朱婷婷 陳景丹 方筱琴 劉 璐 秦 娟 陳 偉 楊震峰 施麗愉

(浙江萬(wàn)里學(xué)院生物與環(huán)境學(xué)院，浙江 寧波 315100)

獼猴桃(ActinidiachinensisPlanch)是獼猴桃科獼猴桃屬常綠藤本果樹(shù)，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有極高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，且肉質(zhì)鮮美，風(fēng)味獨(dú)特，深受人們喜愛(ài)[1]。獼猴桃一般每年9月份成熟，采收時(shí)氣溫較高，且獼猴桃屬于典型的呼吸躍變型果實(shí)，極易變軟腐爛，失去食用價(jià)值。低溫貯藏是獼猴桃采后保鮮的一種重要手段。研究表明，低溫貯藏能有效維持獼猴桃果實(shí)的硬度，延緩腐爛速率，改善果實(shí)著色，減少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，從而延緩果實(shí)的成熟衰老，提高果實(shí)的貯藏品質(zhì)[2]。但有關(guān)獼猴桃果實(shí)低溫貯藏淀粉降解與果實(shí)軟化進(jìn)程之間關(guān)系的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。

果實(shí)成熟過(guò)程中產(chǎn)生大量?jī)?nèi)源乙烯，并參與果實(shí)多糖水解、香味物質(zhì)產(chǎn)生、硬度下降等其他生理生化的調(diào)控。Gwanpua等[3]和馬秋詩(shī)[4]研究發(fā)現(xiàn)，低溫貯藏可抑制獼猴桃果實(shí)乙烯的產(chǎn)生，延緩果實(shí)的成熟軟化。此外，低溫可促進(jìn)葡萄果實(shí)1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxilic, ACC)合成并激活A(yù)CC氧化酶(ACC oxidase, ACO)活性[5]，增強(qiáng)梨果實(shí)ACC合成酶基因表達(dá)，從而促進(jìn)內(nèi)源乙烯的合成[6]。在植物中，ACC合成酶(ACC synthase，ACS)和ACO被認(rèn)為是乙烯合成關(guān)鍵酶，兩者均通過(guò)調(diào)節(jié)ACC活性來(lái)調(diào)控乙烯的生成和釋放。Li等[6]研究發(fā)現(xiàn)，低溫可能改變梨果實(shí)中乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游元件，降低ETR1的表達(dá)；殷學(xué)仁[7]發(fā)現(xiàn)低溫可誘導(dǎo)獼猴桃果實(shí)中大部分乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的表達(dá)。乙烯一旦合成后，通過(guò)乙烯受體(ethylene receptor，ETR)感知，經(jīng)過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(signal transduction pathway)誘導(dǎo)與乙烯反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)，從而發(fā)揮乙烯的生物學(xué)效應(yīng)[8]。通過(guò)對(duì)擬南芥、煙草等模式植物相關(guān)突變體的分離和基因組學(xué)分析，基本確立了植物的乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的線性模型，該模型主要由5個(gè)級(jí)別元件組成，分別為乙烯受體(ETRs)、CTR1(constitutive triple response 1)、EIN2(ethylene ins ensitive 2)、EIN3/EILs(ethylene insensitive 3/EIN3 like)和乙烯響應(yīng)因子(ERFs)[7,9-11]。目前，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道大部分集中于乙烯調(diào)控采后獼猴桃成熟軟化的機(jī)制研究，有關(guān)低溫貯藏對(duì)乙烯調(diào)控成熟軟化相關(guān)機(jī)制的報(bào)道較少。

