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        大孔吸附樹脂純化艾草總黃酮及其抗氧化活性研究

        2020-12-01 09:38:16楊宇華黃艷鄭寶東
        食品研究與開發(fā) 2020年22期
        關鍵詞:黃酮

        楊宇華,黃艷,鄭寶東

        (1.武夷學院茶與食品學院,福建武夷山354300;2.福建農林大學食品科學學院,福建福州350002)

        艾草(Artemisia argyi),又稱遏草、醫(yī)草、灸草等,是一種藥食兼用的草本植物,具有獨特的天然生物活性,艾草黃酮即為其天然生物活性成分之一[1-3]。為使艾草黃酮成分能夠得到全面開發(fā),本研究在艾草黃酮粗提取的基礎上進一步分離純化,黃酮類化合物分離純化的方法已比較成熟,如溶劑萃取法、膜分離法、超臨界流體萃取法、薄層色譜分離、高效液相色譜分離等,但以上方法各存在不足之處,如純化成本高、產品純度低、設備要求較高、生產周期長、難以實現(xiàn)產業(yè)化等。

        大孔吸附樹脂技術因其成本低、選擇性好、產品純度高、樹脂可再生、工藝簡單利于實現(xiàn)大規(guī)模生產等優(yōu)點[4-6],近年來被廣泛用于中草藥活性成分的分離純化研究。本文開展大孔吸附樹脂對艾草總黃酮的吸附純化研究,比較6種大孔樹脂的吸附及解吸性能,篩選出最佳大孔樹脂,并利用最佳大孔樹脂對艾草總黃酮進行靜態(tài)及動態(tài)吸附純化研究,確定最佳純化工藝,以期為艾草總黃酮的高效利用及性質組分鑒定提供相關理論依據(jù)。

        動物機體代謝過程會產生超氧陰離子自由基(O2-·)、羥基自由基(·OH)、過氧化氫(H2O2)等傷害機體的自由基[7-9],從而引起蛋白質病變、DNA鏈斷裂、酶失活等,因此,清除體內過多的自由基,對于維持機體健康尤為重要。本文以VC為陽性對照,從總還原力、對羥基自由基(·OH)和二苯代苦味?;杂苫―PPH·)、超氧陰離子自由基(O2-·)、清除效果等方面開展艾草總黃酮粗提物及純化物的體外抗氧化活性研究,以期為艾草黃酮類化合物作為天然抗氧劑的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        蘆丁標準品:成都西亞試劑有限公司;DPPH:Sigma公司;過硫酸鉀、水楊酸、氯化鐵、硫酸亞鐵、鐵氰化鉀、三氯乙酸、三羥甲基氨基甲烷(分析純):國藥集團化學試劑有限公司。HP-20型樹脂:非極性,比表面積(m2/g)500~550;ADS 17 型樹脂:中極性,比表面積(m2/g)90~150;DM-301型樹脂:弱極性,比表面積(m2/g)≥330;HPD500 型樹脂:弱極性,比表面積(m2/g)500~550;AB-8 型樹脂:弱極性,比表面積(m2/g)≥400;D101 型樹脂:非極性,比表面積(m2/g)≥550。

        1.2 儀器與設備

        TGL-16G型高速離心機:上海安亭科學儀器廠;UV-3200PC型紫外可見分光光度計:上海美譜達儀器有限公司;WSC-S型測色色差計:上海精密科學儀器有限公司;QYC-200型全溫培養(yǎng)搖床:上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵:鞏義市予華儀器有限公司;RE 2000A型旋轉蒸發(fā)儀:上海亞榮生化儀器廠;HL-2型恒流泵:上海滬西分析儀器廠有限公司;BSZ-100-LCD型自動部分收集器:上海琪特分析儀器有限公司。

        1.3 試驗方法

        1.3.1 樣液制備

        參照前期試驗艾草總黃酮的最佳提取工藝[10]:乙醇濃度 43%、提取溫度 80℃、料液比 1∶69(g/mL)、超聲功率350 W,提取時間40 min,在此條件下得到艾草總黃酮提取率最高為18.62%,純度為36.1%,收集備用。

