5-12]。本文建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測精噁唑甘草胺制劑中有效成分的分析方法，操作簡便，結(jié)果可靠，可用于精噁唑甘草胺制劑的定量分析。

圖1 精噁唑甘草胺化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 The chemical structure of Glyamifop

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑、精噁唑甘草胺(≥99%)標(biāo)準(zhǔn)品，均由江蘇中旗科技股份有限公司提供；乙腈、甲醇、甲酸均為色譜純。

Agilent 6120單級四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀；Agilent1260 高效液相色譜儀(配自動進(jìn)樣裝置)；Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；SB-5200DT超聲波清洗器；過濾器(過濾膜孔徑約0.22 μm)；梅特勒ME 204萬分之一天平。

1.2 儀器操作條件

1.2.1 色譜條件 流動相為乙腈和0.1%甲酸水體積比為65∶35，進(jìn)樣量為10 μL，流速為0.8 mL/min，柱溫30 ℃。

1.2.2 質(zhì)譜條件 ESI離子源正離子掃描，SIM質(zhì)荷比設(shè)定為441.2(m/z)，碰撞誘導(dǎo)解離電壓 130 V，干燥器(氮?dú)?流速12.0 L/min，干燥器溫度350 ℃，增益10，駐留590 ms，相對駐留100%。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱取精噁唑甘草胺標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g(精確至0.000 1 g)，置于100 mL容量瓶中，先加乙腈溶解，再用超聲波水浴助溶 5 min，冷卻至室溫后用乙腈定容至刻度線并搖勻，制得100 mg/L的精噁唑甘草胺貯備液；取1 mL貯備液置于100 mL容量瓶中，再用乙腈定容至刻度線并搖勻，得1 mg/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于4 ℃冰箱冷藏備用。

1.3.2 試樣溶液的配制 準(zhǔn)確稱取8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑0.125 0 g(精確至0.000 1 g)，置于100 mL容量瓶中，先加乙腈溶解，再用超聲波水浴助溶5 min，冷卻至室溫后用乙腈定容至刻度線并搖勻，制得100 mg/L的精噁唑甘草胺貯備液；取 1 mL 貯備液置于100 mL容量瓶中，再用乙腈定容至刻度線并搖勻，得1 mg/L試樣溶液，置于4 ℃冰箱冷藏備用。

1.3.3 儀器測定 在上述操作條件下，將藥液過0.22 μm濾膜注入進(jìn)樣瓶中，待儀器基線平穩(wěn)后，連續(xù)測定數(shù)次標(biāo)樣溶液，當(dāng)相鄰兩針的響應(yīng)值變化 <1.5% 后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定，用外標(biāo)法定量計(jì)算精噁唑甘草胺含量。精噁唑甘草胺色譜圖見圖2。

圖2 精噁唑甘草胺色譜圖Fig.2 Chromatogram of GlyamifopA.標(biāo)樣；B.8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑，質(zhì)量濃度均為1 mg/L

1.4 計(jì)算

將儀器幾次測得的試樣溶液和標(biāo)樣溶液的峰面積分別取平均值，試樣中精噁唑甘草胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)(W2，%)按照下式計(jì)算。

式中A1——精噁唑甘草胺標(biāo)樣峰面積；

A2——試樣中精噁唑甘草胺峰面積；

M1——精噁唑甘草胺標(biāo)樣稱樣量，g；

M2——試樣稱樣量，g；

W1——精噁唑甘草胺標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

為了獲得最佳的峰形和運(yùn)行時(shí)間，操作對象選擇1 mg/L精噁唑甘草胺溶液，選用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水這3種流動相溶液來檢測對精噁唑甘草胺標(biāo)準(zhǔn)品色譜分離的影響。

結(jié)果表明，甲醇-水相比乙腈-水而言，其峰的保留時(shí)間長，且峰面積偏小。所以選擇乙腈和水的體系，但是乙腈-水流動性會檢測出許多干擾雜質(zhì)峰，且各組峰分離不夠開，峰形對稱性較差；所以在水中添加0.1%的甲酸，這樣可得到較好的峰形，并且更好地將雜峰與主峰分離開，使峰形更加對稱，離子化效率也有所提高，迅速提高靈敏度。這與較多研究者選用的流動相一致[13-14]。所以最終選擇乙腈-0.1%甲酸水溶液作為流動相。

