吳高殷，韋小麗，王 曉，梁 嫻

（貴州大學(xué) a.林學(xué)院；b.貴州省森林資源與環(huán)境研究中心，貴州 貴陽(yáng) 550025）

花櫚木Ormosia henryi為豆科紅豆屬常綠喬木，我國(guó)珍貴用材樹(shù)種，自然分布于我國(guó)安徽、浙江、江西、湖南、湖北、廣東、四川、貴州、云南9 個(gè)省份，海拔100～1 300 m?；澳疽虿馁|(zhì)致密、紋理均勻，是制作高檔家具和工藝品的重要原材料，具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值和極大開(kāi)發(fā)潛力。目前，播種繁殖仍然是花櫚木繁育的主要方式，但因母樹(shù)稀少且結(jié)實(shí)有大小年現(xiàn)象，種子采集困難，且種子繁殖不利于母樹(shù)優(yōu)良性狀的保存。因此，開(kāi)展花櫚木無(wú)性快繁技術(shù)研究，提高繁殖系數(shù)，是解決花櫚木種子來(lái)源不足、保持母樹(shù)優(yōu)良性狀的重要途徑。前人分別采用花櫚木種子[1]、莖段[2]和下胚軸[3]為外植體，通過(guò)器官發(fā)生途徑初步建立了再生體系，但再生體系獲得的植株數(shù)量較少，尚未能滿足其推廣運(yùn)用。

體細(xì)胞胚胎發(fā)生技術(shù)是一種重要的植物體外再生方法[4]，可通過(guò)生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)[4]，其具有繁殖速度快[6]、產(chǎn)量高[7]、利于種質(zhì)資源保存[4]和遺傳轉(zhuǎn)化[6]等優(yōu)勢(shì)，較器官發(fā)生是一種更加高效的無(wú)性繁殖技術(shù)[4]。它是單個(gè)體細(xì)胞或植物組織經(jīng)脫分化、再分化形成再生植株的一個(gè)復(fù)雜生化過(guò)程[8]，其中，胚性愈傷是胚胎形成的前體和體胚發(fā)生的關(guān)鍵材料，胚性愈傷經(jīng)生長(zhǎng)發(fā)育后可形成大量胚狀體，其生理和形態(tài)學(xué)類似于合子胚[9]，是研究胚胎起源、早期生理、分子和形態(tài)的理想模型材料[10-11]。

目前，針葉樹(shù)種如落葉松[12]、紅松[13]、輻射松[14]和云杉[15]等，其成熟的體胚發(fā)生再生體系已被建立，而闊葉樹(shù)種體胚發(fā)生體系僅在部分樹(shù)種中得以運(yùn)用，如鵝掌楸[16]、龍眼[17]和咖啡[7]等。體細(xì)胞胚胎發(fā)生受諸多因素影響。其中外植體本身的狀況尤其是基因型和胚的成熟度是影響體胚發(fā)生的主要因素?；蛐褪求w胚發(fā)生的內(nèi)在因子[9]，不同基因型對(duì)體細(xì)胞胚胎發(fā)生的敏感度不一樣[18-19]，未成熟胚的采種時(shí)期影響著體胚的誘導(dǎo)[15]。一些研究表明，不同基因型成熟胚和不同采種時(shí)期的未成熟胚在生理上存在一定差異，對(duì)體胚誘導(dǎo)具有顯著性影響[12]，但對(duì)其相關(guān)差異的機(jī)理研究甚少。

通過(guò)對(duì)花櫚木不同基因型成熟胚和不同采集期獲得的未成熟胚進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，以期篩選出花櫚木高頻體胚發(fā)生的基因型和采種時(shí)期，為花櫚木體胚誘導(dǎo)篩選適宜的繁殖材料。在實(shí)驗(yàn)中測(cè)定不同基因型成熟胚和不同發(fā)育程度的未成熟胚誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織的生化物質(zhì)變化，并觀察胚性愈傷的起源方式，以揭示不同基因型和不同發(fā)育程度未成熟胚誘導(dǎo)胚性愈傷差異的生理生化基礎(chǔ)，探明花櫚木體胚發(fā)生前期組織形態(tài)學(xué)變化。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