        1.3.2 大孔吸附樹脂預處理

        將 6 種 樹 脂 (D101、HP-20、ADS 17、DM301、HPD500、AB-8)用95%乙醇溶液浸泡24 h,浸泡至充分溶脹,于100目篩中用蒸餾水充分洗滌,無乙醇味且流出的洗滌液澄清不渾濁,后置于鹽酸溶液(5%)中浸泡5 h用蒸餾水過100目篩充分洗滌,直至pH試紙顯示流出的洗滌液呈中性,再于5%氫氧化鈉溶液浸泡5 h,用蒸餾水充分洗滌,直至流出的洗滌液使pH試紙顯示中性,最后將處理好的樹脂置于蒸餾水中備用。

        1.3.3 大孔吸附樹脂篩選

        分別稱取上述預處理后的6種大孔樹脂各2.0 g,置于50mL的錐形瓶中,加入20mL艾草總黃酮粗提液,置于30℃恒溫振蕩箱中,于150 r/min轉速下充分振蕩24 h,真空抽濾,測定濾液中艾草總黃酮的濃度。用蒸餾水沖洗,直至大孔吸附樹脂表面的艾草總黃酮洗凈為止,抽濾得到吸附飽和的樹脂,再加入80%乙醇溶液20 mL作為解吸液,在溫度30℃、轉速150 r/min的恒溫振蕩箱中充分振蕩24 h,真空抽濾,測定濾液的總黃酮濃度。大孔吸附樹脂吸附量、吸附率和解吸率的計算公式如下:

        式中:Q 為大孔樹脂吸附量,mg/mL;Q1、Q2分別為大孔吸附樹脂吸附率和解吸率,%;C0為吸附前艾草總黃酮溶液濃度,mg/mL;C1為吸附后艾草總黃酮溶液濃度,mg/mL;C2為艾草總黃酮溶液解吸液中濃度,mg/mL;V為樣品溶液的體積,mL;M為樹脂濕重,g。

        1.3.4 大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附和解吸試驗

        1.3.4.1 大孔吸附樹脂靜態(tài)動力學曲線繪制

        精確稱取AB-8大孔吸附樹脂1.000 0 g于50 mL錐形瓶中,加入30 mL艾草總黃酮溶液,將其置于轉速為150 r/min、溫度為30℃的恒溫振蕩器中振蕩充分。每間隔30 min快速從中吸取1 mL溶液,測定總黃酮溶液的濃度,繪制靜態(tài)吸附動力學曲線。

        1.3.4.2 pH值對AB-8大孔吸附樹脂吸附率的影響

        精確稱取AB-8大孔樹脂1.000 0 g于50 mL錐形瓶中,加入艾草總黃酮溶液20 mL,pH值分別為2~8,于恒溫振蕩箱中溫度30℃,轉速150 r/min、充分振蕩150 min,真空抽濾,測定總黃酮溶液的濃度,計算AB-8大孔吸附樹脂在不同pH值下的吸附率。

        1.3.4.3 溫度對AB-8大孔樹脂吸附率的影響

        精確稱取AB-8大孔樹脂1.000 0 g于50 mL錐形瓶中,加入pH值為4的艾草總黃酮溶液20 mL,分別調節(jié)恒溫振蕩箱溫度為20℃~60℃,于150 r/min轉速下振蕩吸附,每隔20 min吸取上清液測定總黃酮溶液濃度,繪制艾草總黃酮溶液吸附曲線。

        1.3.4.4 乙醇濃度對AB-8大孔吸附樹脂解吸率的影響

        精確稱取AB-8大孔吸附樹脂1.000 0 g于50 mL錐形瓶中,于30℃、150 r/min下恒溫振蕩180 min后抽濾,在樹脂中加入20 mL的乙醇溶液,濃度分別為50%~100%,再于上述恒溫振蕩箱中,充分振蕩,解吸24 h,測濾液總黃酮溶液濃度,繪制AB-8大孔吸附樹脂在不同乙醇濃度的解吸曲線。