獼猴桃果實(shí)中含有大量的淀粉。有研究表明，淀粉的快速降解是獼猴桃采后快速軟化的主要原因，且乙烯促進(jìn)淀粉降解使獼猴桃果實(shí)成熟軟化[12-13]。而低溫可有效降低獼猴桃淀粉酶活性，延緩淀粉降解[14]，在馬鈴薯中α-淀粉酶StAmy23、β-淀粉酶StBAM1和StBAM9受低溫影響[15]。據(jù)報(bào)道，淀粉降解涉及多種酶，包括葡聚糖水合雙激酶(glucan water dikinase，GWD)、磷酸化葡聚糖水合雙激酶(phosphoglucan water dikinase，PWD)、雙特異性磷酸酶(dual-specificity phosphate，DSP4，又名starch excess4，SEX4)、LSF1/2 (like SEX four 1/2)、α-淀粉酶(α-amylase，AMY)、β-淀粉酶(β-amylase，BAM)、異淀粉酶(isoamylase，ISA)、極限糊精酶(limit dextrinase，LDA)、葡聚糖磷酸化酶(α-glucanglucan phospholylase，PHS)和歧化酶(disproportionating enzyme，DPE)等[16-17]，目前鮮有文獻(xiàn)報(bào)道采后獼猴桃低溫貯藏影響淀粉降解酶相關(guān)基因的表達(dá)，關(guān)于低溫調(diào)控乙烯介導(dǎo)的淀粉降解相關(guān)機(jī)制的文獻(xiàn)更少。

本研究以紅陽(yáng)獼猴桃果實(shí)為試驗(yàn)材料，研究低溫貯藏對(duì)獼猴桃果實(shí)品質(zhì)的影響，并結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析低溫處理對(duì)果實(shí)采后貯藏期間淀粉降解相關(guān)基因表達(dá)的影響，以期解釋低溫延緩果實(shí)軟化與果肉淀粉降解之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料與處理

供試獼猴桃果實(shí)品種為紅陽(yáng)，采自浙江省寧波市東錢湖種植基地，果實(shí)于花后124 d采收并運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理。將獼猴桃果實(shí)隨機(jī)分成2組，每組60個(gè)，重復(fù)3次。低溫處理(LT)：置于4℃低溫恒溫培養(yǎng)箱中貯藏42 d，貯藏期間每隔7 d取樣1次；對(duì)照(CK)：置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中貯藏12 d，貯藏期間每隔2 d取樣1次。每次隨機(jī)取樣，果肉用液氮速凍，置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 獼猴桃果實(shí)總可溶性固形物、硬度和淀粉含量測(cè)定

參考梁敏華[18]的方法，隨機(jī)取5個(gè)獼猴桃果實(shí)，取位于果實(shí)赤道部位(包含少量外、中果肉和果心)進(jìn)行榨汁，用GMK-701AC便攜式數(shù)字糖度計(jì)(G-WON公司，韓國(guó))測(cè)定其總可溶性固形物(total soluble solids，TSS)含量，重復(fù)測(cè)定3次。獼猴桃果實(shí)硬度和淀粉含量參照陳景丹等[12]的方法測(cè)定。

1.3 獼猴桃果實(shí)乙烯釋放速率測(cè)定

參考陳偉等[19]的方法，隨機(jī)選取5個(gè)獼猴桃果實(shí)置于密閉的容器中，分別置于相應(yīng)貯藏溫度下2 h后抽取氣體1 mL，用島津2014C型氣相色譜儀(島津，日本)測(cè)定乙烯含量，同時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)乙烯氣體作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算果實(shí)的乙烯釋放速率。氣相色譜檢測(cè)條件參考文獻(xiàn)[20]。

1.4 獼猴桃果實(shí)RNA提取及cDNA合成

參考陳景丹等[12]的方法，稱取少量獼猴桃果肉粉末，用植物RNA提取試劑盒(Omega Bio-Tek 公司，美國(guó))提取總RNA。以獼猴桃總RNA為模板，采用SuperRT cDNA 第一鏈合成試劑盒(康為世紀(jì)生物科技有限公司，江蘇)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析

從獼猴桃基因組數(shù)據(jù)庫(kù)下載各基因全長(zhǎng)序列，運(yùn)用Primer 6軟件設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物(表1)，其中AcAMY1、AcAMY3、AcBAM1、AcBAM3、AcGWD、AcPWD、AcISA3、AcLDA1基因引物序列參考文獻(xiàn)[12]。以cDNA為模板，采用SYBR Green熒光染料法以Actin作為內(nèi)參基因[12]，CFX96 Touch用熒光定量PCR儀(Bio-Rad，美國(guó))進(jìn)行測(cè)定，并設(shè)置陰性對(duì)照，每個(gè)樣品進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCt法[21]分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 低溫貯藏對(duì)獼猴桃果實(shí)硬度、TSS含量、乙烯釋放速率和淀粉含量的影響