不同基因型的種子采集及處理：2017年11月從7 個(gè)種源地收集7 株花櫚木單株成熟種子，置于4 ℃冰箱中貯藏。7 株母樹(shù)基本情況及其種子表型特征見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，加2 滴吐溫-20，清洗花櫚木種子表面雜質(zhì)，晾干后使用濃H2SO4處理1 h，回收濃H2SO4，在自來(lái)水下沖洗掉種子表面的濃H2SO4。

不同發(fā)育程度的未成熟胚采集及處理：于2018年8月10日（T1）、8月20日（T2）、8月30日（T3）、9月9日（T4）和9月19日（T5）5 個(gè)時(shí)期（表2）在貴陽(yáng)市花溪區(qū)楊中村采集花櫚木未成熟種子（基因型為GZHX），每次采樣約200 粒，帶回實(shí)驗(yàn)室去除豆莢，取出未成熟種子（圖1），加入2 滴吐溫-20，在自來(lái)水下沖洗半小時(shí)。

表1 7 株母樹(shù)種子的基本信息?Table 1 Seed information of seven mother trees

表2 不同采種時(shí)期對(duì)胚性愈傷組織生長(zhǎng)及生理的影響Table 2 Effects of different seed collecting stages on growth and physiology of EC

圖1 基因型GZHX 胚性愈傷的誘導(dǎo)Fig.1 EC induction of GZHX genotypes

1.2 方 法

1.2.1 胚性愈傷誘導(dǎo)

將上述種子轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)上，75%酒精處理1 min，2% NaClO 處理8 min，無(wú)菌水沖洗5遍（其中成熟種子須在無(wú)菌水中吸脹24 h）。然后使用刀片、鑷子取出成熟胚和未成熟胚，接種至培養(yǎng)基中進(jìn)行胚性愈傷誘導(dǎo)。胚性愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基參考Wu 等[20]的配方，為：B5+6-BA(0.2 mg/L)+2,4-D(2.0 mg/L)+蔗糖（30 g/L）+結(jié)冷膠（2.5 g/L）+谷氨酰胺（500 mg/L）。pH 值5.9±0.1，采用121 ℃高溫滅菌20 min。每個(gè)處理5 次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)接種30～50 個(gè)外植體，接種后進(jìn)行暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±2 ℃。第25 天觀察愈傷形態(tài)特征和統(tǒng)計(jì)胚性愈傷的誘導(dǎo)率。

1.2.2 體胚誘導(dǎo)

7 個(gè)基因型和5 個(gè)采種時(shí)期的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移至體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基B5+KT(0.5 mg/L)+2,4-D(1.0 mg/L)中[20]，每個(gè)處理4 個(gè)重復(fù)，每次重復(fù)20～30 個(gè)胚性愈傷組織。培養(yǎng)4 周后統(tǒng)計(jì)體胚誘導(dǎo)率。

1.2.3 胚性愈傷的生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)

不同基因型胚性愈傷誘導(dǎo)過(guò)程中，監(jiān)測(cè)胚性愈傷組織的質(zhì)量，其取樣時(shí)間參考王高[13]和范建芝[21]的方法，分別于成熟胚接種后7、11、15、19、23、27、30 和33 d 稱量胚性愈傷的質(zhì)量，每次稱量4～7 個(gè)胚性愈傷組織。

1.2.4 胚性愈傷生理生化的測(cè)定

不同基因型成熟胚和GZHX 基因型5 個(gè)采集時(shí)期未成熟胚在胚性愈傷誘導(dǎo)25 d 后，分別收集其胚性愈傷組織，用蒸餾水清洗掉胚性愈傷組織上的培養(yǎng)基，放入10 mL 離心管，貯藏在-80 ℃冰箱。待樣品收集完成后，統(tǒng)一測(cè)定其可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白含量；可溶性糖和淀粉含量采用硫酸-蒽酮法進(jìn)行測(cè)定[22]，可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行測(cè)定[22]，每個(gè)處理測(cè)定5 個(gè)重復(fù)。

1.2.5 組織細(xì)胞學(xué)觀察

GZHX 基因型愈傷組織經(jīng)繼代培養(yǎng)40 d 后，收集胚性愈傷和非胚性愈傷固定在FAA 固定液中24 h，經(jīng)乙醇系列脫水和二甲苯透明等，常規(guī)石蠟切片，番紅-固綠進(jìn)行雙重染色，在萊卡DM-3000 顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍照。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 18.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和相關(guān)性分析，通過(guò)Turkey檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同基因型和不同采種時(shí)期胚性愈傷組織的誘導(dǎo)

