胡思宏,游國(guó)葉

信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院, 河南 信陽(yáng) 464000

2019年末出現(xiàn)的新型冠狀病毒潛伏期久、傳染性極強(qiáng)，導(dǎo)致2020年新型冠狀肺炎(COVID-19)疫情在世界各國(guó)大規(guī)模爆發(fā)，疫情防控形勢(shì)嚴(yán)峻，對(duì)全球的公共安全造成了嚴(yán)重的威脅。2020年1月30日，世界衛(wèi)生組織(Word Health Organization,WHO)宣布新型冠狀病毒肺炎為“全球突發(fā)公共衛(wèi)生事件(Public Health Emergency of International Concern，PHEIC)”，2020年2月11日，國(guó)際病毒分類(lèi)委員會(huì)(the International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)將其命名為SARS-CoV-2(severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2)，由SARS-CoV-2導(dǎo)致的新型冠狀肺炎命名為COVID-19(Corona Virus Disease 2019)。截至2020年11月5日，全球累計(jì)新冠病毒感染病例已逾4 850萬(wàn)余例，死亡超122萬(wàn)例；其中美國(guó)累計(jì)確診980萬(wàn)余例，死亡超23萬(wàn)例；巴西累計(jì)確診559萬(wàn)余例，死亡超16萬(wàn)例；印度累計(jì)確診836萬(wàn)余例，死亡超12萬(wàn)例[1]；中國(guó)累計(jì)確診病例86 115例，死亡病例4 634人[2]。

由于SARS-CoV-2傳染性極強(qiáng)、潛伏期久，因此，對(duì)于新型冠狀病毒的檢測(cè)至關(guān)重要。目前廣泛采用的熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)SARS-CoV-2存在可能出現(xiàn)“假陰性”結(jié)果、需多次取樣、重復(fù)檢測(cè)等缺點(diǎn)。為避免超級(jí)傳播者和“假陰性”檢測(cè)結(jié)果等情況出現(xiàn)，實(shí)現(xiàn)“早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療”，因此亟需研發(fā)出一種更準(zhǔn)確、更靈敏、更及時(shí)地篩查COVID-19的檢測(cè)方法。

1 新型冠狀病毒檢測(cè)現(xiàn)狀

1.1 新型冠狀病毒病原學(xué)特征

SARS-CoV-2外形橢圓，有包膜，遺傳物質(zhì)為連續(xù)線型的單鏈RNA，基因序列全長(zhǎng)29 891 kb，共包含10個(gè)編碼區(qū)，分為：開(kāi)放讀碼框1ab(ORF1ab)、棘突蛋白(S)基因、ORF3ab基因、包膜蛋白(E)基因、膜糖蛋白(M)基因、ORF6基因、ORF7a基因、ORF8基因、核殼蛋白(N)基因、ORF10基因[3]，SARS-CoV-2基因組結(jié)構(gòu)模式見(jiàn)圖1。其中高度保守序列有3個(gè)：ORF1ab、N基因、E基因，通過(guò)檢測(cè)這3個(gè)特異性序列可以判斷是否感染SARS-COV-2。SARS-COV-2屬于β屬(Betacoronavirus)冠狀病毒，β屬冠狀病毒還包括：HCoV-OC43、HCoV-HKU1、MERS-CoV 和 SARS-CoV[4-5]，其中HCoV-OC43、HCoV-HKU1較常見(jiàn)，致病性不高，可引起輕微呼吸道癥狀，MERS-CoV和 SARS-CoV可導(dǎo)致較嚴(yán)重的下呼吸道感染，SARS-CoV可引起人嚴(yán)重急性呼吸綜合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)[6]，2003年，SARS-CoV對(duì)中國(guó)公共財(cái)產(chǎn)、衛(wèi)生產(chǎn)生了較大威脅。SARS-COV-2與SARS-CoV有79.5%同源性[7]，兩者主要在ORF1ab基因和S基因序列存在差異[8]。

