□ 倪 陽(yáng) 秦皇島市食品藥品檢驗(yàn)中心

數(shù)據(jù)顯示，全球每年大約有超過(guò)50萬(wàn)人死于食物中毒，約6 000萬(wàn)人出現(xiàn)腹瀉。微生物食物中毒的發(fā)生率逐年攀升。因此，進(jìn)一步完善微生物檢測(cè)手段，提升檢測(cè)效率與準(zhǔn)確性是當(dāng)前的主要發(fā)展方向。傳統(tǒng)檢測(cè)方法中，需要對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分離、培養(yǎng)與鑒定，整個(gè)過(guò)程耗費(fèi)的時(shí)間比較長(zhǎng)，準(zhǔn)確性也不高，而實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)因具備高效、快速，且準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于食品致病菌檢測(cè)中。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)過(guò)程中加入熒光基團(tuán)，持續(xù)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化情況，并將獲得的基因初始量和已知量進(jìn)行對(duì)比，從而完成實(shí)時(shí)熒光定量。與傳統(tǒng)PCR相比，有了質(zhì)的飛躍，從定性到定量，靈敏度、速度以及準(zhǔn)確性方面都顯著提升。

1 金黃色葡萄球菌的檢測(cè)

金黃色葡萄球菌是導(dǎo)致食物中毒的一種致病菌，人畜都可能會(huì)被感染，感染癥狀以局部感染、腦膜炎、肺炎等化膿性感染為主，嚴(yán)重危害人們的身體健康。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。根據(jù)金黃色葡萄球菌基因序列設(shè)計(jì)引物與探針，采用基因重組技術(shù)建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法以及金黃色葡萄球菌重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品即可進(jìn)行檢測(cè)。李丹丹[1]建立了快速檢測(cè)黃色葡萄球菌的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，并對(duì)樣品進(jìn)行了檢測(cè)，其陽(yáng)性率和國(guó)標(biāo)法基本一致，具有很高的特異性與靈敏度。隨著技術(shù)的快速更新與完善，人們用于檢測(cè)的手段和方法也會(huì)越來(lái)越高效化。

2 沙門菌的檢測(cè)

沙門菌是一種常見的致病菌，其主要是通過(guò)食品或污染水等渠道感染人類與動(dòng)物，會(huì)造成胃腸炎、敗血癥、傷寒等相關(guān)疾病。傳統(tǒng)檢測(cè)方法通常需要4—7 d的時(shí)間，需要耗費(fèi)大量的時(shí)間與精力。通過(guò)熒光定量PCR方法擴(kuò)增沙門菌的基因片段，可高效準(zhǔn)確的對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，其整體特異性是非常強(qiáng)的。曹冬梅[2]根據(jù)傷寒沙門菌的基因序列設(shè)計(jì)引物與探針，對(duì)傷寒沙門菌進(jìn)行了全面的檢測(cè)與分析，且有效鑒定出了絕大多數(shù)的傷寒沙門菌，所檢測(cè)的結(jié)果與傳統(tǒng)方法檢測(cè)結(jié)果一致。相關(guān)學(xué)者通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR快速檢測(cè)沙門菌，所需時(shí)間較短，檢測(cè)速度大幅度提升，同時(shí)檢測(cè)精準(zhǔn)性與質(zhì)量也有了明顯的改善[3]。

3 志賀菌的檢測(cè)

志賀菌主要有痢疾志賀菌、福氏志賀菌等血清群，一旦感染人類，將會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌性痢疾，嚴(yán)重危害人類的健康安全。李丹丹以志賀菌基因序列為目的基因設(shè)計(jì)引物探針，并建立了快速檢測(cè)方法，并對(duì)樣品進(jìn)行了全面檢測(cè)，得出的結(jié)果和國(guó)標(biāo)法一致[4]。

4 單核細(xì)胞增生李斯特菌

單核細(xì)胞增生李斯特菌屬于一種短小桿菌，可在水、土壤以及糞便當(dāng)中檢測(cè)出，分布極為廣泛，會(huì)對(duì)奶制品造成嚴(yán)重的污染。主要通過(guò)口、糞進(jìn)行傳播，會(huì)引起腦膜炎、菌血癥等相關(guān)疾病，嚴(yán)重危害人畜健康。相關(guān)學(xué)者[5]等以單核細(xì)胞增生李斯特菌基因?yàn)榘谢?，建立了?shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，并對(duì)150份樣品進(jìn)行了檢測(cè)，并檢測(cè)出3份陽(yáng)性樣本，隨后建立了可快速高效檢測(cè)豬肉中該細(xì)菌的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，且準(zhǔn)確性與速度顯著提升，可應(yīng)用于大量樣品的同時(shí)檢測(cè)。

5 大腸埃希菌

大腸埃希菌屬于腸道正常菌群，但也存在引起腹瀉的菌株，會(huì)導(dǎo)致人體出現(xiàn)菌血癥、肺炎，還會(huì)引起泌尿系統(tǒng)感染，實(shí)際危害性非常大。相關(guān)學(xué)者等建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)食品中的菌株進(jìn)行快速檢測(cè)，該方法更加快捷、靈敏，可應(yīng)用于大量食品的同時(shí)檢測(cè)[6]。

6 結(jié)語(yǔ)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)具備高靈敏度、速度快以及特異性等優(yōu)勢(shì)，在食物中毒與疾病爆發(fā)事件的檢測(cè)中有著顯著的優(yōu)勢(shì)與作用，被廣泛應(yīng)用于食品微生物檢測(cè)中。隨著各項(xiàng)技術(shù)的快速發(fā)展，在未來(lái)其應(yīng)用范圍也會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大，效率也會(huì)不斷提升，為食品安全檢測(cè)工作的高效有序開展奠定良好的基礎(chǔ)。