劉澤文 袁芳艷 劉威 高婷 周丹娜 楊克禮 郭銳 梁婉 田永祥

摘要：通過(guò)對(duì)湖北武漢某豬場(chǎng)一起急性死亡豬進(jìn)行臨床診斷和病原分離鑒定，確定是由豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌混合感染引起，分離菌株呈典型革蘭氏陽(yáng)性鏈狀球菌和革蘭氏陰性小桿菌，生化鑒定符合豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌的生化特點(diǎn)，分離的豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌對(duì)頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟敏感，這幾種藥物對(duì)發(fā)病豬有很好的治療效果。

關(guān)鍵詞：豬;鏈球菌;傳染性胸膜肺炎放線桿菌;診斷

中圖分類號(hào)：S858.28? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1007-273X（2020）11-0005-02

豬鏈球菌和豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌是嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的兩種細(xì)菌病，常造成生豬的急性死亡，給養(yǎng)豬場(chǎng)（戶）造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。湖北武漢某豬場(chǎng)發(fā)生一起育肥豬急性死亡病例，發(fā)病豬體重40 kg左右，突然死亡，鼻、口有血性泡沫樣分泌物流出，后肢關(guān)節(jié)腫脹。病理解剖可見(jiàn)病豬胸腔有大量滲出物，肺和胸壁出現(xiàn)粘連現(xiàn)象，關(guān)節(jié)腔有化膿性滲出物。經(jīng)臨床診斷、病理解剖、病原分離鑒定，確定為豬鏈球菌（SS）和傳染性胸膜肺炎放線桿菌（APP）混合感染引起。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 培養(yǎng)基? 胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）和胰蛋白胨大豆肉湯（TSB），按產(chǎn)品使用說(shuō)明方法配制滅菌后加入5%的小牛血清。

1.1.2? 藥敏紙片? 頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、磺胺異惡唑等藥敏紙片為杭州濱和微生物試劑有限公司生產(chǎn)，氟苯尼考藥敏紙片為Oxoid limited公司生產(chǎn)，按藥敏紙片生產(chǎn)公司提供的標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。

1.2? 方法

1.2.1? 病料接種及病原分離? 分別采集發(fā)病豬的胸腔積液和關(guān)節(jié)膿性分泌物接種5%小牛血清的TSA平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，挑選帶藍(lán)光的單個(gè)菌落再接種5%小牛血清的TSA平板，37 ℃培養(yǎng)24 h后，挑選單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色并觀察細(xì)菌形態(tài)。

1.2.2? 分離菌株的PCR鑒定? 分別按文獻(xiàn)[1，2]設(shè)計(jì)豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引物（APP U1-1 ATACGGTTAATGGCGGTAATGG，APP U1-2 ACCTGAGTGCTCACCAACG，擴(kuò)增大小為345 bp）和豬鏈球菌引物（gdh-1 AAGTTCCTCGGTTTTGAGCA，gdh-2GCAG CGTATTCTGTCAAACG，擴(kuò)增大小為566 bp），并進(jìn)行PCR鑒定，電泳并觀察結(jié)果

1.2.3? 分離菌株生化鑒定? 將PCR擴(kuò)增呈陽(yáng)性菌株接種改良TSB培養(yǎng)基，37 ℃振搖培養(yǎng)20～24 h，分別接種糖發(fā)酵和其他生化試驗(yàn)培養(yǎng)基小管，每管0.2 mL，37 ℃培養(yǎng)，觀察結(jié)果。

1.2.4? 分離菌株的藥敏試驗(yàn)? 無(wú)菌挑取鏈球菌菌落， 反復(fù)均勻地涂布于5%小牛血清TSA平板上，然后將上述藥敏紙片等距離（≥2 cm）壓放在培養(yǎng)基表面。置37 ℃培養(yǎng)18～24 h取出，觀察抑菌圈的有無(wú)或直徑大小，按藥敏紙片生產(chǎn)公司提供的標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 細(xì)菌形態(tài)觀察

分離菌株在含5%小牛血清的TSA平板上形成圓形、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色透明的菌落。挑選單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，可見(jiàn)革蘭氏陰性的小桿菌和革蘭氏陽(yáng)性的呈鏈狀的球菌（圖1、圖2）。

2.2? 分離菌株的PCR鑒定結(jié)果

用豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引物和豬鏈球菌引物進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果均擴(kuò)增出條帶，且與設(shè)計(jì)大小相符（圖3、圖4）。

2.3 分離菌株生化鑒定結(jié)果

豬鏈球菌引物PCR鑒定陽(yáng)性菌株的乳糖、棉子糖、菊糖和七葉苷為陽(yáng)性反應(yīng);甘露糖、甘露醇、阿拉伯糖、甘油、山梨糖和V.P試驗(yàn)等為陰性反應(yīng)，與豬鏈球菌生化特性一致。豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引物PCR鑒定陽(yáng)性菌株的葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、尿素等為陽(yáng)性反應(yīng);M.R-V.P、鼠李糖、山梨醇、靛基質(zhì)試驗(yàn)等為陰性反應(yīng)，與傳染性胸膜肺炎放線桿菌的生化特性一致。