圖1 SARS-COV-2基因組結(jié)構(gòu)模式Fig.1 Structure model of SARS-COV-2 genome

1.2 目前SARS-COV-2檢測(cè)方法

SARS-COV-2檢測(cè)方法在不斷發(fā)展和創(chuàng)新，現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)有：實(shí)時(shí)熒光PCR、基因組測(cè)序、抗體檢測(cè)、高特異性的逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、SHERLOCK等[9]。截至2020年4月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局審核批準(zhǔn)了核酸檢測(cè)試劑19個(gè)，抗體檢測(cè)試劑11個(gè)[10]。中國(guó)疾控中心發(fā)布《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第6版)》規(guī)定：實(shí)時(shí)熒光PCR核酸檢測(cè)陽(yáng)性或病毒基因組測(cè)序是金標(biāo)準(zhǔn)[11]，熒光PCR被廣泛運(yùn)用于SARS-COV-2的檢測(cè)中，隨著新型冠狀病毒檢測(cè)的發(fā)展，即時(shí)檢測(cè)、熒光熱對(duì)流PCR等更多的核酸檢測(cè)技術(shù)在開(kāi)發(fā)并運(yùn)用于SARS-COV-2檢測(cè)[9]；基因組測(cè)序成本周期長(zhǎng)，成本較高，不適合疫情防控情況下的大面積快速檢測(cè)篩查，可用于SARS-COV-2基因測(cè)序[12]；抗體檢測(cè)一般運(yùn)用于SARS-COV-2核酸檢測(cè)陰性的補(bǔ)充檢測(cè)，可與熒光PCR檢測(cè)互補(bǔ)使用，不作為COVID-19確診和排查的依據(jù)。國(guó)外檢測(cè)技術(shù)也在快速發(fā)展，比如：美國(guó)雅培公司研制出分子即時(shí)診斷產(chǎn)品-“ID NOW”檢測(cè)儀，稱(chēng)其可在5 min內(nèi)獲得SARS-COV-2的檢測(cè)結(jié)果，并獲得了美國(guó)FDA的緊急使用授權(quán)；分子診斷公司Cepheid和Qiagen基于床邊分子檢測(cè)(molecular point-of-care)技術(shù)開(kāi)發(fā)出了可在1 h內(nèi)檢測(cè)新冠病毒的檢測(cè)方案。

1.3 熒光PCR檢測(cè)新冠病毒現(xiàn)存的問(wèn)題

初期COVID-19缺乏特異性癥狀，與流行性感冒癥狀相似，僅從臨床表現(xiàn)難以確診。現(xiàn)階段，實(shí)驗(yàn)室主要采用實(shí)時(shí)熒光PCR為檢測(cè)手段，判斷SARS-CoV-2陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)主要為：一是檢測(cè)同一份樣本ORF1ab和N基因，雙指標(biāo)均為陽(yáng)性；二是再次重新采樣檢測(cè)仍有一個(gè)目標(biāo)基因(ORF1ab或N基因)為陽(yáng)性。根據(jù)已展開(kāi)的檢測(cè)情況，熒光PCR檢測(cè)SARS-CoV-2存在多種問(wèn)題。

1.3.1取樣不同而導(dǎo)致病毒檢測(cè)結(jié)果差異 目前，COVID-19檢測(cè)樣本類(lèi)型有3種：呼吸道樣本、消化道樣本(糞便、肛拭子)、血液樣本(全血、血清標(biāo)本)。呼吸道樣本分為上呼吸道樣本(鼻咽拭子、口咽拭子等)和下呼吸道樣本(深咳痰液、肺泡灌洗液、支氣管灌洗液等)；現(xiàn)常用標(biāo)本類(lèi)型為鼻咽拭子或口咽拭子，但是鐘慧鈺等[13]發(fā)現(xiàn)，病人同一病程的咽拭子樣本只有30%～50%陽(yáng)性檢測(cè)率，明顯低于深部咳痰；陳煒等[14]認(rèn)為痰液標(biāo)本病毒含量高于咽拭子標(biāo)本，這可能與病毒攻擊下呼吸道，引起咳嗽、肺炎等癥狀有關(guān)；楊立平等[15]發(fā)現(xiàn)同一病人的不同病程，咽拭子檢測(cè)結(jié)果不同，病毒在病程初期含量較低，導(dǎo)致疑似患者最初檢測(cè)結(jié)果為陰性，而隔幾天的咽拭子檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，所以往往需要重復(fù)檢測(cè)才能確診；李萍等[16]檢驗(yàn)了新冠肺炎患者的糞便樣本、咽拭子樣本、血液樣本，結(jié)果顯示糞便樣本的陽(yáng)性檢測(cè)率顯著高于咽拭子，認(rèn)為糞便樣本對(duì)于SARS-CoV-2的檢測(cè)價(jià)值值得重視。樣本選擇會(huì)直接影響SARS-CoV-2檢測(cè)結(jié)果，因此，建立一種受樣本選擇影響較小、靈敏度更高的檢驗(yàn)方法非常重要。