        1.3.5 AB-8大孔吸附樹脂動態(tài)吸附和解吸試驗

        1.3.5.1 上樣液濃度對AB-8大孔吸附樹脂吸附率的影響

        用預處理過的大孔吸附樹脂裝柱,將濕樹脂瀝干并采用濕法裝柱,自然沉降。配置pH值為4的艾草總黃酮液1.0 mg/mL~3.0 mg/mL,上樣量50 mL,控制上樣流速為1 mL/min,計算吸附率,探討上樣液濃度對AB-8大孔吸附樹脂吸附率的影響。

        1.3.5.2 上樣液速率對AB-8大孔吸附樹脂吸附率的影響

        裝柱方法同1.3.5.1,配制pH值為4,濃度為2.5 mg/mL的艾草總黃酮溶液,上樣量為50 mL,控制上樣速度為0.5 mL/min~2.5 mL/min,計算吸附率,探討上樣液速率對樹脂吸附率的影響。

        1.3.5.3 洗脫劑用量對AB-8大孔吸附樹脂解吸率的影響

        裝柱方法同1.3.5.1,配制pH值為4、濃度為2.5 mg/mL的艾草總黃酮溶液,上樣量為50 mL,上樣速率1.5 mL/min,待樹脂吸附完全后,分別用40 mL~120 mL的80%乙醇溶液以1.5 mL/min的速率進行洗脫,測定濾液的總黃酮濃度,繪制不同洗脫劑用量對AB-8大孔吸附樹脂的解吸效果。

        1.4 純度計算

        將艾草總黃酮用AB-8大孔吸附樹脂吸附純化,對比純化前后的純度,計算其純度。計算公式如下:

        1.5 抗氧化能力的測定

        1.5.1 艾草總黃酮總還原力的測定

        參照溫晉芳等[11]的方法進行測定。具體操作為:分別配置濃度為0.1 mg/mL~0.8 mg/mL的艾草總黃酮粗提液和純化液、VC溶液,各取1 mL于離心管中,加入2.5 mL磷酸緩沖液(pH6.6,0.2 mol/L)和鐵氰化鉀溶液(1%),混勻置于水浴鍋(50℃)中水浴20 min,急速冷卻,加入三氯乙酸溶液(10%)2.5 mL,攪拌均勻,于離心機(3 000 r/min)中離心10 min,移取2.5 mL上清液,再加入蒸餾水2.5 mL和FeCl3(0.1%)0.5 mL,混勻后靜置10 min,于波長700 nm處測定吸光度值。

        1.5.2 艾草總黃酮清除DPPH·能力的測定

        參考Wang等[12]的方法進行測定。具體操作為:將4 mg DPPH溶解于100 mL無水乙醇中,4℃下避光保存;將0.75 mL的0.1 mmol/L DPPH與1.5 mL不同濃度的總黃酮溶液混勻,暗處靜置30 min,以無水乙醇為空白,于波長517 nm測定吸光度A1。空白對照為:0.75 mL無水乙醇與1.5 mL不同濃度的總黃酮溶液混勻,暗處靜置30 min,以無水乙醇為空白,于波長517 nm測定吸光度A2;陰性對照為:將0.75 mL的0.1 mmol/L DPPH與1.5 mL無水乙醇混勻,暗處靜置30 min,以無水乙醇為空白,于波長517 nm測定吸光度A0。根據(jù)公式(5)計算總黃酮溶液對DPPH自由基的清除率。

        1.5.3 艾草總黃酮清除·OH能力的測定

        采用Fenton法進行測定。具體操作為:將VC和純化前后的艾草總黃酮配制成0.1 mg/mL~1.6 mg/mL的溶液,以蒸餾水為空白,分別量取4 mL待測溶液于比色管中,加入2 mol/L的FeSO4溶液3 mL和6 mmol/L水楊酸3 mL,再于比色管中加入2 mmol/L H2O23 mL,搖勻,于37℃下反應15 min后在510 nm處測定吸光度值,按照公式(6)計算·OH的清除率:

