亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        紫紅曲霉與銀杏葉雙向發(fā)酵研究

        2020-12-01 09:39:04解文利方月月吳雨烔周禮紅
        食品研究與開發(fā) 2020年22期
        關(guān)鍵詞:黃酮

        解文利,方月月,吳雨烔,周禮紅

        (貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,貴州貴陽550025)

        紅曲霉作為一種藥食兩用絲狀真菌[1],廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、生物催化等領(lǐng)域。紅曲霉能生物合成紅曲色素、Monacolin K、黃酮類、類黃酮、γ-氨基丁酸等廣泛生理活性物質(zhì)[2-5],其中Monacolin K是膽固醇合成限速酶羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(hydroxymethyl glutarate monoacyl coa reductase,HMG-CoA)的顯著抑制劑,用于治療高膽固醇血癥和高脂血癥[6],含有的γ-氨基丁酸具有降血壓的作用,并且是大腦的一種化學(xué)傳遞物質(zhì),可以調(diào)節(jié)大腦興奮與抑制等作用[7-9]。

        雙向發(fā)酵是指用真菌為發(fā)酵菌株,以中藥材作為藥性基質(zhì),該基質(zhì)在為真菌提供營養(yǎng)物質(zhì)的同時,又與真菌在生長過程中產(chǎn)生的各種代謝產(chǎn)物相互作用、相互影響,從而產(chǎn)生新的性味功能,使整個發(fā)酵具有雙向性[10-12]。雙向發(fā)酵后的菌質(zhì)相對于原藥材主要有幾個方面的優(yōu)勢:提高提取效率、減輕毒性、產(chǎn)生新的有效成分、增強(qiáng)藥效[11,13]。銀杏葉具有多種活性物質(zhì),其中的黃酮和內(nèi)酯類化合物,具有降血脂、抗氧化、抗衰老等作用[14-16]。銀杏葉與微生物進(jìn)行共發(fā)酵,利用微生物的代謝活動,可起到增強(qiáng)銀杏葉中活性成分,降低其毒性成分的含量的作用[17]。任金玫[18]利用冠突散囊菌和銀杏毛茶進(jìn)行共發(fā)酵,結(jié)果發(fā)現(xiàn)毒性成分銀杏酸下降了44.6%,活性物質(zhì)黃酮提高了3.14%。Weihua Qiu等[19]利用漆酶與銀杏葉共發(fā)酵,發(fā)現(xiàn)銀杏葉中黃酮含量比未發(fā)酵基質(zhì)提高了24.11%。目前,甚少有紅曲霉與銀杏葉共發(fā)酵的報道,故本試驗(yàn)通過前期篩選得出的銀杏葉,以紅曲霉為發(fā)酵菌種,通過單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn),研究紅曲霉-銀杏葉共發(fā)酵對銀杏葉藥汁中總黃酮含量以及紅曲霉生物量的影響。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        紫紅曲霉 3.45-1(Monascus 3.45-1):貴州大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室選育;銀杏葉Ginkgo biloba:貴州同濟(jì)堂制藥有限公司;葡萄糖、麥芽糖、蔗糖:成都金山化學(xué)試劑有限公司;蛋白胨、酵母膏:北京奧博星生物技術(shù)有限公司;所用試劑均為分析純。玉米粉、大米粉、甘薯淀粉、麥麩、米糠、馬鈴薯淀粉、甘油、花生粉、魚粉、豬血粉、蠶蛹粉、豬肝粉、黃豆粉:市售;蘆丁標(biāo)品(純度99%):成都曼斯特生物技術(shù)有限公司;沙氏瓊脂改良培養(yǎng)基:麥芽糖5 g,蛋白胨10 g,酵母膏5 g,瓊脂20 g,葡萄糖20 g,1 000 mL,pH值自然,用于紅曲霉斜面培養(yǎng)。藥汁培養(yǎng)基(空白對照):稱取銀杏葉,加適量水浸泡1 h,煮沸30 min,倒出藥汁,補(bǔ)加適量冷水于藥渣中,再煮沸20 min,倒出藥汁。8層紗布過濾,121℃滅菌30 min,作為工藝優(yōu)化的基本培養(yǎng)基。