1.3.2試劑盒不同導(dǎo)致病毒檢測(cè)結(jié)果不同 COVID-19基因序列公布后，大量研發(fā)公司投入對(duì)COVID-19核酸檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)，現(xiàn)已取得國(guó)家批準(zhǔn)的新冠病毒核酸檢測(cè)試劑盒公司有安達(dá)基因、華大生物、上海伯杰、圣湘生物等19家公司。不同的核酸檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果存在區(qū)別，郭元元等[17]對(duì)6種試劑盒進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)能同時(shí)檢測(cè)出ORF1ab 基因和 N 基因的試劑盒只有2種，且只有3個(gè)試劑盒可以敏感地檢測(cè)出樣本病毒含量增加。王旭東等[18]所在醫(yī)院將3例醫(yī)院檢測(cè)為陽(yáng)性的樣本送檢另一家實(shí)驗(yàn)室，結(jié)果顯示陰性，其認(rèn)為檢測(cè)試劑盒質(zhì)量參差不齊，其穩(wěn)定性和可靠性需要提高。試劑盒的檢測(cè)效果和探針特異性、引物擴(kuò)增效率、以及PCR擴(kuò)增抑制物含量、操作環(huán)境、儀器設(shè)備類(lèi)型都有關(guān)系，某些試劑盒的PCR反應(yīng)體系存在靈敏度低、重復(fù)性差等問(wèn)題。核酸檢測(cè)試劑盒的選擇可以決定SARS-CoV-2的檢出效率和結(jié)果，因此開(kāi)發(fā)出特異性更強(qiáng)、抑制劑耐受性高、PCR擴(kuò)增效率更高的試劑盒對(duì)疫情的控制至關(guān)重要。

2 數(shù)字PCR的原理與優(yōu)勢(shì)

2.1 數(shù)字PCR的原理

數(shù)字PCR(digital PCR，dPCR)是精準(zhǔn)定量核酸分子的全新技術(shù)手段，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，已在病毒核酸檢測(cè)、稀有突變檢測(cè)、拷貝數(shù)變異、DNA甲基化分析等醫(yī)學(xué)分子診斷領(lǐng)域有較好的應(yīng)用。數(shù)字PCR不同于傳統(tǒng)實(shí)時(shí)熒光PCR的運(yùn)行模式，其不需要依賴(lài)標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)油包水技術(shù)或者微流控技術(shù)將含有DNA的反應(yīng)混合液隨機(jī)分配到眾多納升級(jí)的反應(yīng)單元中，每一個(gè)反應(yīng)單元都是獨(dú)立的PCR反應(yīng)體系，設(shè)置PCR反應(yīng)程序后，目標(biāo)DNA序列不斷擴(kuò)增，在反應(yīng)終點(diǎn)對(duì)有熒光信號(hào)的反應(yīng)單元進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，根據(jù)泊松分布公式進(jìn)行校正和計(jì)算，從而得到靶標(biāo)分子的絕對(duì)數(shù)量[19]。

2.2 數(shù)字PCR優(yōu)勢(shì)