        式中:A0為空白吸光度值;A1為待測液吸光度值。

        1.5.4 艾草總黃酮清除超氧陰離子自由基(O2-·)能力的測定

        采用鄰苯三酚自氧化法[13]進行測定。具體操作為:將VC和純化前后的艾草總黃酮配制成1 mg/mL的溶液,分別于比色管中加入待測液0.1 mL~0.8 mL,然后加入3.7 mL pH 8.2的Tris-HCl緩沖溶液,搖勻,于25℃水浴鍋中水浴20 min,再加入3 mmol/L鄰苯三酚0.3 mL,迅速搖勻倒入比色皿中,以10 mmol/L鹽酸作空白對照,于320 nm處測定吸光度值,每30 s記錄一次數(shù)值A320,共測10次,隨時間變化作A320線性關系圖,斜率為鄰苯三酚自氧化速率,根據(jù)公式(7)計算O2-·的清除率:

        式中:V0為空白對照鄰苯三酚自氧化速率;V1為待測液鄰苯三酚自氧化速率。

        2 結果與分析

        2.1 靜態(tài)吸附試驗

        2.1.1 不同大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附和解吸效果比較

        6種大孔樹脂吸附及解吸試驗結果見表1。

        表1 6種大孔吸附樹脂對艾草總黃酮靜態(tài)吸附及解吸附性能比較Table 1 Determination of dynamic desorption rate of total flavonoids from Artemisia argyi by six kinds of adsorption resin

        D101在6種大孔吸附樹脂中的吸附率最高,HPD500、AB-8和 HP-20次之,DM301、和 ADS17的吸附率較低,但同時AB-8的解吸效果最好,作為合適的分離純化樹脂不僅吸附能力要強,且需要形成可逆吸附。同時,由于生產率與樹脂的吸附動力學特征關系緊密,因此,選取吸附和解吸附兼好的AB-8大孔吸附樹脂作為分離純化艾草總黃酮的最佳樹脂,后續(xù)試驗均以AB-8大孔吸附樹脂為研究對象,具體探究其靜態(tài)及動態(tài)的吸附和解吸性能。

        2.1.2 AB-8大孔吸附樹脂靜態(tài)試驗結果分析

        AB-8大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附動力學曲線見圖1。pH值對AB-8大孔吸附樹脂的吸附效果的影響見圖2。吸附溫度對AB-8大孔吸附樹脂吸附效果影響見圖3。乙醇濃度對AB-8樹脂解吸效果影響見圖4。

        由圖1可得吸附時間30 min~180 min時,隨著吸附時間的延長,艾草總黃酮溶液的吸附率逐漸升高;180min后,曲線逐漸趨于平緩,樹脂吸附基本達到飽和狀態(tài)。因此,吸附時間選擇180 min為宜。

        圖1 AB-8大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附動力學曲線Fig.1 AB-8 resin static adsorption kinetics curve

        圖2 pH值對AB-8大孔吸附樹脂的吸附效果的影響Fig.2 Effect of pH value on adsorption rate and desorption rate of AB-8 resin

        圖3 吸附溫度對AB-8大孔吸附樹脂吸附效果影響Fig.3 Effect of adsorption temperature on adsorption of AB-8 resin

        圖4 乙醇濃度對AB-8樹脂解吸效果影響Fig.4 Effect of ethanol concentration on desorption of AB-8 resin

        由圖2可得:溶液pH值為2~4時,艾草總黃酮的吸附率增大;當pH值為4時,總黃酮的吸附率達到87.50%;當pH值超過4時,吸附率隨pH值的升高而逐漸下降。這是因為黃酮為多羥基酚類化合物,呈酸性,在酸性條件下以分子狀態(tài)存在,通過范德華力與樹脂吸附,因此易被吸附,而在堿性條件下,黃酮分子羥基去離子化,黃酮類化合物形成離子型結構,故不易被吸附[14]。因此,在上樣液pH值為4時,AB-8大孔吸附樹脂對艾草總黃酮吸附效果最好。

