陳珍珠，汪霖，茆智翔

(徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤科，江蘇 徐州)

0 引言

在惡性腫瘤中，結(jié)腸癌較常見，其對(duì)患者生命健康產(chǎn)生了嚴(yán)重威脅。當(dāng)前，隨著腫瘤免疫治療的發(fā)展，程序性死亡分子(PD-1)已被明確為在T淋巴細(xì)胞表面誘導(dǎo)表達(dá)的抑制性受體，其由程序性死亡因子配體1(PD-L1)和程序性死亡因子配體2(PD-L2)兩個(gè)配體分子組成[1]。其中，PD-L1經(jīng)PD-1/PD-L1傳導(dǎo)通路對(duì)T細(xì)胞分化增殖進(jìn)行抑制，將信號(hào)傳導(dǎo)和多類細(xì)胞因子分泌阻斷，造成腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移問題[2]?，F(xiàn)如今，有關(guān)PD-L1在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理、預(yù)后關(guān)系等相關(guān)研究并不是很多。本實(shí)驗(yàn)選取病例進(jìn)行簡要闡述。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實(shí)驗(yàn)時(shí)間2018年1月至2018年12月，實(shí)驗(yàn)對(duì)象91例結(jié)腸癌患者腫瘤組織。男性45例，女性46例；年齡最小者35歲，年齡最大者78歲，平均年齡(56.54±3.82)歲；按國際抗癌協(xié)會(huì)分類標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)施腫瘤分期、組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ期12例，Ⅱ期25例，Ⅲ期41例，Ⅳ期13例；G1級(jí)16例，G2級(jí)55例，G3級(jí)20例。患者均隨訪1年。

1.2 方法

對(duì)PD-L1蛋白實(shí)施免疫組化檢測(cè)，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)鏈霉親和過氧化物酶，在特定濃度一抗中放置組織切片，孵育過夜，第二天，再把切片放入羊抗兔lgG內(nèi)(經(jīng)生物素標(biāo)記)孵育0.5h，繼而轉(zhuǎn)移至經(jīng)過氧化酶標(biāo)記的鏈霉親和素室溫孵育20min。發(fā)揮0.02%3，3’—二氨基聯(lián)苯胺作用，于50mmol/L Tris-HCI緩沖液(pH7.6)內(nèi)染色，時(shí)長6min左右，再用蘇木精復(fù)染，用水清洗，依次進(jìn)行脫水、清除、封片處理。該背景下，與免疫染色相對(duì)應(yīng)的則是借助非免疫山羊或者兔血清對(duì)一抗進(jìn)行替代，在顯微鏡下觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

實(shí)施DAKO Hercept Test評(píng)分：PD-L1陽性顯色：細(xì)胞漿出現(xiàn)黃色至棕黃色顆粒。評(píng)分指標(biāo)包括染色強(qiáng)度、陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，在低倍鏡下，選擇5個(gè)視野，用高倍鏡觀察。染色強(qiáng)度：0分提示無著色；1分提示淡黃色；2分提示棕黃色；3分提示棕褐色，分值越高，顏色越深。陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)：1分：陽性細(xì)胞不足10%；2分：陽性細(xì)胞10%-50%；3分：陽性細(xì)胞50%以上。PD-L1表達(dá)陽性即當(dāng)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)乘積在3分及以上，反之，則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

篩選實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)學(xué)工具(版本：選SPSS 23.0)讀取和處理。計(jì)量資料、計(jì)數(shù)資料的呈現(xiàn)形式分別為(±s)、(n，%)，驗(yàn)證方式t、χ2。P值小于0.05提示數(shù)據(jù)有顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1蛋白表達(dá)

發(fā)揮免疫組化作用，對(duì)結(jié)腸癌患者癌組織、癌旁組織、正常組織內(nèi)PD-L1表達(dá)進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果提示，PD-L1在細(xì)胞膜、胞質(zhì)定位，在腫瘤組織內(nèi)，PD-L1高表達(dá)25例(27.47%)，中度表達(dá)28例(30.77%)，弱表達(dá)38例(41.76%)；在癌旁組織、正常組織內(nèi)檢測(cè)到的例數(shù)則非常少，分別為10.99%(10/91)和6.59%(6/91)。