數(shù)字PCR原理是將PCR反應(yīng)混合液分配到大量的微小反應(yīng)單元中，獨(dú)特的分配方式使數(shù)字PCR具有眾多優(yōu)勢(shì)。數(shù)字PCR儀將反應(yīng)混合液中眾多核酸分子隨機(jī)分配到獨(dú)立反應(yīng)單元，降低了背景核酸對(duì)含量較少的靶序列擴(kuò)增的干擾，增加了檢測(cè)的靈敏度和重復(fù)性[20]；靶標(biāo)DNA分子分配到不同反應(yīng)單元，PCR反應(yīng)抑制劑隨之分配，增加了數(shù)字PCR抑制劑的耐受性；數(shù)字PCR具有對(duì)反應(yīng)抑制劑耐受性強(qiáng)、受背景野生DNA分子干擾小的特點(diǎn)，當(dāng)樣本珍貴、病毒載量低，或者樣本核酸存在降解時(shí)，數(shù)字PCR優(yōu)勢(shì)明顯。另外，數(shù)字PCR不依賴(lài)標(biāo)準(zhǔn)曲線和內(nèi)參基因，采用終點(diǎn)計(jì)數(shù)的方法，根據(jù)陰陽(yáng)微滴的數(shù)目和泊松分布原理，可以得到目標(biāo)分子的絕對(duì)數(shù)量，實(shí)現(xiàn)真正意義上的絕對(duì)定量[21]。

2.3 數(shù)字PCR在病毒檢測(cè)中的應(yīng)用

數(shù)字PCR已用于HIV病毒、人鼻病毒、戊型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、皰疹病毒、日本腦炎病毒等多種病毒的檢測(cè)中，并在病毒學(xué)領(lǐng)域顯現(xiàn)優(yōu)勢(shì)。比如：Strain等[22]以外周血為樣本，用數(shù)字PCR對(duì)樣本中HIV病毒的2-LTR(long terminal repeat，LTR)序列進(jìn)行檢測(cè)，研究表明數(shù)字PCR能有效檢測(cè)HIV病毒載量在治療過(guò)程中的微量變化，檢測(cè)精確度比熒光PCR提高20倍以上；Sedlak等[23]用數(shù)字PCR和熒光PCR分別對(duì)人鼻病毒不同基因型進(jìn)行檢測(cè)，提出數(shù)字PCR是對(duì)人鼻病毒進(jìn)行基因分型的最佳方法。Nicot等[24]應(yīng)用數(shù)字PCR技術(shù)檢測(cè)戊型肝炎臨床標(biāo)本，提出數(shù)字PCR是各種類(lèi)型樣本中戊型肝炎R(shí)NA定量的有效檢測(cè)工具。

3 數(shù)字PCR應(yīng)用于新型冠狀病毒檢測(cè)

3.1 數(shù)字PCR在新冠病毒核酸檢測(cè)中的應(yīng)用情況

現(xiàn)階段，實(shí)時(shí)熒光PCR是檢測(cè)SARS-COV-2的主流方法，但研究發(fā)現(xiàn)由于COVID-19患者的樣本種類(lèi)、病程階段不同，病毒含量也不同[15]，眾多干擾因素都直接影響熒光PCR檢測(cè)結(jié)果[17]，比如部分患者需要多次檢測(cè)才能確診、已出院病人仍攜帶治病病毒等情況，降低了疫情控制的速度；數(shù)字PCR平臺(tái)具有靈敏度高、抑制劑耐受性強(qiáng)、樣本需求量少等特點(diǎn)，其核酸檢測(cè)受樣本病毒載量、試劑盒擴(kuò)增效率、PCR抑制劑影響小[19-21]，能夠增加SARS-CoV-2低載量樣本檢測(cè)的準(zhǔn)確率，避免重復(fù)取樣檢測(cè)?，F(xiàn)已有研究團(tuán)隊(duì)采用數(shù)字PCR檢測(cè)新型冠狀病毒，以探究數(shù)字PCR檢測(cè)該病毒的可行性。Suo等[25]選取了77例咽拭子臨床樣本，其中包括63個(gè)發(fā)熱疑似病人、14個(gè)已接受新冠肺炎治療并準(zhǔn)備出院的病例樣本，用ddPCR和RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)比對(duì)，結(jié)果顯示26例被RT-PCR判定為陰性的樣本，ddPCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，14個(gè)已接受治療即將出院的病人仍然檢測(cè)出含有病毒，該團(tuán)隊(duì)認(rèn)為ddPCR技術(shù)在SARS-CoV-2低載量臨床樣品檢測(cè)中靈敏度和準(zhǔn)確率更高；Yu等[26]對(duì)取自76例新冠肺炎確診病例的323例樣本進(jìn)行檢測(cè)，其中4例被RT-PCR方法檢測(cè)陰性的樣本和41例單基因陽(yáng)性的樣本，ddPCR判定為陽(yáng)性，該研究認(rèn)為針對(duì)高病毒載量的樣本，RT-PCR和ddPCR的檢測(cè)結(jié)果有較好的一致性，但是針對(duì)低載量病毒樣本，ddPCR的表現(xiàn)更加完美。Falzone[27]和Liu等[28]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)ddPCR和RT-PCR相比，ddPCR擁有更高的靈敏度和特異性。數(shù)字PCR檢測(cè)新冠病毒的試劑盒也已成功申請(qǐng)專(zhuān)利，比如深圳華因康基因科技有限公司申請(qǐng)的一種名為“一種基于數(shù)字PCR檢測(cè)新型冠狀病毒的引物探針組合及其應(yīng)用”的試劑盒[29]，蘇州銳訊生物科技有限公司申請(qǐng)的一種名為“新型冠狀病毒核酸檢測(cè)微滴式數(shù)字PCR試劑盒及其應(yīng)用”的試劑盒[30]。