通過(guò)觀察，成熟胚在培養(yǎng)基中培養(yǎng)10 d，有部分胚開(kāi)始膨大和萌發(fā)。在成熟胚四周形成少量愈傷組織，胚性愈傷組織為結(jié)節(jié)狀愈傷組織，在外觀形態(tài)上均呈乳白色或黃白色，結(jié)構(gòu)致密（圖1）。胚性愈傷誘導(dǎo)率因基因型不同而異（圖2）?；蛐虶ZGL 胚性愈傷誘導(dǎo)率最高（41.07%），比AHQM 和AHXN 分別高13.06%和21.44%，但與GZHX、GZPT、ZJLQ和ZJYK差異不顯著（P＜0.05）。

圖2 7 個(gè)基因型對(duì)胚性愈傷誘導(dǎo)的影響Fig.2 Effects of seven genotypes on EC induction

未成熟胚在培養(yǎng)基中培養(yǎng)7～12 d，大部分未成熟胚膨大，尚未萌發(fā)；在未成熟胚周?chē)T導(dǎo)出的胚性愈傷與成熟胚誘導(dǎo)的胚性愈傷在質(zhì)地上表現(xiàn)出相同的特征。胚性愈傷組織誘導(dǎo)率受采種時(shí)期影響較大，隨采種時(shí)期的推遲呈先升高后降低的趨勢(shì)（圖3），T4 胚性愈傷誘導(dǎo)率最大（37.49 %），比T1 高10.49%，與T2、T3 和T5 差異不顯著性（P＜0.05）。

圖3 5 個(gè)采種時(shí)期對(duì)胚性愈傷誘導(dǎo)的影響Fig.3 Effects of five seed collecting stages on EC induction

2.2 不同基因型和不同采種時(shí)期體胚誘導(dǎo)

胚性愈傷組織在體胚發(fā)生培養(yǎng)基中培養(yǎng)40 d，在胚性愈傷組織表面可觀測(cè)到表面光滑、顆粒狀的球形胚（圖4），隨著進(jìn)一步的培養(yǎng)，可觀察到體細(xì)胞胚的發(fā)育（圖4g）。7 個(gè)基因型體胚發(fā)生誘導(dǎo)率具有顯著性差異（圖5），基因型GZPT的體胚發(fā)生誘導(dǎo)率最高（18.4%），比基因型GZHX、GZGL、ZJLQ、ZJYK、ANQM 分別高8%、11%、9%、10%、17%，而基因型ANXN 卻觀察不到體胚發(fā)生。

續(xù)圖4Continuation of Fig.4

圖5 7 個(gè)基因型對(duì)體胚發(fā)生誘導(dǎo)的影響Fig.5 Effects of seven genotypes on SE induction

5 個(gè)采種時(shí)期體胚發(fā)生誘導(dǎo)率呈先升高后降低的趨勢(shì)（圖6）。T4 體胚發(fā)生誘導(dǎo)率最高（14.2%），與T1、T2、T3、T5 差異不顯著。

圖6 5 個(gè)采種時(shí)期對(duì)體胚發(fā)生誘導(dǎo)的影響Fig.6 Effects of five seed collecting stages on SE induction

2.3 胚性愈傷組織生長(zhǎng)和生化物質(zhì)

2.3.1 不同基因型花櫚木胚性愈傷組織生長(zhǎng)和生化物質(zhì)比較

7 個(gè)基因型胚性愈傷的重量增長(zhǎng)隨時(shí)間的增加類似“S”形曲線（圖7）。其中，基因型GZPT、GZHX、ANQM 和AHXN 胚性愈傷組織的生長(zhǎng)在15～20 d 之間斜率最大，表明生長(zhǎng)速度最快；ZJLQ 和ZJYK 胚性愈傷生長(zhǎng)速度在15～25 d之間最大；GZGL 胚性愈傷生長(zhǎng)速度在18～25 d之間最大，但7 個(gè)基因型胚性愈傷的生長(zhǎng)速度均在25～30 d 之間明顯變緩。這說(shuō)明不同基因型胚性愈傷組織的生長(zhǎng)速率之間存在差異，隨著生長(zhǎng)時(shí)間的增加，胚性愈傷組織的生長(zhǎng)速度均變緩，甚至停止生長(zhǎng)。