2.2 結(jié)腸癌組織內(nèi)PD-L1表達(dá)與病理因素關(guān)系

結(jié)腸癌組織內(nèi)PD-L1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分期等病理因素有關(guān)。具體見表1。

表1 結(jié)腸癌組織內(nèi)PD-L1表達(dá)與病理因素關(guān)系(n，%)

2.3 PD-L1與結(jié)腸癌預(yù)后關(guān)系

TNM分期晚、分化程度低、淋巴結(jié)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、PD-L1表達(dá)陽性均會(huì)對(duì)結(jié)腸癌預(yù)后生存產(chǎn)生影響。結(jié)直腸癌PD-L1表達(dá)與術(shù)后生存期具有相關(guān)性。具體見表2。

表2 PD-L1與結(jié)直腸癌預(yù)后關(guān)系

3 討論

免疫耐受現(xiàn)象會(huì)阻礙腫瘤免疫治療。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞經(jīng)各類機(jī)制對(duì)自身形成保護(hù)，規(guī)避機(jī)體免疫反應(yīng)，其主要通過PD-L1表達(dá)上調(diào)實(shí)現(xiàn)[3]。在免疫應(yīng)答中，PD-L1作為凋亡相關(guān)蛋白，發(fā)揮重要作用，對(duì)T淋巴細(xì)胞和其配體PD-1結(jié)合起誘導(dǎo)作用，從而把抑制性信號(hào)傳遞給T細(xì)胞，發(fā)生凋亡，對(duì)外周T細(xì)胞的免疫耐受進(jìn)行調(diào)節(jié)[4]。在腫瘤免疫治療中，PD-1/PD -L1通路與腫瘤逃避免疫系統(tǒng)破壞問題備受關(guān)注[5]。發(fā)揮藥物作用，將PD-1/PD-L1通路阻斷，有利于使T細(xì)胞功能增強(qiáng)，對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生影響，使之裂解，實(shí)現(xiàn)腫瘤治療。實(shí)驗(yàn)證實(shí)[6-9]，PD-L1在多類腫瘤組織中廣泛表達(dá)，但有關(guān)結(jié)腸癌患者PD-L1表達(dá)與臨床病理因素、預(yù)后關(guān)系尚不明確。結(jié)果顯示：在腫瘤組織內(nèi)，PD-L1表達(dá)顯著升高，其不受年齡、性別、腫瘤大小等因素影響，但與腫瘤的TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的誘因即腫瘤組織內(nèi)PD-L1高表達(dá)，證實(shí)了在結(jié)腸癌治療中，PD-L1為重要耙點(diǎn)。

在免疫系統(tǒng)內(nèi)，PD-L1的作用在于維持正常機(jī)體保護(hù)性免疫和免疫耐受平衡[10-12]。在腫瘤微環(huán)境中，依托各機(jī)制，對(duì)PD-L1產(chǎn)生影響，使其表達(dá)上調(diào)，使PD-1/PD-L1信號(hào)通路處于異常激活狀態(tài)，通過各類方式對(duì)T細(xì)胞增殖、分化進(jìn)行抑制，通過誘導(dǎo)，使之發(fā)生凋亡，介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸[13]。除此之外，PD-L1還能夠?qū)細(xì)胞缺失進(jìn)行有效調(diào)節(jié)?，F(xiàn)如今，有關(guān)PD-1/PD-L1通路機(jī)制、是否存在多個(gè)受體仍不明確，后續(xù)將通過PD-L1單抗或多抗制備，對(duì)該通路今星期有效阻斷，為結(jié)腸癌臨床治療工作的開展奠定良好基礎(chǔ)。

綜上，在腫瘤免疫治療中，PD-1/PD-L1備受認(rèn)可，其信號(hào)通路為結(jié)腸癌治療工作提供了新的分子耙標(biāo)。在結(jié)腸癌中，PD-L1蛋白表達(dá)上調(diào)，相關(guān)因素有TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不良預(yù)后等。故而，PD-L1能夠被看作結(jié)腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移的新型生物標(biāo)志物，未來一段時(shí)間，將重點(diǎn)探討結(jié)腸癌免疫治療中，PD-L1能否作用關(guān)鍵耙點(diǎn)發(fā)揮作用及其相關(guān)機(jī)制。