丁旭萍，張丹紅，陳 影*

0 引言

近年來(lái)，隨著腫瘤精準(zhǔn)醫(yī)療的深入發(fā)展，對(duì)于腫瘤生物學(xué)特性和基因的深入理解越來(lái)越受到眾多學(xué)者的高度重視，成為分子靶向藥物和放化療增敏劑開發(fā)的“敲門磚”。其中miRNAs在腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、化療耐藥等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[1]。肺鱗癌(Squamous cell lung cancer，SQCLC)是非小細(xì)胞肺癌中的常見類型，由于早期癥狀不典型，很多患者確診時(shí)已進(jìn)展至中晚期，因此化療選擇必不可少[2]，但是80%以上的患者會(huì)出現(xiàn)繼發(fā)性耐藥，從而導(dǎo)致治療失敗或預(yù)后不良[3]。紫杉醇是肺鱗癌患者最重要的化療藥物之一，通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)微管蛋白聚合并抑制其解聚，從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，抑制有絲分裂，達(dá)到促使腫瘤細(xì)胞凋亡的目的[4]。驅(qū)動(dòng)蛋白Kinesin家族成員3B(kinesin family member 3B，KIF3B)是定位于腫瘤細(xì)胞中心紡錘體、調(diào)控后期紡錘體運(yùn)動(dòng)和胞質(zhì)分裂的關(guān)鍵分子之一[5]。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，KIF3B可能是miR-127的靶基因，因此本研究旨在證實(shí)miR-127和KIF3B在肺鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)變化和相關(guān)性，并分析上調(diào)miR-127表達(dá)對(duì)肺鱗癌細(xì)胞紫杉醇敏感性的影響及可能的作用機(jī)制，從而為提高肺鱗癌患者對(duì)紫杉醇的臨床獲益提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料 人肺鱗癌細(xì)胞系NCI-H520、NCI-H226以及正常永生化肺上皮細(xì)胞BEAS-2B購(gòu)自美國(guó)菌種保藏中心。人肺鱗癌細(xì)胞系SK-MES-1購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。所有細(xì)胞凍存在本實(shí)驗(yàn)室的液氮中，復(fù)蘇后接種于DMEM完全培養(yǎng)基(90%DMEM培養(yǎng)液+10%胎牛血清+100U/mL青-鏈雙抗)中，置于37 ℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。紫杉醇(Paclitaxel，PTX)購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司，貨號(hào)：#9807，純度>99.5%(HPLC)，保存于-20 ℃。用前將1 mg PTX溶于1.15 ml二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)中，配制成1 mmol/L PTX儲(chǔ)備液，置于-20 ℃條件下保存。

杜氏改良Eagle培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified eagle medium，DMEM)和Opti-MEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司；胎牛血清、Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、TaqMan?MicroRNA Assays、SYBR Green PCR Master Mix試劑盒購(gòu)自日本TaKaRa公司；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑和噻唑藍(lán)(MTT)試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；Annexin V-FITC/PI_雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京Solarbio公司；miR-127模擬物(mimics)及其陰性對(duì)照(miR-NC)購(gòu)自上海生工生物工程有限公司；pcDNA3.1購(gòu)自上海慕遠(yuǎn)公司；KIF3B兔源多克隆抗體和HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各細(xì)胞中miR-127和KIF3B mRNA表達(dá) 采用Trizol法提取1×108個(gè)細(xì)胞總RNA，Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，將RNA樣本溶解分裝后，-80 ℃保存?zhèn)溆?。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成cDNA。并將逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以2-ΔΔCt表示目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量。引物序列見表1。