圖7 7 個(gè)基因型胚性愈傷的生長(zhǎng)曲線Fig.7 Growth curves of EC in seven genotypes

7 個(gè)基因型胚性愈傷組織可溶性蛋白、可溶性糖和淀粉含量差異顯著（P＜0.05）（圖8）?；蛐虶ZPT 胚性愈傷可溶性蛋白含量最高，比含量較低的基因型ZJLQ 和ZJYK 高約1.76 倍。基因型ZJLQ 胚性愈傷淀粉含量最高，比基因型GZHX、GZPT 和GZGL 分別高1.50、1.41 和1.56倍，但與AHQM、QHXN 和ZJYK 差異不顯著（P＜0.05）。基因型AHQM 胚性愈傷可溶性糖含量最高，而GZPT 含量最低。表明不同基因型胚性愈傷組織積累碳氮的能力不同。

圖8 7 個(gè)基因型胚性愈傷組織生化物質(zhì)比較Fig.8 Comparison of biochemical substances of seven genotypes EC

2.3.2 不同采集時(shí)間花櫚木胚性愈傷組織生長(zhǎng)和生化物質(zhì)比較

培養(yǎng)25 d 后，5 個(gè)采種時(shí)期胚性愈傷組織的重量增長(zhǎng)差異不顯著。但5 個(gè)采種時(shí)期未成熟胚誘導(dǎo)的胚性愈傷可溶性蛋白、淀粉、可溶性糖差異顯著（P＜0.05）（表2）。

T2 的胚性愈傷組織可溶性蛋白含量最大，是含量最低的T5 的1.41 倍。T1 誘導(dǎo)的胚性愈傷的可溶性糖和淀粉含量均最高。結(jié)果表明采種前期未成熟胚誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織對(duì)碳氮積累能力較強(qiáng)且具有更高的生理活性。

2.4 相關(guān)性分析

對(duì)體胚發(fā)生誘導(dǎo)率與不同基因型種子特征和胚性愈傷生理特性的相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3得出，體胚誘導(dǎo)率與胚性愈傷誘導(dǎo)率呈極顯著正相關(guān)，與基因型呈極顯著負(fù)相關(guān)，與種子厚度的呈顯著相關(guān)，與其他參數(shù)不具有相關(guān)性。由此可見(jiàn)，花櫚木在不同基因型胚性愈傷組織的生長(zhǎng)、生理特性及種子特征上雖然具有差異，但是它們的一些特性對(duì)體胚發(fā)生的相關(guān)性不大。這表明體胚發(fā)生誘導(dǎo)率是一個(gè)較為復(fù)雜的過(guò)程。

對(duì)體胚發(fā)生誘導(dǎo)率與不同采種時(shí)期種子特征和胚性愈傷生理特性的相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4得出，體胚發(fā)生誘導(dǎo)率僅與采種時(shí)期呈極顯著負(fù)相關(guān)，與其他因子不具有相關(guān)性，特別是與胚性愈傷組織誘導(dǎo)率不具有相關(guān)性，這與不同采種時(shí)期胚性愈傷組織誘導(dǎo)率差異不顯著有關(guān)。

2.5 愈傷組織結(jié)構(gòu)及胚性愈傷的起源

觀察發(fā)現(xiàn)，花櫚木愈傷組織初期有兩種愈傷類型，一種為乳白色，塊狀和硬實(shí)的愈傷組織是非胚性愈傷組織；另一種為黃白色和緊密的愈傷組織是胚性愈傷組織。通過(guò)組織學(xué)觀察可見(jiàn)非胚性愈傷組織細(xì)胞較大、排列松散、空泡現(xiàn)象較多、染色淺、細(xì)胞質(zhì)少、細(xì)胞核小甚至觀察不到（圖9a）；而胚性愈傷組織細(xì)胞小、排列緊密、空泡現(xiàn)象較少、細(xì)胞質(zhì)濃厚、細(xì)胞核明顯的愈傷為胚性愈傷組織（圖9b）。胚性愈傷在組織內(nèi)部和組織周?chē)捎^察得到，一種是起源于組織內(nèi)部的胚性愈傷組織，由多細(xì)胞組織構(gòu)成，四周有多層排列致密的薄壁細(xì)胞（圖9c）；另一種是起源于組織外部的胚性愈傷，與母體組織相連（圖9d）。隨著愈傷組織的進(jìn)一步發(fā)育，在愈傷組織的表面有球狀胚的分化（圖9f）。此外，愈傷組織在繼代過(guò)程中，在同一塊愈傷組織上能夠同時(shí)觀察到胚性愈傷和非胚性愈傷組織，胚性愈傷從非胚性愈傷上長(zhǎng)出（圖9e）。