獼猴桃果實(shí)在常溫貯藏(CK)過(guò)程中硬度呈現(xiàn)前期緩慢下降，貯藏8 d后迅速下降，而低溫貯藏(LT)有效延緩了獼猴桃果實(shí)的快速軟化，未出現(xiàn)快速軟化情況(圖1-A)。常溫貯藏過(guò)程中，獼猴桃果實(shí)中TSS含量呈逐漸升高趨勢(shì)，低溫延緩了TSS的積累(圖1-B)。 常溫貯藏前期，獼猴桃乙烯釋放速率沒(méi)有變化，貯藏8 d后出現(xiàn)乙烯躍變，而低溫貯藏過(guò)程中獼猴桃乙烯釋放速率一直處于較低水平，無(wú)明顯變化(圖1-C)。 此外，獼猴桃果實(shí)乙烯出現(xiàn)躍變時(shí)間也是果實(shí)快速軟化的時(shí)期，低溫(4℃)貯藏可抑制獼猴桃果實(shí)乙烯釋放速率的升高，推遲呼吸躍變高峰的到來(lái)。由圖1-D可知，在獼猴桃采后貯藏過(guò)程中，隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)淀粉含量呈下降趨勢(shì)，與常溫貯藏相比，低溫貯藏有效延緩了獼猴桃淀粉含量的快速下降，表明低溫延緩果實(shí)軟化可能與淀粉降解和乙烯釋放量有關(guān)。

2.2 獼猴桃果實(shí)采后乙烯合成基因表達(dá)分析

由圖2可知，常溫貯藏期間，獼猴桃果實(shí)采后乙烯合成基因AcACS1和AcACO1在貯藏前期未表達(dá)，貯藏8 d后兩基因表達(dá)量開(kāi)始急劇上升，這與常溫貯藏獼猴桃果實(shí)乙烯釋放速率在貯藏8 d后開(kāi)始急劇上升相關(guān)；低溫貯藏期間，AcACS1和AcACO1基因表達(dá)量始終保持在一個(gè)恒定的低水平，且相對(duì)表達(dá)量明顯低于常溫貯藏后期，表明低溫能抑制乙烯合成關(guān)鍵酶基因AcACS1和AcACO1的表達(dá)，這可能與獼猴桃果實(shí)采后低溫貯藏抑制乙烯釋放速率有關(guān)。

表1 qPCR擴(kuò)增引物序列Table 1 Primers sequences used for qPCR and amplicon characteristics

圖1 貯藏期間獼猴桃果實(shí)硬度(A)、總可溶性固形物含量(B)、乙烯釋放速率(C)和淀粉含量(D)的變化Fig.1 Content changes of hardness(A), total soluble solids(B), ethylene production rate(C) and starch content(D) in postharvest kiwifruit during storage

圖2 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcACS1和AcACO1基因的表達(dá)Fig.2 Expressions of AcACS1 and AcACO1 in postharvest kiwifruit during storage

2.3 獼猴桃果實(shí)采后乙烯轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)途徑基因表達(dá)分析

由圖3可知，低溫貯藏采后獼猴桃果實(shí)乙烯轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)途徑AcETRs基因表達(dá)各異。低溫貯藏獼猴桃果實(shí)AcETR1相對(duì)表達(dá)量在整個(gè)貯藏期間變化較小，與常溫貯藏先上升后下降的趨勢(shì)不同。低溫貯藏獼猴桃果實(shí)AcERS1a相對(duì)表達(dá)量先上升后下降再緩慢上升，在貯藏7 d時(shí)其表達(dá)量是常溫貯藏6和8 d的3～4倍，而常溫貯藏下AcERS1a相對(duì)表達(dá)量隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)不斷上升。同時(shí)，與常溫貯藏相比，低溫貯藏抑制了獼猴桃果實(shí)AcETR2和AcERS1b基因的表達(dá)。

圖3 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcETRs和AcERSs基因的表達(dá)Fig.3 Expressions of AcETRs and AcERSs in postharvest kiwifruit during storage

由圖4可知，在低溫貯藏過(guò)程中，獼猴桃果實(shí)中的AcCTR1和AcCTR2相對(duì)表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢(shì)，峰值與常溫貯藏期間的最高表達(dá)量基本接近，而AcEIN2相對(duì)表達(dá)量先上升后基本保持不變，其相對(duì)表達(dá)量高于常溫貯藏，說(shuō)明低溫可以誘導(dǎo)AcEIN2的表達(dá)。