2.4? 分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

將分離純化的菌株按常規(guī)方法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，分離的豬鏈球菌對(duì)頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、阿莫西林、氨芐西林、環(huán)丙沙星高度敏感，對(duì)林可霉素、依諾沙星、洛美沙星、四環(huán)素、阿米卡星、慶大霉素和磺胺異惡唑耐藥;傳染性胸膜肺炎放線桿菌對(duì)頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、阿米卡星和慶大霉素敏感，對(duì)氨芐西林、林可霉素、環(huán)丙沙星、依諾沙星、卡那霉素、四環(huán)素和磺胺異惡唑耐藥（表1）。

3? 結(jié)果與討論

（1）武漢市某豬場(chǎng)發(fā)生生豬突然死亡情況，通過(guò)對(duì)發(fā)病豬場(chǎng)情況進(jìn)行調(diào)查，了解發(fā)病豬的臨床特點(diǎn)，進(jìn)行病理解剖、PCR擴(kuò)增及生化特性鑒定，綜合診斷是由豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌和豬鏈球菌混合感染引起的急性死亡。藥敏試驗(yàn)證實(shí)，分離的豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌對(duì)頭孢呋辛、頭孢曲松和頭孢噻肟等高度敏感，這些藥物可用于發(fā)病豬的緊急治療。

（2）豬鏈球菌病是一種人獸共患傳染病[3]，是由豬鏈球菌感染引起，該菌不但能引起豬的急性敗血癥、 腦膜炎、關(guān)節(jié)炎甚至死亡，同時(shí)也可導(dǎo)致養(yǎng)豬從業(yè)人員感染和死亡。該病一年四季均可發(fā)生，呈多點(diǎn)散發(fā)和突然暴發(fā)，也可呈地方性流行。在規(guī)模化豬場(chǎng)，豬鏈球菌病已成為一種常見(jiàn)病和多發(fā)病，經(jīng)常成為一些病毒性疾病的繼發(fā)病或與一些細(xì)菌性疾病混合感染。豬傳染性胸膜肺炎的主要病原菌是胸膜肺炎放線桿菌，該病以飛沫和接觸性傳播為主， 主要臨床特征有急性出血性肺炎和亞急性慢性壞死性肺炎[4]。 隨著集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，國(guó)家及地區(qū)間引種頻繁，該病發(fā)病率及死亡率大大高于以前。我國(guó)自1987年首次發(fā)現(xiàn)該病，現(xiàn)該病已經(jīng)成為育肥豬和種豬死亡的主要原因之一，血清型也越來(lái)越復(fù)雜，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

（3）針對(duì)豬鏈球菌病和豬傳染性胸膜肺炎的防控可采用疫苗免疫預(yù)防和藥物治療[5][6]。豬鏈球菌多價(jià)滅活疫苗，豬群免疫后間隔15～20 d進(jìn)行第2次免疫后可以產(chǎn)生較好的效果，免疫期可達(dá)半年。豬傳染性胸膜肺炎可采用豬傳染性胸膜肺炎多價(jià)滅活疫苗進(jìn)行免疫，可起到一定的保護(hù)效果，但是因APP血清型眾多及地方流行型有別，不同血清型之間交叉保護(hù)效果有限，導(dǎo)致免疫效果不理想。對(duì)發(fā)病豬場(chǎng)可以采用抗生素進(jìn)行緊急治療，但是由于豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌易產(chǎn)生較強(qiáng)的耐藥性，而且因?yàn)椴煌i場(chǎng)用藥情況差異，其耐藥性也存在差異，因此在使用抗生素治療之前要做藥敏試驗(yàn)，篩選對(duì)這兩種細(xì)菌敏感的藥物進(jìn)行治療，可以取得良好的治療效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳? 凡.胸膜肺炎放線桿菌血清學(xué)分型及基因分型的研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[2] 王松華.豬源鏈球菌的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究[D].河南洛陽(yáng)：河南科技大學(xué)，2017.

[3] 羅滿林.動(dòng)物傳染病學(xué)[M].北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2019.

[4] 朱秀高，李艷青.豬胸膜肺炎放線桿菌感染和血清型分布[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，38（10）：111-113.

[5] 趙? 謙.豬鏈球菌病-副豬嗜血桿菌病二聯(lián)亞單位疫苗的研制[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2019.

[6] 張? 飛，曹三杰，文心田等，豬傳染性胸膜肺炎疫苗的研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，35（11）：1880-1886.