表3 體胚發(fā)生誘導(dǎo)率與不同基因型種子特征和胚性愈傷生理特性的相關(guān)性分析?Table 3 Correlation analysis of somatic embryogenesis induction rate with seed Characteristics of different genotypes and physiological characteristics of embryogenic callus

表4 體胚發(fā)生誘導(dǎo)率與不同采種時(shí)期種子特征和胚性愈傷生理特性的相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis of somatic embryogenesis induction rate with seed characteristics of collecting stages and physiological characteristics of embryogenic callus

3 討 論

基因型對(duì)體外繁殖是一個(gè)重要的因子，特別是對(duì)體胚發(fā)生誘導(dǎo)[23-24]。在一些樹(shù)種改良中，體胚發(fā)生這一生物技術(shù)的應(yīng)用是依賴于樹(shù)種基因型的[25]。展示7 株母樹(shù)的種子除了在千粒重和表型上具有明顯差異外，其胚性愈傷組織誘導(dǎo)率和體胚誘導(dǎo)率也存在差異。其中，貴州和浙江種源地采集的成熟胚胚性愈傷誘導(dǎo)率均在35%以上，而安徽種源地成熟胚胚性愈傷誘導(dǎo)率卻均低于30%，基因型AHXN 尚未觀察到體胚。Fehér[26]和Sultan[27]認(rèn)為不同基因型的差異與它們的環(huán)境有著錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系，環(huán)境對(duì)植物的形態(tài)、功能和發(fā)育有顯著的影響；導(dǎo)致基因型在不同的條件下表現(xiàn)型是不同的[28]，且植物克隆能力的大小是自然選擇的結(jié)果，以應(yīng)對(duì)外界不良環(huán)境使得后代得以繁衍。這些差異可能是造成體胚發(fā)生誘導(dǎo)率不同的原因。Hu 等[18]和Correia 等[23]報(bào)道可通過(guò)改變和優(yōu)化培養(yǎng)條件來(lái)減小不同基因型體胚發(fā)生誘導(dǎo)率之間的差異；此外，為了獲得更高頻體胚發(fā)生誘導(dǎo)率，還可擴(kuò)大對(duì)基因型的篩選范圍。

胚性愈傷組織生理生化變化受外界因素影響較大。在花櫚木7 個(gè)基因型中，胚性愈傷可溶性蛋白含量在貴州種源（GZHX、GZPT 和GZGL）較 安 徽（ANQM 和ANXN) 和 浙 江（ZJLQ 和ZJYK）種源高，而胚性愈傷可溶性糖和淀粉含量在安徽和浙江種源卻高于貴州種源。這種生理上的差異可能是由于它們處于不同氣候和不同地域條件下引起差異基因表達(dá)，從而導(dǎo)致碳、氮代謝具有差異的原因。

圖9 細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)Fig.9 Histologial studies

7 個(gè)基因型成熟胚誘導(dǎo)出的胚性愈傷在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速率呈先慢后快再慢的趨勢(shì)，生長(zhǎng)曲線呈“S”形，這與范建芝[21]研究北美喬松中兩個(gè)細(xì)胞系愈傷生長(zhǎng)曲線結(jié)果一致。北美喬松兩個(gè)細(xì)胞系愈傷生長(zhǎng)速率最大值均在5～10 d 之間；紅松愈傷最大生長(zhǎng)速率在12 d 左右，20 d 后增長(zhǎng)趨于停滯[21]；而花櫚木不同基因型胚性愈傷組織最大生長(zhǎng)速率的時(shí)間不同，但均在15～25 d 之間，表明花櫚木胚性愈傷生長(zhǎng)速率比北美喬松和紅松慢。一般情況下，以外植體生長(zhǎng)速率變緩為最佳繼代時(shí)間，北美喬松和紅松胚性愈傷最佳繼代時(shí)間為2～3 周，而花櫚木最佳繼代時(shí)間為25 d。