圖4 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcCTRs和AcEIN2基因的表達(dá)Fig.4 Expressions of AcCTRs and AcEIN2 in postharvest kiwifruit during storage

由圖5可知，在貯藏過(guò)程中，獼猴桃果實(shí)中AcEILs的表達(dá)在低溫貯藏7 d時(shí)較初采收時(shí)顯著增強(qiáng)(P<0.05)，其中，AcEIL1、AcEIL2相對(duì)表達(dá)量先上升后緩慢下降，貯藏后期又上升，表明低溫能誘導(dǎo)采后獼猴桃果實(shí)AcEIL1、AcEIL2的表達(dá)，并在整個(gè)貯藏期間維持在較高的表達(dá)水平。與AcEILs類似，獼猴桃果實(shí)中AcERFs也受到低溫誘導(dǎo)，其中，在貯藏前期AcERF7相對(duì)表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢(shì)，貯藏后期其相對(duì)表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定；而AcERF10對(duì)低溫應(yīng)答較強(qiáng)，貯藏7 d時(shí)獼猴桃果實(shí)中AcERF10表達(dá)較貯藏0 d上調(diào)100倍，貯藏28 d時(shí)其相對(duì)表達(dá)量達(dá)到峰值，較貯藏0 d上調(diào)117倍。

圖5 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcEILs和AcERFs基因的表達(dá)Fig.5 Expressions of AcEILs and AcERFs in postharvest kiwifruit during storage

2.4 獼猴桃果實(shí)采后淀粉降解酶基因表達(dá)變化

由圖6可知，整個(gè)貯藏期間，常溫貯藏獼猴桃果實(shí)AcGWD、AcPWD和AcLSF1相對(duì)表達(dá)量均呈快速下降趨勢(shì)；而低溫貯藏下，AcGWD相對(duì)表達(dá)量在貯藏前期呈下降趨勢(shì)，貯藏7 d后開(kāi)始逐漸上升，表明低溫在貯藏后期可誘導(dǎo)AcGWD的表達(dá)，而AcPWD和AcLSF1相對(duì)表達(dá)量在貯藏前期與常溫貯藏時(shí)表現(xiàn)出相似的趨勢(shì)，但貯藏7 d后其表達(dá)水平保持穩(wěn)定，且AcLSF1相對(duì)表達(dá)量高于常溫貯藏。

圖6 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcGWD、AcPWD和AcLSF1基因的表達(dá)Fig.6 Expressions of AcGWD、AcPWD and AcLSF1 in postharvest kiwifruit during storage

由圖7可知，在低溫貯藏期間，獼猴桃果實(shí)AcAMY1相對(duì)表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢(shì)，但總體上AcAMY1相對(duì)表達(dá)量低于常溫貯藏，表明低溫能抑制AcAMY1表達(dá)；低溫貯藏期間AcAMY3相對(duì)表達(dá)量呈逐漸上升趨勢(shì)，且在貯藏后期AcAMY3相對(duì)表達(dá)量高于常溫貯藏；低溫貯藏期間AcBAM1相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯變化，AcBAM3相對(duì)表達(dá)量呈先緩慢上升后保持穩(wěn)定的趨勢(shì)，但總體上兩者的相對(duì)表達(dá)量均低于常溫貯藏，表明低溫能抑制β-淀粉酶基因AcBAM1和AcBAM3的表達(dá)。

圖7 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcAMYs和AcBAMs基因的表達(dá)Fig.7 Expressions of AcAMYs and AcBAMs in postharvest kiwifruit during storage

由圖8可知，整個(gè)貯藏過(guò)程中，常溫貯藏獼猴桃果實(shí)AcISA3相對(duì)表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢(shì)，而低溫貯藏AcISA3相對(duì)表達(dá)量始終保持較低的表達(dá)水平；常溫貯藏AcLDA1相對(duì)表達(dá)量先上升隨后略微上下波動(dòng)，而低溫貯藏AcLDA1相對(duì)表達(dá)量呈先略微下降后再升高再下降的趨勢(shì)，但整個(gè)貯藏期間低溫貯藏的AcLDA1相對(duì)表達(dá)量均低于常溫貯藏，表明低溫能抑制AcISA3和AcLDA1表達(dá)。

