□ 舒蕊華 郭芳芳 葛曉曉 彭雪琦 王明明 江蘇省理化測(cè)試中心

氟蟲腈是一種廣譜殺蟲劑，對(duì)多種害蟲具有防治作用，對(duì)作物無(wú)害。但是，大量研究表明其有神經(jīng)毒性作用，長(zhǎng)期攝入可能導(dǎo)致肝腎損傷。故，它被世界衛(wèi)生組織列為“對(duì)人類有中度毒性”的化學(xué)品[1]。

目前氟蟲腈的檢測(cè)主要有氣相、液相、氣質(zhì)、液質(zhì)等方法[2—6]，其中液質(zhì)法因靈敏度高、選擇性強(qiáng)、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)勢(shì)被廣泛應(yīng)用。

現(xiàn)有的文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)多是用一種或幾種前處理方法同時(shí)處理多種不同類型的樣品，但食品樣品基質(zhì)復(fù)雜，這種處理方式針對(duì)性不高，會(huì)造成樣品提取不完全或過(guò)度處理，導(dǎo)致回收率偏低或造成不必要的浪費(fèi)。故本文針對(duì)糧谷類食品建立了簡(jiǎn)單、快速且靈敏度高的檢測(cè)方法，以應(yīng)對(duì)大批量糧谷類食品中氟蟲腈的檢測(cè)，滿足檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際需求。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

乙腈、甲醇、乙酸乙酯、丙酮均為色譜純；無(wú)水硫酸鈉、無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉、PSA、C18均為分析純。Agilent 1260/6470三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀。大米、糙米、小麥粉、大豆與玉米粉均購(gòu)自超市。

1.2 提取與凈化

稱取5.0 g樣品于50 mL離心管中，加水10 mL，渦旋混勻1 min，靜置10 min，待樣品充分溶脹后加20 mL乙腈，渦旋1 min，振蕩提取5 min，加2 g氯化鈉，6 g無(wú)水硫酸鈉，振搖混勻，渦旋1 min，5 000 r/min離心5 min，待凈化。

準(zhǔn)確吸取1 mL上清液于2 mL離心管中，加50 mg C18和150 mg無(wú)水硫酸鎂，渦旋混合30 s，5 000 r/min離心5 min，上清液過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.3 儀器條件

色譜柱：C1850 mm×3.0 mm，2.7 μm；柱溫 40 ℃；進(jìn)樣量 20 μL；流速0.3 mL/min；流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈，梯度洗脫：0～ 1 min，A90%，B10%；1.5～3.1 min，A10%，B90%；3.6～6.0 min，A90%，B10%。

質(zhì)譜條件：ESI源，負(fù)離子掃描，MRM模式。鞘氣流速：9 L/min，鞘氣溫度：300 ℃。目標(biāo)物保留時(shí)間、母離子、子離子、碰撞能量如下，氟蟲腈RT：4.260，434.9/329.8/249.8—125/10；氟蟲腈砜RT：4.355，450.9/414.9/282.0—135—25； 氟 蟲 腈 亞 砜RT：4.316，418.9/382.9/314—135—15；氟甲腈RT：4.221，386.9/350.9/281.8—135—15。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑選擇

取4份樣品，分別加乙腈、甲醇、乙酸乙酯與丙酮提取，在試劑用量一致的情況下，甲醇、乙酸乙酯的回收率不足60%，乙腈和丙酮均在80%以上，因丙酮的毒性較大，故選擇乙腈。

2.2 提取時(shí)間的選擇

取3份樣品，分別振蕩提取5、10、15 min。綜合分析5種樣品的提取效率發(fā)現(xiàn)，與提取5 min相比，提取10 min和15 min并不能顯著提高回收率，故選擇提取時(shí)間為5 min。

2.3 凈化條件選擇

設(shè)置3組凈化方式，分別為50 mg PSA、50 mg C18、150 mg無(wú)水硫酸鎂；50 mg PSA、150 mg無(wú)水硫酸鎂；50 mg C18、150 mg無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行凈化。發(fā)現(xiàn)3組凈化試劑無(wú)顯著差別。因無(wú)水硫酸鎂主要起吸水作用，PSA主要吸附有機(jī)酸、色素等，C18吸附非極性到中等極性物質(zhì)，而糧谷類的主要成分為淀粉、脂肪、蛋白質(zhì)等，故選擇C18和無(wú)水硫酸鎂進(jìn)行凈化。

2.4 質(zhì)譜條件優(yōu)化

在負(fù)離子模式下，選擇SCAN掃描模式，對(duì)鞘氣溫度、流速、輔助氣流速等進(jìn)行優(yōu)化，找到母離子，并使母離子響應(yīng)最強(qiáng)。再進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，確定定量離子和定性離子。最后在MRM模式下對(duì)選擇的離子和電壓等進(jìn)一步優(yōu)化。

根據(jù)氟蟲腈及其代謝物的特性，分別用乙腈—0.1%甲酸水；乙酸銨甲酸溶液—甲醇；甲醇—0.1%甲酸水為流動(dòng)相，對(duì)其分離效果和靈敏度進(jìn)行比較，得出乙腈—0.1%甲酸水均優(yōu)于其他兩組，故選擇其作為流動(dòng)相。

2.5 線性范圍和檢出限

本實(shí)驗(yàn)考察了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)目標(biāo)物的影響，未發(fā)現(xiàn)顯著差別，故采用乙腈稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，配成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

將標(biāo)準(zhǔn)溶液不斷稀釋至標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)響應(yīng)值為3倍信噪比，該濃度即為檢出限濃度。

本方法在10～200 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)R2大于0.99。方法的檢出限為0.002 mg/kg。

2.6 回收率和精密度

取大米等5份陰性樣品，分別添加 5、20、200 μg/kg 3個(gè)加標(biāo)水平，每個(gè)水平測(cè)量3次，計(jì)算回收率和精密度。5種樣品的平均回收率為90%～106%，RSD為1.8%～9.2%。

2.7 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果

對(duì)從市場(chǎng)上購(gòu)買的14份樣品（大米3份，糙米2份，小麥粉5份、大豆2份、玉米粉2份）進(jìn)行檢測(cè)，所有樣品均為陰性。

3 結(jié)論

本研究基于我國(guó)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)氟蟲腈及其代謝物的限量要求和糧谷類食品本身的特性，建立了檢測(cè)糧食中氟蟲腈的高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，方法操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，經(jīng)過(guò)大量樣品檢測(cè)驗(yàn)證，方法穩(wěn)定性好，能夠滿足我國(guó)的限量要求，可以應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室的日常檢測(cè)工作。