        1.2 儀器與設(shè)備

        THZ-82A數(shù)顯氣浴恒溫振蕩器:金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠;LDZX-50 KBS立式壓力蒸汽滅菌器:上海申安醫(yī)療器械廠;JJ-CJ-1FD潔凈工作臺:蘇州市金凈凈化設(shè)備科技有限公司;DH-360A電熱恒溫培養(yǎng)箱:北京科偉永興儀器有限公司;759紫外分光光度計(jì):上海菁華科技儀器有限公司;TD6M低速多管架自動平衡離心機(jī):長沙高新開發(fā)區(qū)湘儀貝克儀器儀表有限公司;DP73生物顯微鏡:日本奧林巴斯公司;GZX-GF-101-2烘箱:上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠。

        1.3 方法

        1.3.1 孢子懸液的制備

        紫紅曲霉菌株28℃斜面培養(yǎng)7 d~11 d;用無菌吐溫生理鹽水洗下孢子,轉(zhuǎn)入裝有玻璃珠的無菌三角瓶中,振蕩,充分打散孢子,用4層無菌鏡頭紙過濾除去菌絲,制成終濃度為106cfu/mL的均一孢子懸液,備用。

        1.3.2 發(fā)酵藥汁培養(yǎng)基的制備

        將紫紅曲霉孢子懸液(106cfu/mL),以10%的接種量接入裝有85 mL藥汁培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中,150 r/min,(28±1)℃培養(yǎng)11 d備用。作為未添加碳源、氮源、生長因子、無機(jī)鹽發(fā)酵藥汁的對照組。

        1.3.3 發(fā)酵條件單因素試驗(yàn)優(yōu)化

        1.3.3.1 碳源確定

        分別選取葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、玉米粉、大米粉、甘薯淀粉、麥麩、米糠、馬鈴薯淀粉、甘油10種碳源添加到基本培養(yǎng)基中,添加量均為3%,接種紅曲霉,30℃,125 r/min振蕩培養(yǎng)11 d,考察不同碳源對總黃酮含量、生物量的影響。

        1.3.3.2 氮源確定

        分別取有機(jī)氮源蛋白胨、酵母膏、花生粉、魚粉、豬血粉、蠶蛹粉、豬肝粉、黃豆粉(添加量1%);無機(jī)氮源NaNO3、(NH4)2SO4(添加量0.2%)為氮源添加到基本培養(yǎng)基中,接種紅曲霉,培養(yǎng)條件同1.3.3.1,研究不同氮源對總黃酮含量、生物量的影響。

        1.3.3.3 生長因子優(yōu)化

        分別將微量維生素B1、維生素B6、維生素B12、維生素C 4種生長因子添加到基本培養(yǎng)基中,接種紅曲霉,培養(yǎng)條件同1.3.3.1,考察不同生長因子對總黃酮含量、生物量的影響。

        1.3.3.4 無機(jī)鹽優(yōu)化

        向基本培養(yǎng)基中分別加入 CaCl2、FeSO4、MnSO4、CuSO4、ZnSO4(添加量為 0.1%)5種無機(jī)鹽,接種紅曲霉,培養(yǎng)條件同1.3.3.1,研究不同無機(jī)鹽對總黃酮含量、生物量的影響。

        1.3.3.5 裝液量的優(yōu)化

        向 250 mL 錐形瓶中分別裝入 25、40、55、70、85、100 mL基本培養(yǎng)基,接種紅曲霉,培養(yǎng)條件同1.3.3.1,考察不同裝液量對總黃酮含量、生物量的影響,確定最佳裝液量。

        1.3.3.6 接種量優(yōu)化

        按照5%、10%、15%的接種量將紅曲霉孢子懸液接種于裝有85 mL培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中培養(yǎng),確定最佳接種量。

        1.3.3.7 發(fā)酵時間的優(yōu)化

        在確定最佳裝液量、接種量的基礎(chǔ)上,將紅曲霉接到藥汁培養(yǎng)基中,在30℃,125 r/min振蕩培養(yǎng)條件下分別培養(yǎng) 8、9、10、11、12、13 d。確定最佳培養(yǎng)時間。

        1.3.3.8 初始pH值優(yōu)化

        調(diào)節(jié)藥汁培養(yǎng)基的初始pH值分別為 3、4、5、6、7、8后,接種紅曲霉,培養(yǎng)條件及方法同1.3.3.1,確定最佳初始pH值。以上試驗(yàn)均設(shè)置3個重復(fù)。

        1.3.4 正交試驗(yàn)