3.2 基于數(shù)字PCR平臺(tái)建立雙重PCR檢測(cè)模型

3.2.1數(shù)字PCR反應(yīng)體系的建立 建立雙重?cái)?shù)字PCR或者多重PCR檢測(cè)方法可在獨(dú)立反應(yīng)體系同時(shí)檢測(cè)ORF1ab基因和N基因，大大提高了核酸檢測(cè)的效率。目前，檢測(cè)SARS-CoV-2的熒光PCR反應(yīng)體系多為一般PCR，增加了檢測(cè)的復(fù)雜性。此外，反應(yīng)體系需設(shè)置檢測(cè)人類(lèi)RNA內(nèi)參基因以增加檢測(cè)準(zhǔn)確性。數(shù)字PCR儀在反應(yīng)終點(diǎn)檢測(cè)到不同類(lèi)型的熒光，通過(guò)數(shù)字PCR微滴二維圖可直觀判斷DNA類(lèi)型和含量，判讀結(jié)果快速直觀。深圳華因康基因科技有限公司和蘇州銳訊生物科技有限公司已申請(qǐng)并公開(kāi)了數(shù)字PCR檢測(cè)新冠病毒試劑盒專(zhuān)利，其中深圳華因康基因科技有限公司建立的數(shù)字PCR體系為多重PCR，具體引物、探針的序列見(jiàn)表1。目前也有核酸檢測(cè)試劑盒針對(duì)ORF1ab、N基因、E基因3個(gè)基因片段建立檢測(cè)體系。

表1 數(shù)字PCR檢測(cè)SARS-CoV-2試劑盒引物、探針序列Table 1 The sequences of primer and probe detecting SARS-CoV-2 by digital PCR

3.2.2數(shù)字PCR反應(yīng)體系探針和引物設(shè)計(jì)

TaqMan探針已廣泛運(yùn)用于SARS-CoV-2檢測(cè)熒光PCR試劑盒，TaqMan探針的特異性隨著探針長(zhǎng)度增加而降低；TaqMan-MGB探針具有長(zhǎng)度短、特異性高等特點(diǎn)，TaqMan-MGB探針將MGB(minor groove binder)基團(tuán)引入TaqMan探針中，顯著增強(qiáng)了TaqMan探針對(duì)SNP的鑒別能力[31]，采用MGB探針能更靈敏、快速地檢測(cè)出SARS-CoV-2。TaqMan-MGB探針與引物設(shè)計(jì)要避免二聚體或者發(fā)夾結(jié)構(gòu)的生成，其能影響PCR的擴(kuò)增效率和TaqMan-MGB探針特異性，多重PCR反應(yīng)體系包含多條引物與探針，容易產(chǎn)生發(fā)夾、二聚體等結(jié)構(gòu)，從而干擾試劑盒檢測(cè)的真實(shí)性和可靠性，多重PCR檢測(cè)體系中TaqMan-MGB引物和探針設(shè)計(jì)可采用設(shè)計(jì)軟件Primer Premier 5.0和TM Utility V1.5。