表1 引物序列匯總表

1.2.2 人肺鱗癌PTX耐藥細(xì)胞株SK-MES-1/PTX的建立 收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的SK-MES-1細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/ml，采用梯度濃度遞增法建立SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞株。首先加入0.1 nmol/L誘導(dǎo)劑量PTX，培養(yǎng)2～3周后，依次遞增PTX作用終濃度：0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 nmol/L，每個(gè)梯度濃度培養(yǎng)2～3周。經(jīng)過(guò)6個(gè)月的誘導(dǎo)期，獲得可在20 nmol/L PTX濃度下穩(wěn)定生長(zhǎng)的耐藥細(xì)胞株SK-MES-1/PTX。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和分組 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SK-MES-1/PTX細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度1×105/ml，提前1 d在備行轉(zhuǎn)染的6孔板上接種1 ml，常規(guī)培養(yǎng)，24 h后更換為Opti-MEM培養(yǎng)基。配制轉(zhuǎn)染試劑-DNA質(zhì)粒復(fù)合物(取3 μl稀釋后的LipofectamineTM2 000試劑加入至已稀釋好的100 μl DNA質(zhì)粒中，混勻后，室溫孵育20 min)。將轉(zhuǎn)染試劑-DNA質(zhì)粒復(fù)合物加入至細(xì)胞中，完全覆蓋細(xì)胞，分別介導(dǎo)轉(zhuǎn)染miR-127 mimics、pcDNA-KIF3B質(zhì)粒或空質(zhì)粒(miR-NC)。37 ℃轉(zhuǎn)染48 h，取出觀察細(xì)胞形態(tài)。并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞中miR-127和KIF3B表達(dá)量。根據(jù)轉(zhuǎn)染情況，將SK-MES-1/PTX細(xì)胞分為空白(對(duì)照)組、陰性(對(duì)照)組、miR-127 mimics組和miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B組。

1.2.4 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) 通過(guò)YearthBio構(gòu)建KIF3B-3′UTR野生型序列，并插入pGL3熒光素酶載體中構(gòu)建KIF3B-3′UTR-WT質(zhì)粒，另采用Easy Mutagenesis System 構(gòu)建KIF3B-3′UTR突變序列，插入pGL3熒光素酶載體中構(gòu)建KIF3B-3′UTR-MUT質(zhì)粒。將表達(dá)載體pcDNA-EGFP-pre-miR-127或空質(zhì)粒分別與KIF3B-3′UTR-WT質(zhì)?；騅IF3B-3′UTR-MUT質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至SK-MES-1/PTX細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h后，采用Promega GloMaxTM20/20 發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)熒光素酶活性。

1.2.5 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SK-MES-1細(xì)胞或SK-MES-1/PTX細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度1×104/ml，按100 μl/孔單層接種至96孔板中，24 h貼壁后更換為含藥培養(yǎng)基。SK-MES-1細(xì)胞培養(yǎng)板中PTX終濃度分別為0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 nmol/L；SK-MES-1/PTX細(xì)胞培養(yǎng)板中PTX終濃度分別為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1 000.0、2 000.0 nmol/L，每組設(shè)置8個(gè)復(fù)孔。作用48 h后，采用MTT法檢測(cè)吸收波長(zhǎng)為490 nm處的吸光光度值(A值)，根據(jù)公式A計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率(%)并繪制劑量-效應(yīng)曲線。計(jì)算細(xì)胞對(duì)PTX的半數(shù)抑制濃度(50% inhibition concentration，IC50)。根據(jù)公式B計(jì)算耐藥指數(shù)。

公式A：細(xì)胞增殖抑制率(%)=[1-(A實(shí)驗(yàn)組-A空白組)]/A空白組×100%

公式B：細(xì)胞耐藥指數(shù)(RI)=SK-MES-1/PTX細(xì)胞IC50/SK-MES-1細(xì)胞IC50

1.2.6 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡 將各組SK-MES-1/PTX細(xì)胞經(jīng)100 nmol/L PTX處理48 h后，收集各組細(xì)胞約1×107/ml，采用Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒進(jìn)行染色，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.7 蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)KIF3B蛋白表達(dá)量 收集生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SK-MES-1細(xì)胞或SK-MES-1/PTX細(xì)胞，約1×107個(gè)，加入RIPA細(xì)胞裂解液冰浴裂解，提取細(xì)胞總蛋白；Baradford法檢測(cè)蛋白濃度。取2 μg蛋白樣品變性后進(jìn)行10%SDS-PAGE凝膠電泳；聚偏二氟乙烯轉(zhuǎn)膜；5%脫脂奶粉封閉1 h；一抗(KIF3B抗體1∶500稀釋，一抗孵育完后需回收)孵育過(guò)夜；即用型二抗孵育1 h；ECL顯影；用成像系統(tǒng)掃描靶條帶的灰度值，并用內(nèi)參GAPDH校正誤差。