        正交試驗(yàn)采用L18(36)正交表,根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果確定正交試驗(yàn)的因素和水平。選取碳源濃度、氮源濃度、KH2PO4濃度、MgSO4濃度、碳源種類、氮源種類這6個因素為考察因素進(jìn)行優(yōu)化,以紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵后紅曲霉生物量及發(fā)酵液中總黃酮含量的高低確定最優(yōu)綜合發(fā)酵組合。雙向發(fā)酵正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及水平表見表1。

        表1 雙向發(fā)酵正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及水平表Table 1 Factor and level table of orthogonal experiment design of bidirectional fermentation

        1.3.5 生物量的測定

        將發(fā)酵液3 000 r/min離心20 min,棄上清,取沉淀,清水重懸沉淀,再3 000 r/min離心20 min,取沉淀即菌絲體,(60±1)℃烘干至恒重,稱重得生物量。

        1.3.6 總黃酮的含量測定

        1.3.6.1 對照樣品的制備

        精密稱取蘆丁對照品10 mg,置25 mL容量瓶中,加80%乙醇溶解,定容即得對照品儲備液。

        1.3.6.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        精密吸取對照品儲備液 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL,分置于25 mL容量瓶中,加1 mL 5%NaNO2溶液,搖勻,放置6 min,再加1 mL 10%Al(NO3)3溶液,搖勻,放置6 min,加4%10 mL氫氧化鈉顯色[20],以在357 nm處的吸光度A對濃度C(mg/mL)回歸,并求得回歸方程。

        1.3.6.3 樣品溶液制備

        取銀杏葉中藥汁16 mL(相當(dāng)于2.0 g生藥),分置于索氏提取器中,用石油醚(60℃~90℃)水浴回流脫脂2次(每次2 h),棄去石油醚提取液。揮干石油醚,置100 mL燒瓶中,用80%乙醇回流提取兩次,每次反應(yīng)時間20 min,提盡黃酮。定量轉(zhuǎn)移入100 mL容量瓶中,加80%乙醇至刻度,搖勻,即得待測樣品液。

        將對照品儲備液1.5 mL和供試品溶液2 mL分置于25 mL容量瓶中,依1.3.6.2的方法進(jìn)行顯色[20],以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)溶液,以試劑為空白,用分光光度計(jì)在375 nm處測定吸光度,由回歸方程求出樣品溶液中總黃酮濃度。

        1.4 數(shù)據(jù)處理

        采用SPSS Statistics 25軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理,Origin 2018軟件進(jìn)行繪圖。分析結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s,n=3)表示,P<0.05 表示差異顯著。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        在357 nm處以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(蘆丁量)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析,得到回歸方程:A=29.657X+0.017 5(r=0.999 2)。

        2.2 添加不同碳源對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        不同碳源對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖1。

        圖1 不同碳源對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.1 Effects of different carbon sources on Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves bilevel fermentation

        由圖1可知,發(fā)酵后的銀杏葉藥汁總黃酮含量均低于未發(fā)酵銀杏葉藥汁,與未添加碳源的發(fā)酵藥汁相比,當(dāng)在發(fā)酵藥汁中添加麥芽糖時,銀杏葉藥汁中總黃酮含量增加最為顯著(P<0.01),總黃酮含量達(dá)到(0.033±0.002)mg/mL,其次是添加葡萄糖、蔗糖,總黃酮含量分別提高到(0.032±0.001)、(0.032±0.000 6)mg/mL。在添加米糠、麥麩、甘薯淀粉后,與未添加碳源的發(fā)酵藥汁相比,發(fā)酵液中的總黃酮含量由最初的(0.022±0.001 1)mg/mL 分別降低至(0.018±0.000 6)、(0.018±0.001)、(0.019±0.001)mg/mL。對紅曲霉生物量而言,添加葡萄糖、蔗糖、麥芽糖到發(fā)酵藥汁中,對紅曲霉生物量的增加最為顯著(P<0.01),而玉米粉、米糠、麥麩的添加不利于紅曲霉的生長??傮w上,碳源結(jié)構(gòu)越簡單,對于紅曲霉生物量和發(fā)酵液中總黃酮含量的提高效果越明顯,這是因?yàn)榧t曲霉可以將多糖轉(zhuǎn)化為可利用的單糖[21-22],但在發(fā)酵初期,菌種量少,淀粉酶,纖維素酶的活力低,碳源結(jié)構(gòu)復(fù)雜無法滿足紅曲霉的生長代謝[4],故選擇葡萄糖、蔗糖、麥芽糖添加到發(fā)酵藥汁培養(yǎng)基中。

        2.3 添加不同氮源對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        不同氮源對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖2。