圖8 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcISA3和AcLDA1基因的表達(dá)Fig.8 Expressions of AcISA3 and AcLDA1 in postharvest kiwifruit during storage

由圖9可知，常溫貯藏過(guò)程中，獼猴桃果實(shí)中AcDPE1相對(duì)表達(dá)量呈先上升后下降再上升的變化趨勢(shì)；低溫貯藏AcDPE1始終保持較低的表達(dá)水平，且在整個(gè)低溫貯藏期間，AcDPE1相對(duì)表達(dá)量低于常溫貯藏，表明低溫能抑制AcDPE1的表達(dá)。常溫貯藏前期AcDPE2相對(duì)表達(dá)量上升，隨后上下略微波動(dòng)，而低溫貯藏獼猴桃果實(shí)AcDPE2相對(duì)表達(dá)量隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng)，但整個(gè)低溫貯藏前期其相對(duì)表達(dá)量均低于常溫貯藏。常溫貯藏期間，獼猴桃果實(shí)中AcPHS1相對(duì)表達(dá)量呈下降趨勢(shì)，而低溫貯藏期間其呈先略微下降后上升的趨勢(shì)，且在低溫貯藏7 d后AcPHS1相對(duì)表達(dá)量高于常溫貯藏中后期。表明低溫能誘導(dǎo)AcDPE2和AcPHS1的表達(dá)。

圖9 貯藏期間獼猴桃果實(shí)中AcDPEs和AcPHS1基因的表達(dá)Fig.9 Expressions of AcDPEs and AcPHS1 in postharvest kiwifruit during storage

3 討論

獼猴桃采后成熟軟化與淀粉降解、乙烯合成密切相關(guān)，淀粉降解是果實(shí)快速軟化階段的主要原因[12,22]。在香蕉[23]、蘋果[24]、獼猴桃[25]等果實(shí)中，淀粉含量變化受到乙烯釋放速率的影響。乙烯和1-MCP處理能分別促進(jìn)和抑制淀粉酶相關(guān)基因的表達(dá)，從而影響淀粉降解，最終延緩果實(shí)軟化進(jìn)程[11]。本研究結(jié)果表明，采后低溫貯藏能抑制獼猴桃果實(shí)中的乙烯釋放速率，顯著延緩果實(shí)硬度和淀粉含量的下降以及TSS積累速度的上升。推測(cè)低溫可能通過(guò)抑制乙烯釋放量，進(jìn)而延緩淀粉降解，最終延緩果實(shí)成熟軟化。

Wang等[26]研究發(fā)現(xiàn)MdACS3a基因的突變體抑制蘋果果實(shí)成熟過(guò)程中乙烯的合成。在軟溶質(zhì)、硬溶質(zhì)和不溶質(zhì)桃果實(shí)中，低溫通過(guò)抑制PpACO1基因表達(dá)，使乙烯合成量仍保持極低水平，延緩制獼猴桃果實(shí)成熟軟化[27]。表明低溫可通過(guò)抑制獼猴桃果實(shí)中乙烯合成相關(guān)基因AcACO和AcACS的表達(dá)，從而減少內(nèi)源乙烯合成，這與香蕉[28]中的研究結(jié)果相一致。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，硬溶質(zhì)和軟溶質(zhì)桃果實(shí)的PpEIN受低溫誘導(dǎo)表達(dá)，而PpCTR1只在硬溶質(zhì)果實(shí)中受低溫誘導(dǎo)表達(dá)[29]。在海沃德獼猴桃中，EIL1-4均可被低溫處理明顯誘導(dǎo)[30]。本研究結(jié)果表明，在低溫貯藏下，獼猴桃果實(shí)中乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑基因顯示不同的表達(dá)模式，如低溫抑制了AcETR1、AcETR2、AcERS1b基因的表達(dá)；AcERS1a、AcEIL1、AcEIL2、AcCTR1、AcCTR2、AcERF7均先上升再下降后穩(wěn)定表達(dá)；AcEIN2、AcERF10受低溫誘導(dǎo)保持較高的表達(dá)水平，這與殷學(xué)仁[7]的研究結(jié)果相似。綜上所述，乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因在低溫下存在不同的應(yīng)答模式，但與果實(shí)采后成熟軟化無(wú)直接聯(lián)系，更可能是參與逆境應(yīng)答[7]，還需進(jìn)一步研究。因此，低溫抑制果實(shí)后熟軟化的效應(yīng)主要是通過(guò)抑制乙烯合成相關(guān)酶起作用，而不是抑制乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