2 結(jié)果

2.1 人肺鱗癌細(xì)胞系NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1和人正常永生化肺上皮細(xì)胞BEAS-2B中miR-127和KIF3B蛋白的表達(dá)差異 如圖1所示，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和Western blot法檢測(cè)，與BEAS-2B細(xì)胞相比，NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1細(xì)胞中miR-127表達(dá)量降低(圖1A)，KIF3B蛋白表達(dá)量升高(圖1B、圖1C)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 人肺鱗癌細(xì)胞系NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1和人正常永生化肺上皮細(xì)胞BEAS-2B中miR-127(A)和KIF3B蛋白(B&C)的表達(dá)差異

2.2 SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞株的建立及驗(yàn)證 經(jīng)過(guò)6個(gè)月的誘導(dǎo)期，成功建立可在20 nmol/L PTX濃度下穩(wěn)定生長(zhǎng)的耐藥細(xì)胞株SK-MES-1/PTX。如圖2所示，經(jīng)MTT法檢測(cè)，隨著PTX作用濃度增加，對(duì)SK-MES-1細(xì)胞和SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的抑制率逐漸增加。相同PTX濃度條件下，PTX對(duì)SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的抑制率低于SK-MES-1細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTX抑制SK-MES-1細(xì)胞和SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的IC50分別為(19.02±1.13)nmol/L和(180.65±4.85)nmol/L。SK-MES-1/PTX細(xì)胞對(duì)PTX的耐藥指數(shù)為(9.50±0.64)。

圖2 不同劑量對(duì)SK-MES-1細(xì)胞和SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的抑制率(n=8)注：與相同濃度條件下SK-MES-1細(xì)胞增殖抑制率比較，*P<0.05

2.3 SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞中miR-127和KIF3B蛋白表達(dá) 如圖3所示，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和Western blot法檢測(cè)，與SK-MES-1細(xì)胞相比，SK-MES-1/PTX細(xì)胞中miR-127表達(dá)量降低(圖3A)，KIF3B蛋白表達(dá)量升高(圖3B、圖3C)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖3 SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞和親本細(xì)胞SK-MES-1中miR-127(A)和KIF3B蛋白(B&C)的表達(dá)差異

2.4 雙熒光素酶基因報(bào)告分析 根據(jù)TargetScan在線數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)，KIF3B可能是miR-127的下游靶基因。如圖4所示，將KIF3B-3′-UTR-WT質(zhì)粒和miR-127 mimics共轉(zhuǎn)染之后，熒光酶活性減弱，與KIF3B-3′-UTR-WT質(zhì)粒和NC-mimics共轉(zhuǎn)染組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而將KIF3B-3′-UTR-MUT質(zhì)粒和miR-127 mimics共轉(zhuǎn)染之后，熒光酶活性幾乎無(wú)變化。

圖4 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)miR-127和KIF3B基因的靶向調(diào)控關(guān)系注：與miR-NC組相比，*P<0.05

2.5 SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果驗(yàn)證 如圖5所示，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)，與空白組和陰性組相比，miR-127 mimics組SK-MES-1/PTX細(xì)胞中miR-127表達(dá)量升高(圖5A)，而miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B組KIF3B mRNA表達(dá)量亦升高(圖5B)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖5 各組SK-MES-1/PTX細(xì)胞miR-127(A)和KIF3B mRNA(B)相對(duì)表達(dá)量

2.6 各組SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞對(duì)PTX的敏感性

2.6.1 MTT法檢測(cè)PTX對(duì)各組細(xì)胞增殖抑制情況 如圖6所示，經(jīng)MTT法檢測(cè)，隨著PTX作用濃度增加，對(duì)各組SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的抑制率逐漸增加。相同PTX濃度條件下，PTX對(duì)miR-127 mimics組SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的抑制率最高，而對(duì)miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B組細(xì)胞增殖的抑制率最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTX抑制miR-127 mimics組和miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B組SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的IC50分別為(115.35±10.94)nmol/L和(220.47±15.86)nmol/L，對(duì)PTX的耐藥指數(shù)分別為(6.06±0.58)和(11.59±1.28)。