3.3 數(shù)字PCR檢測(cè)SARS-CoV-2的不足及解決措施

3.3.1采取“兩步法”檢測(cè)SARS-COV-2 數(shù)字PCR檢測(cè)成本較高，需要使用特定的數(shù)字PCR混合液、微滴生成油、微滴生成儀等試劑和檢測(cè)儀器，成本遠(yuǎn)高于熒光PCR檢測(cè)方法，這對(duì)數(shù)字PCR的廣泛推廣帶來(lái)一定困難。為降低檢測(cè)成本，可采用數(shù)字PCR檢測(cè)和熒光PCR檢測(cè)相結(jié)合的方式，比如在SARS-COV-2檢測(cè)中，可首先采用熒光PCR初篩疑似病人樣本，病毒載量較高的樣本可順利檢出；第二步采用數(shù)字PCR平臺(tái)，對(duì)疑似假陰性、弱陽(yáng)性的樣本進(jìn)行再次檢測(cè)，從而判定最終檢測(cè)結(jié)果。采取熒光PCR初步篩選，數(shù)字PCR精準(zhǔn)復(fù)檢的“兩步法”，可以降低檢測(cè)成本，并提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。

3.3.2建立嚴(yán)格質(zhì)量控制以避免“假陽(yáng)性”結(jié)果

數(shù)字PCR操作過(guò)程存在極易被污染的缺點(diǎn)，為避免出現(xiàn)“假陽(yáng)性”結(jié)果，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)室建立嚴(yán)格的內(nèi)部質(zhì)量控制規(guī)范，并嚴(yán)格規(guī)范檢測(cè)操作流程。數(shù)字PCR平臺(tái)對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣環(huán)境、檢驗(yàn)人員操作等環(huán)節(jié)有更高要求，防污染是實(shí)驗(yàn)室的重要工作之一，比如：在生物安全柜配置反應(yīng)混合液；配液區(qū)與加樣區(qū)絕對(duì)分開(kāi)；在配液區(qū)和加樣區(qū)使用不同的手套；移液槍加樣時(shí)要一次性加樣完畢，避免來(lái)回吹打；粘有樣本的槍頭要打進(jìn)裝有水的廢品盒中，避免核酸漂浮在空氣中，從而污染樣本；實(shí)驗(yàn)結(jié)束，用75%乙醇擦洗桌面、1 000 mg·L-1有效氯消毒液拖地消毒，以清除殘留核酸。

4 展望

全球新冠肺炎疫情防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻，能否及時(shí)準(zhǔn)確地篩選出SARS-CoV-2陽(yáng)性感染者，對(duì)疫情防控工作至關(guān)重要。用數(shù)字PCR平臺(tái)建立多重檢測(cè)系統(tǒng)，開(kāi)發(fā)精準(zhǔn)、靈敏的檢測(cè)技術(shù)，可避免重復(fù)檢測(cè)，及時(shí)對(duì)確診病例進(jìn)行治療；基于數(shù)字PCR平臺(tái)檢測(cè)SARS-CoV-2試劑盒的不斷研發(fā)，將有助于提高病毒檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度，這對(duì)切斷傳播途徑，縮短疫情防控期至關(guān)重要。隨著流行病學(xué)研究的需要，數(shù)字PCR可應(yīng)用于對(duì)環(huán)境中病毒的監(jiān)測(cè)，尤其適用于復(fù)雜樣本中低載量核酸分子的檢測(cè)，如對(duì)人員密集區(qū)中生物氣溶膠、水樣等樣本中微量病毒的核酸檢測(cè)。數(shù)字PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)快速、便捷、精準(zhǔn)地監(jiān)測(cè)環(huán)境中的病毒，做到早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，這對(duì)維護(hù)全球公共衛(wèi)生安全具有重要意義。