周晨卉[2]和戚雯燁等[14]研究發(fā)現(xiàn)低溫可有效降低獼猴桃果實(shí)中淀粉酶活性，推遲淀粉酶活性高峰到達(dá)的時(shí)間在一定程度上延緩了淀粉的降解。本試驗(yàn)中，低溫抑制了淀粉酶相關(guān)基因AcAMY1、AcBAM1、AcBAM3、AcISA3、AcLDA1和AcDPE1的表達(dá)。在海沃德獼猴桃中發(fā)現(xiàn)，AdAMY1和AdBAM3.1/3L/9在獼猴桃采后淀粉降解中呈正相關(guān)[31]；陳景丹等[12]研究發(fā)現(xiàn)獼猴桃果實(shí)中AcAMY1、AcAMY3、AcBAM1、AcBAM3和AcDPE1是淀粉降解的關(guān)鍵基因。推測(cè)本研究中低溫主要通過(guò)抑制AcAMY1、AcBAM1、AcBAM3和AcDPE1的表達(dá)，從而延緩淀粉的降解，最終影響獼猴桃果實(shí)采后快速軟化階段的進(jìn)程。此外，有關(guān)蘋果貯藏品質(zhì)的研究表明，除低溫外，乙烯也是調(diào)控淀粉酶基因的表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)淀粉代謝的重要因素[23,32]。苗紅霞等[33]研究發(fā)現(xiàn)，在相對(duì)高溫下，持續(xù)高乙烯釋放量主要促進(jìn)了寶島蕉果實(shí)中支鏈淀粉的降解；Nascimento等[34]發(fā)現(xiàn)，BAM基因表達(dá)量與乙烯釋放量呈顯著正相關(guān)。在獼猴桃果實(shí)中，淀粉降解的關(guān)鍵基因AcAMY1、AcAMY3、AcBAM1、AcBAM3和AcDPE1同樣受乙烯調(diào)控表達(dá)[11]。在本研究中，低溫只抑制了獼猴桃果實(shí)貯藏8 d后乙烯的釋放速率，但延緩了整個(gè)貯藏期間果實(shí)中淀粉的降解。這表明獼猴桃果實(shí)貯藏前期淀粉的降解以及淀粉降解基因AcAMY1、AcBAM1、AcABAM3和AcDPE1表達(dá)主要受低溫影響，而在貯藏后期，即在乙烯開(kāi)始釋放階段，淀粉酶降解基因表達(dá)的變化主要與低溫抑制乙烯釋放有關(guān)。本研究結(jié)果為解釋低溫影響獼猴桃果實(shí)乙烯釋放速率、淀粉降解與果實(shí)軟化提供了理論依據(jù)，但乙烯對(duì)淀粉代謝途徑的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

低溫是延緩獼猴桃采后成熟軟化有效手段之一，低溫對(duì)獼猴桃果實(shí)采后成熟軟化的影響與抑制乙烯釋放和淀粉降解密切相關(guān)。本研究結(jié)果表明，低溫抑制了果實(shí)貯藏后期乙烯合成相關(guān)酶基因AcACO、AcACS的表達(dá)，使乙烯含量保持較低水平，減緩了果實(shí)成熟軟化。同時(shí)，低溫抑制了貯藏期間淀粉降解相關(guān)基因AcAMY1、AcBAM1、AcBAM3、AcISA3、AcLDA1和AcDPE1的表達(dá)。貯藏后期淀粉降解相關(guān)基因AcAMY1、AcBAM1、AcABAM3、AcLDA1和AcDPE1的抑制表達(dá)可能與低溫抑制內(nèi)源乙烯合成水平有關(guān)。本研究為進(jìn)一步探究低溫貯藏能有效延緩獼猴桃后熟軟化與淀粉降解之間的關(guān)系提供了理論依據(jù)。