        從圖2中可以看出,與未發(fā)酵銀杏葉藥汁相比,氮源的添加使發(fā)酵銀杏葉藥汁的總黃酮含量均降低,與發(fā)酵銀杏葉藥汁相比,蛋白胨、(NH4)2SO4、花生粉三者添加到發(fā)酵銀杏葉藥汁時,銀杏葉藥汁總黃酮含量提高最為顯著(P<0.01),分別達(dá)到(0.036±0.000 7)、(0.033±0.001 4)、(0.030±0.000 9)mg/mL。與未添加氮源的發(fā)酵藥汁相比,氮源的添加均能使紅曲霉的生物量增加,其中添加蠶蛹粉、NaNO3、花生粉后紅曲霉生物量增加最為顯著(P<0.01),分別增加(5.26±0.011)、(5.10±0.017)、(4.99±0.007)g/L。有機(jī)氮源比無機(jī)氮源作氮源添加更有利于紅曲霉的生長,可能是因?yàn)橛袡C(jī)氮源含有紅曲霉所需的必需氨基酸[21],由于考慮原料來源、成本、是否適合食用等方面,最終選擇蛋白胨、酵母膏、花生粉這3種氮源作為發(fā)酵優(yōu)化的氮源種類。

        圖2 不同氮源對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.2 Effects of different nitrogen sources on Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves biloba fermentation

        2.4 添加不同生長因子對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        不同生長因子對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖3。

        圖3 不同生長因子對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.3 Effects of different growth factors on the double fermentation of Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves

        由圖3可知,添加了維生素B1的銀杏葉發(fā)酵藥汁較未添加生長因子的銀杏葉發(fā)酵藥汁,其總黃酮含量的提高不顯著(P>0.05),其它生長因子添加至銀杏葉發(fā)酵藥汁中,總黃酮含量明顯低于未添加生長因子的銀杏葉發(fā)酵藥汁。對紅曲霉生物量而言,生長因子的添加使生物量均提高,其中維生素B1的添加使生物量提高最為顯著(P<0.01)。由最初的(3.12±0.049)g/L 提高到(4.85±0.01)g/L。故選擇維生素B1作為發(fā)酵藥汁培養(yǎng)基的生長因子。

        2.5 添加不同無機(jī)鹽對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        不同無機(jī)鹽對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖4。

        圖4 不同無機(jī)鹽對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.4 Effects of different inorganic salts on the double fermentation of Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves

        由圖4可知,與未發(fā)酵藥汁相比,發(fā)酵藥汁和添加無機(jī)鹽的發(fā)酵藥汁中的總黃酮含量均低于未發(fā)酵藥汁的總黃酮含量,添加FeSO4時,發(fā)酵藥汁總黃酮含量提高最為顯著(P<0.01),從最初的(0.022±0.001 1)mg/mL提高到(0.031±0.000 8)mg/mL,添加 FeSO4、MnSO4、CuSO4后,紅曲霉的生物量較未添加無機(jī)鹽時顯著提高,分別提高到(4.31±0.005 8)、(3.59±0.012)、(4.69±0.006 6)g/L。CaCl2、ZnSO4的添加使銀杏葉藥汁中紅曲霉的生物量減小。鑒于總黃酮含量、生物量的雙重考量,最終選擇FeSO4作為發(fā)酵藥汁培養(yǎng)基的無機(jī)鹽。

        2.6 裝液量對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        裝液量對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖5。

        圖5 裝液量對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.5 Effect of loading amount on double direction fermentation of Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves

        如圖5所示,當(dāng)裝液量從25 mL逐漸增加到100 mL時,紅曲霉生物量一直呈增長趨勢,總黃酮含量開始沒有明顯變化,從70 mL增加到85 mL時,總黃酮含量明顯增加,且在裝液量為85 mL時生物量的值也達(dá)到最大,生物量從最初的(1.04±0.007)g/L升高到(3.47±0.008 1)g/L。從85 mL增加到100 mL時,總黃酮含量不變,生物量減小,原因可能是由于裝液量的增加在使搖瓶中養(yǎng)分增加的同時也降低了發(fā)酵液中的溶氧,氧氣減少成為了發(fā)酵的主要限制因素,故生物量減小。綜合兩者的裝液量曲線,在裝液量為85 mL時兩者產(chǎn)量均最高,故確定85 mL為紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的最佳裝液量。

        2.7 接種量對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        接種量對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖6。