為了提升檢測效率，同時(shí)較少雜質(zhì)干擾，隨后對乙腈和0.1%甲酸水的體積比進(jìn)一步優(yōu)化。由表1可知，乙腈和0.1%甲酸水溶液的體積比為65∶35時(shí)峰面積最大，峰形最佳，保留時(shí)間適中，而后再調(diào)整流動相的流速，相比1 L/min，在0.8 L/min的流速下其峰面積更大，且多次進(jìn)樣的結(jié)果更穩(wěn)定，最終確定色譜條件。

表1 乙腈和0.1%甲酸水溶液體積比對保留時(shí)間以及峰面積的影響Table 1 Effect of volume ratio of acetonitrile and0.1% formic acid on retention time and peak area

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

首先在scan模式中，采用ESI離子源正負(fù)離子模式下對1 mg/L精噁唑甘草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全掃描，得出在正離子模式下可獲得強(qiáng)有效峰，所以確定選用正離子源模式來掃描。由于精噁唑甘草胺的相對分子質(zhì)量為418.5，所以接著在相對分子質(zhì)量為100～500的范圍內(nèi)進(jìn)行全掃描。結(jié)果表明，在m/z441.2時(shí)為最強(qiáng)有效峰。然后在SIM模式下，對碰撞誘導(dǎo)解離電壓等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，使得儀器響應(yīng)值最大化，最終確定質(zhì)譜條件。

2.3 方法線性相關(guān)性與檢出限的測定

制備質(zhì)量濃度梯度為0.005，0.01，0.05，0.1，0.5，1 mg/L的精噁唑甘草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)上述液質(zhì)條件進(jìn)行檢測，采用外標(biāo)法定量，橫坐標(biāo)設(shè)為質(zhì)量濃度(x，mg/L)，縱坐標(biāo)為峰面積(y)，將得到的數(shù)據(jù)在Excel表格中擬合出線性回歸方程為y=2×106x+2 235.2(R2=0.999 9)，說明其線性關(guān)系良好。根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，儀器的信噪比為3(S/N=3)，為這個(gè)物質(zhì)的最低檢出限，通過這個(gè)來估算分析，得出精噁唑甘草胺的LOD約為1.5×10-3mg/L。

2.4 精密度測定

從上述配好的試樣溶液中準(zhǔn)確吸取5份樣品，待儀器基線平穩(wěn)后，在上述液質(zhì)條件下進(jìn)行連續(xù)測定，計(jì)算得到測定8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05，變異系數(shù)為0.63%(見表2)，符合CIPAC(國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會)的要求(<1.17%)，證明此方法的精密度高。

表2 8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑精密度測定Table 2 Precision determination of Glyamifop 8% OD

2.5 準(zhǔn)確度測定

稱取5個(gè)相同質(zhì)量的8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑試樣于50 mL容量瓶中，分別加入不同含量的精噁唑甘草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述液質(zhì)條件下進(jìn)行檢測。由表3可知，該條件下精噁唑甘草胺的回收率在97.60%～100.89%之間，平均回收率為98.79%，說明該方法的準(zhǔn)確度良好。

表3 8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑準(zhǔn)確度測定Table 3 Accuracy determination of Glyamifop 8% OD

3 結(jié)論

建立了一種以HPLC-MS技術(shù)檢測8%精噁唑甘草胺可分散油懸浮劑有效成分的分析方法。最佳運(yùn)行條件為柱溫30 ℃，乙腈和0.1%甲酸水(體積比65∶35)作為流動相，溶液流速為0.8 mL/min，用液質(zhì)通過ESI離子源正離子模式掃描，得出m/z441.2時(shí)為最強(qiáng)峰。方法的校準(zhǔn)曲線為y=2×106x+2 235.2，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05，變異系數(shù)為0.63%，添加回收率在97.60%～100.89%之間，平均回收率為98.79%，最低檢測限約為1.5×10-3mg/L。以上結(jié)果表明該方法操作簡便，樣品保留時(shí)間適中，精密度以及準(zhǔn)確度高，檢出限低，靈敏度好，是檢測精噁唑甘草胺制劑中有效成分較為理想的方法。