圖6 不同劑量對(duì)各組SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的抑制率(n=8)

2.6.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PTX對(duì)各組細(xì)胞凋亡的影響 如圖7所示，100 nmol/L PTX作用于空白組、陰性組、miR-127 mimics組和miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B組SK-MES-1/PTX細(xì)胞48 h后，細(xì)胞凋亡率分別為(14.50%±2.33%)、(16.12%±3.24%)、(33.69%±5.48%)、(15.72%±2.67%)，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，miR-127 mimics組SK-MES-1/PTX細(xì)胞凋亡率較空白組增加，而miR-127 mimics+pcDNA-KIF3B組SK-MES-1/PTX細(xì)胞凋亡率較miR-127 mimics組降低。

圖7 經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PTX對(duì)各組SK-MES-1/PTX細(xì)胞凋亡的影響

3 討論

肺鱗癌耐藥表型的形成是一個(gè)涉及多因素、多步驟、多階段的復(fù)雜過(guò)程，包括關(guān)鍵基因發(fā)生遺傳學(xué)或表觀遺傳學(xué)改變、相關(guān)信號(hào)通路的激活、腫瘤細(xì)胞損傷后自我修復(fù)能力增強(qiáng)等[6]，miRNAs在各個(gè)環(huán)節(jié)的上游都發(fā)揮著關(guān)鍵作用。因此，眾多miRNAs不僅是預(yù)測(cè)肺癌化療藥物敏感性的潛力指標(biāo)，而且miRNAs類似物或抑制劑還有望成為臨床提高化療藥物敏感性的精準(zhǔn)醫(yī)療手段之一。

人類miR-127位于染色體14q32.31，該區(qū)域?qū)儆贒LK/GTL2的印跡區(qū)域，在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)量下調(diào)，包括非小細(xì)胞肺癌[7]、胃癌[8]、乳腺癌[9]等。因此，我們推測(cè)miR-127在部分組織癌變過(guò)程中可能發(fā)揮著抑癌基因的活性。在本研究中，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)也證實(shí)，人肺鱗癌細(xì)胞系NCI-H520、NCI-H226、SK-MES-1中miR-127的表達(dá)量低于人正常永生化肺上皮細(xì)胞BEAS-2B，尤其以SK-MES-1細(xì)胞中miR-127表達(dá)量最低。說(shuō)明miR-127在肺鱗癌細(xì)胞癌變過(guò)程中可能也屬于功能性基因。這與李建波等[10]的研究結(jié)論基本一致。李建波等[10]發(fā)現(xiàn)，miR-127在肺癌組織中的表達(dá)量較癌旁正常組織降低，并且隨著病理分期惡性程度的增高，降低更明顯；從而推斷miR-127對(duì)肺癌的增殖、轉(zhuǎn)移均有重要影響，有望成為肺癌早期診療的重要靶點(diǎn)。此外，阮鵬等[11]發(fā)現(xiàn)，化療抵抗的食管癌患者血清中miR-127水平顯著高于化療敏感患者，并通過(guò)多因素Logistic回歸分析，證實(shí)血清miR-127水平的升高可能是預(yù)測(cè)鼻咽癌患者化療抵抗的重要危險(xiǎn)因素。基于上述研究事實(shí)，推測(cè)miR-127在腫瘤細(xì)胞化療耐藥過(guò)程中可能也發(fā)揮重要作用。