        如圖6所示,銀杏葉發(fā)酵藥汁中總黃酮含量隨接種量的增大無多大變化。紫紅曲霉生物量呈先增大后減小,當(dāng)接種量為 10%時,生物量(3.12±0.017 1)g/L含量達(dá)到最大。隨著接種量增大,菌體代謝旺盛,分泌大量胞外酶類,能較好的利用發(fā)酵基質(zhì),故有利于菌體生長,可以縮短菌體繁殖達(dá)到高峰的時間,并且可減少雜菌的生長機(jī)會,但是接種量過大,也會導(dǎo)致單位體積內(nèi)養(yǎng)料和溶氧不足以及消耗的營養(yǎng)物質(zhì)過多,導(dǎo)致菌的生長受到影響,最終影響產(chǎn)物的合成[23-25]。綜合該因素對銀杏葉藥汁總黃酮含量和紅曲霉的生物量的影響,選擇10%為最佳接種量。

        圖6 接種量對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.6 Effect of inoculation amount on double direction fermentation of Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves

        2.8 培養(yǎng)時間對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        培養(yǎng)時間對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖7。

        圖7 培養(yǎng)時間對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.7 Effects of culture time on the double direction fermentation of Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves

        由圖7可以看出,從第8天到第12天,總黃酮含量呈先減后增再減的趨勢,在11 d時,總黃酮含量又升高到最大值(0.022±0.000 3)mg/mL。然后從12 d到13 d時總黃酮的含量又呈減少趨勢。在發(fā)酵初期,發(fā)酵時間過短,不利于目標(biāo)產(chǎn)物的積累,發(fā)酵時間過長,由于營養(yǎng)物質(zhì)的消耗及多種代謝產(chǎn)物的積累導(dǎo)致環(huán)境不利于菌體生長[26]。紅曲霉生物量隨培養(yǎng)時間的延長而一直呈上升趨勢,在10 d到11 d之間增速是最快的,11 d到13 d增長速度是趨于平緩的。綜上分析,將紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的最佳發(fā)酵時間定為11 d。

        2.9 初始pH值對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響

        初始pH值對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響見圖8。

        圖8 初始pH值對紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵的影響Fig.8 Effect of initial pH on double fermentation of Monascus purpureus-Ginkgo biloba leaves

        如圖8所示,初始pH值為3時,發(fā)酵藥汁總黃酮含量和紅曲霉生物量都不高,可能是銀杏葉藥汁中過酸的環(huán)境不利于紅曲霉生長的原因。在初始pH值調(diào)至4~5時,有利于總黃酮含量的提高,且在pH 5時達(dá)到最大值(0.022±0.000 8)mg/mL。當(dāng) pH>5時,紅曲霉的生物量先增后減,而發(fā)酵藥汁總黃酮含量呈下降后增趨勢。經(jīng)分析,選擇初始pH值為5時是紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵時的最適pH值。

        2.10 紅曲霉-銀杏葉雙向發(fā)酵培養(yǎng)基的正交試驗(yàn)優(yōu)化

        銀杏葉發(fā)酵正交試驗(yàn)結(jié)果見表2,方差分析結(jié)果見表3。

        由表2可看出,對總黃酮含量的影響最大的是碳源種類,其次是碳源和氮源濃度,影響最小的是氮源種類,總黃酮含量最高的最優(yōu)組合是A2B3C1D2E1F3。對生物量影響最大的是氮源濃度,其次MgSO4濃度,影響最小的是氮源種類,生物量最大的最優(yōu)組合為A2B3C1D2E1F3。由表3可知,碳源濃度、氮源濃度、MgSO4濃度以及碳源種類對總黃酮含量和生物量這兩者的影響極顯著(F>F0.01),KH2PO4濃度對總黃酮含量的影響顯著(F>F0.05),對生物量的影響極顯著(F>F0.01),氮源種類對總黃酮含量和生物量的影響都不顯著(F<F0.05)。

        表2 發(fā)酵正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The results of orthogonal experimental