大量研究表明未成熟胚是體胚發(fā)生誘導(dǎo)較為理想的外植體，未成熟胚的成熟度顯著影響體胚發(fā)生響應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)得出體胚發(fā)生誘導(dǎo)率隨未成熟胚采種時(shí)期的推遲呈先升高后降低的趨勢(shì)，T4 體胚誘導(dǎo)率達(dá)到最大值，這表明不同發(fā)育時(shí)期未成熟胚在相同培養(yǎng)條件下產(chǎn)生不同的胚性反應(yīng)。選擇適宜的采種時(shí)期可獲得更高體胚發(fā)生頻率，這在杉木[18]和輻射松[14]中有類似報(bào)道。Hu 等報(bào)道從卵裂多胚胎到明顯胚胎階段的未成熟合子胚胎對(duì)胚性愈傷組織的誘導(dǎo)反應(yīng)最為敏感。未成熟胚體胚發(fā)生的響應(yīng)可能與其生理狀況[29]和形態(tài)建成[30]有關(guān)。

花櫚木愈傷組織有兩種類型，一種是外植體誘導(dǎo)出的愈傷組織進(jìn)入胚性途徑為胚性愈傷，而另一些細(xì)胞形成非胚性愈傷組織。兩種愈傷在外觀形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)上具有較大的差異。這兩種類型的愈傷組織是源于不同細(xì)胞類型還是細(xì)胞內(nèi)外微環(huán)境觸發(fā)了不同形態(tài)發(fā)生？其原因尚未清楚。類似的研究在樹(shù)番茄[23]、冬青櫟[31]和杉木[18]等中均有發(fā)現(xiàn)。胚性愈傷經(jīng)生長(zhǎng)發(fā)育后在形態(tài)學(xué)上類似于合子胚[9]，最終發(fā)育成與母本性狀一致的再生植株，而非胚性愈傷卻不能[32]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)非胚性愈傷組織表面能夠觀察到黃白色、致密的胚性愈傷組織；這表明在適宜條件下，非胚性愈傷組織可以誘導(dǎo)出胚性愈傷組織。從花櫚木胚性愈傷的細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察到胚性愈傷組織的起源方式即有內(nèi)起源，又有外起源，這與項(xiàng)偉波[33]研究香榧胚性愈傷組織的起源方式一樣；崔凱榮等[34]認(rèn)為體細(xì)胞胚胎發(fā)生起源方式可能與培養(yǎng)細(xì)胞在特定培養(yǎng)條件下是否是胚胎預(yù)決定細(xì)胞有關(guān)。盡管植物細(xì)胞可塑性強(qiáng)具有全能性的特點(diǎn)，但同種外植體在相同環(huán)境條件下卻具有不同的發(fā)育命運(yùn)。雖然細(xì)胞預(yù)決定和細(xì)胞全能性可以部分解釋體胚發(fā)生起源機(jī)制，但細(xì)胞的起源仍然是現(xiàn)代生命科學(xué)中未解的最大謎團(tuán)之一，要真正揭示植物細(xì)胞胚胎發(fā)生的起源機(jī)制還需要進(jìn)一步的深入研究。而花櫚木胚性愈傷組織的內(nèi)起源和外起源可為今后探索細(xì)胞起源的機(jī)理提供參考。

4 結(jié) 論

本研究表明花櫚木7 個(gè)基因型成熟胚和5 個(gè)采種時(shí)期未成熟胚對(duì)胚性愈傷誘導(dǎo)和體胚誘導(dǎo)具有顯著影響，且它們誘導(dǎo)出的胚性愈傷在生理生化上具有較大的差異；其中，胚性愈傷誘導(dǎo)率以基因型GZGL 和T4 最高；體胚發(fā)生誘導(dǎo)率以GZPT 和T4 最高。篩選出體胚高頻誘導(dǎo)率的基因型，并發(fā)現(xiàn)未成熟胚的采種時(shí)期對(duì)體胚誘導(dǎo)率有一個(gè)窗口期，這可為花櫚木體胚誘導(dǎo)篩選適宜的繁殖材料提供參考。