為了進(jìn)一步證實(shí)該推斷的可靠性，我們選擇SK-MES-1細(xì)胞通過(guò)濃度梯度遞增法構(gòu)建PTX耐藥細(xì)胞株。6個(gè)月后，最終獲得可在20 nmol/L PTX濃度下穩(wěn)定生長(zhǎng)的耐藥細(xì)胞株SK-MES-1/PTX，并置于本院細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的液氮罐中長(zhǎng)期保存。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)，SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞株中miR-127表達(dá)量較SK-MES-1細(xì)胞進(jìn)一步降低，提示miR-127可能與肺鱗癌細(xì)胞化療耐藥的發(fā)生有一定關(guān)聯(lián)。因此，我們通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)將miR-127 mimics轉(zhuǎn)染至SK-MES-1/PTX細(xì)胞中，上調(diào)miR-127表達(dá)，結(jié)果顯示，PTX對(duì)miR-127 mimics組SK-MES-1/PTX細(xì)胞增殖的抑制率和凋亡率均顯著升高，說(shuō)明miR-127表達(dá)量下調(diào)可能是肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1對(duì)紫杉醇作用產(chǎn)生抗性的重要原因之一。

除此以外，我們通過(guò)TargetScan在線生物信息學(xué)軟件檢索發(fā)現(xiàn)，miR-127和KIF3B基因存在靶向互補(bǔ)序列，并通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因分析，miR-127對(duì)KIF3B有一定的靶向調(diào)控作用。而且通過(guò)Western blot法檢測(cè)也證實(shí)，與SK-MES-1細(xì)胞相比，SK-MES-1/PTX細(xì)胞中miR-127表達(dá)量降低，KIF3B蛋白表達(dá)量上調(diào)。通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)，上調(diào)miR-127 mimics組SK-MES-1/PTX細(xì)胞中KIF3B基因表達(dá)后，其對(duì)PTX的敏感性受到一定程度的抑制，說(shuō)明miR-127可能通過(guò)抑制KIF3B基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程，發(fā)揮抑癌基因的活性。

KIF3B驅(qū)動(dòng)蛋白是一類能夠利用本身的自由能和ATP水解釋放的化學(xué)能等向微管發(fā)生定向運(yùn)動(dòng)的具有保守馬達(dá)結(jié)構(gòu)的蛋白分子，一方面參與細(xì)胞組分的運(yùn)輸，另一方面與染色體結(jié)構(gòu)和有絲分裂過(guò)程中紡錘體的運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)。早在本世紀(jì)初，趙健等[12]發(fā)現(xiàn)，驅(qū)動(dòng)蛋白R(shí)bkinesin-6在人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的有絲分裂末期/胞質(zhì)分裂最后階段發(fā)揮著關(guān)鍵作用，沉默Rbkinesin-6基因可以抑制A549細(xì)胞的增殖活性。Gan等[13]也證實(shí)，驅(qū)動(dòng)蛋白KIF2C在非小細(xì)胞肺癌組織中呈高表達(dá)，且與患者高T分期、低-未分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后不良密切相關(guān)，而敲除KIF2C基因表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力則顯著降低，而且通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因顯示，miR-325對(duì)KIF2C可能具有一定的靶向調(diào)控作用。因此，驅(qū)動(dòng)蛋白作為腫瘤治療靶點(diǎn)早已成為公認(rèn)的事實(shí)，近幾年，以驅(qū)動(dòng)蛋白為靶點(diǎn)的抗癌藥物研究也取得了長(zhǎng)足進(jìn)展[14]。但是多數(shù)研究只是針對(duì)驅(qū)動(dòng)蛋白在肺癌細(xì)胞增殖、凋亡、異常有絲分裂、侵襲轉(zhuǎn)移等過(guò)程中的作用[15]，往往忽視其對(duì)腫瘤細(xì)胞化療耐藥的影響。本研究發(fā)現(xiàn)，KIF3B驅(qū)動(dòng)蛋白分子在肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1對(duì)PTX耐藥中也屬于功能性因子，從而為重新認(rèn)識(shí)驅(qū)動(dòng)蛋白家族的作用提供了新的思路。

綜上所述，對(duì)PTX耐藥的肺鱗癌細(xì)胞中miR-127表達(dá)量降低，KIF3B蛋白表達(dá)量升高，并且兩者之間存在一定的靶向調(diào)控關(guān)系。上調(diào)miR-127表達(dá)可增加SK-MES-1/PTX耐藥細(xì)胞對(duì)PTX的敏感性，其作用機(jī)制可能與抑制驅(qū)動(dòng)蛋白KIF3B分子表達(dá)有關(guān)。