        表3 方差分析結(jié)果Table 3 Variance analysis results

        從表2可以看出,正交試驗(yàn)最佳發(fā)酵條件(A2B3C1D2E3F1)和在極差結(jié)果中得出的最優(yōu)組合(A2B3C1D2E1F3)不一致,通過試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。即在葡萄糖濃度4%、花生粉濃度1.5%、KH2PO4濃度0.1%、MgSO4濃度0.12%的條件下進(jìn)行紅曲霉和銀杏葉雙向發(fā)酵,對所得發(fā)酵液中的總黃酮含量、生物量進(jìn)行測定,試驗(yàn)重復(fù)3次,測定總黃酮含量為0.074 mg/mL、生物量為13.26 g/L,均高于在正交組合中的最大值。因此選取組合A2B3C1D2E1F3為發(fā)酵的最優(yōu)組合。即葡萄糖濃度4%、花生粉濃度1.5%、KH2PO4濃度0.1%、MgSO4濃度0.12%。在此組合下,雙向發(fā)酵體系中的總黃酮含量比未利用紅曲霉發(fā)酵的對照組提高了100%;紅曲霉生物量比未優(yōu)化前的對照組提高了76.47%。發(fā)酵體系中總黃酮含量的升高,可能是紅曲霉能利用銀杏葉藥汁中的某些物質(zhì),經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)換成黃酮或萜內(nèi)酯類[27-28]。辛燕花等[29]利用靈芝與銀杏葉進(jìn)行雙向液體發(fā)酵,發(fā)現(xiàn)與未發(fā)酵的銀杏葉相比黃酮類物質(zhì)明顯增加,趙林果等[30]將銀杏葉與黑曲霉進(jìn)行雙向固體發(fā)酵,發(fā)現(xiàn)銀杏葉通過微生物代謝轉(zhuǎn)化后總黃酮含量提高5.77%。

        3 結(jié)論

        以銀杏葉藥汁中的總黃酮含量和紅曲霉生物量為指標(biāo),通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),獲得的最佳發(fā)酵組合為葡萄糖濃度4%、花生粉濃度1.5%、KH2PO4濃度0.1%、MgSO4濃度0.12%,在此優(yōu)化組合下,銀杏葉發(fā)酵藥汁的總黃酮含量為0.074 mg/mL,紅曲霉生物量為13.26 g/L。銀杏葉藥汁中總黃酮含量的增加,可能是紅曲霉產(chǎn)生的龐大酶系可以搭建起藥性基質(zhì)里更多活性物質(zhì)合成的途徑,另外,在發(fā)酵過程中,微生物的代謝作用可能將其他成分轉(zhuǎn)化為黃酮類物質(zhì)。

        猜你喜歡
        黃酮
        不同桑品種黃酮含量測定
        桑黃黃酮的研究進(jìn)展
        一測多評法同時測定腦心清片中6種黃酮
        中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:00
        HPLC法同時測定固本補(bǔ)腎口服液中3種黃酮
        中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:40
        MIPs-HPLC法同時測定覆盆子中4種黃酮
        中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:13
        DAD-HPLC法同時測定龍須藤總黃酮中5種多甲氧基黃酮
        中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:50
        正交法優(yōu)化王不留行中王不留行黃酮苷的超聲提取工藝
        黃酮抗癌作用研究進(jìn)展
        瓜馥木中一種黃酮的NMR表征
        UV法和HPLC法測定甘草總黃酮混懸液中總黃酮和查爾酮含量
        18禁高潮出水呻吟娇喘蜜芽| 日本精品一级二区三级| 亚洲精品国产第一区二区| 国产激情视频一区二区三区| 这里有精品可以观看| 国产桃色精品网站| 中文字幕肉感巨大的乳专区| 超清纯白嫩大学生无码网站| 狠狠噜天天噜日日噜| 亚洲欧美日韩在线中文一| 玩弄丝袜美腿超短裙校花| 亚洲精品粉嫩美女一区| 免费人成网ww555kkk在线| 手机看片福利盒子久久青| 国产毛片三区二区一区| 在线观看日本一区二区三区四区| 国产精品无码久久久久成人影院| 欧美一欧美一区二三区性| 精品人妻一区二区久久| 亚洲美女毛多水多免费视频| 国产后入又长又硬| 亚洲欧美国产日韩字幕| 91蜜桃国产成人精品区在线| 日韩精品一区二区三区在线视频| 在线欧美中文字幕农村电影| 国产成人影院一区二区| 国产高清丝袜美腿视频在线观看| 精品一区二区三区婷婷| 亚洲国产成人久久综合| 日本成人久久| 国产精品久久国产三级国| 国产亚洲一区二区三区 | 一区二区三区国产| 久久精品中文字幕第23页| 中文字幕av人妻一区二区| 蜜桃18禁成人午夜免费网站| 8av国产精品爽爽ⅴa在线观看| 美女爽好多水快进来视频| 精品国产一区二区三区a | 精品少妇一区一区三区| 国产自拍一区在线视频|