        由圖3可得:在不同溫度下,隨著吸附時間的增加,AB-8大孔吸附樹脂對艾草總黃酮的吸附率均呈上升趨勢;當時間小于40 min時,不同溫度條件對應的總黃酮吸附率相差較小,當時間大于40 min后,20、30℃和50℃對應的總黃酮吸附率要高于40℃和60℃,且100 min后,20℃對應的艾草總黃酮吸附率要高于其它溫度條件下的吸附率。因此,選取20℃為最佳吸附溫度。

        由圖4可得:選取乙醇溶液作為洗脫劑,對樹脂具有很好的解吸效果。當乙醇濃度為50%~80%時,樹脂的解吸能力隨著乙醇濃度的增加而逐漸提高;當乙醇濃度超過80%時,解吸率趨于平緩。這是由于黃酮類化合物與樹脂間有強烈的氫鍵作用,吸附在樹脂上的黃酮類化合物不容易被水和低濃度的乙醇洗脫下來[15]。因此,從解吸效果和節(jié)約乙醇兩方面考慮,選擇80%的乙醇最為適宜,對應解吸率達84.4%。

        2.2 動態(tài)試驗分析

        上樣液濃度對大孔吸附樹脂吸附率的影響見圖5。上樣速度對大孔吸附樹脂吸附率的影響見圖6。洗脫劑流速對大孔吸附樹脂解吸率的影響見圖7。乙醇用量對大孔吸附樹脂解吸率的影響見圖8。

        圖5 AB-8上樣濃度對AB-8大孔吸附樹脂吸附效果的影響Fig.5 Effect of loading concentration on adsorption of AB-8 resin

        圖6 上樣液流速對AB-8大孔吸附樹脂吸附效果的影晌Fig.6 Effect of the flow rate of the sample solution on the adsorption of AB-8 resin

        圖7 洗脫液流速對解吸效果的影響Fig.7 Effect of eluent flow rate on desorption

        圖8 乙醇用量對洗脫的影響Fig.8 Effect of different ethanol volumes on desorption

        由圖5可得:當上樣液濃度為1.0 mg/mL~2.5 mg/mL時,樹脂的吸附率隨著上樣液濃度增加而升高;當上樣液濃度超過2.5 mg/mL時,吸附率反而降低。這是由于濃度低的黃酮溶液在通過柱床時,其流速過大,大于傳質速度,傳質未進行徹底吸附;而濃度高的上樣液通過柱床的流速減慢,向內部傳質速度變慢,使得有些黃酮成分沒有被及時吸附就泄漏出來[16];此外,上樣液濃度過大也可能造成大孔吸附樹脂使用周期短,再生次數(shù)增多,影響樹脂的使用壽命。當上樣液濃度為2.5 mg/mL時,吸附率最高為83.2%,故選擇上樣液濃度2.5 mg/mL進行后續(xù)試驗。

        由圖6可得:上樣液流速在0.5 mL/min~1.5 mL/min時,隨著流速的增大,總黃酮的吸附率增大;當流速為1.5 mL/min時,總黃酮吸附率最大,達到87.1%;當流速在1.5 mL/min~2.5 mL/min時,隨著流速增大,總黃酮吸附率減小。這是因為流速過低時溶液與樹脂的接觸時間長,吸附率逐漸升高,可適當增大流速,但流速過高時溶液與樹脂的接觸時間太短,有效成分不能完全吸附在樹脂上,從而導致黃酮的泄漏量增加,吸附率降低[17-18],因此選擇上樣流速1.5 mL/min進行后續(xù)試驗。

        由圖7可得:當洗脫流速為1.5 mL/min時,解吸率最高為91.2%。在過高或過低的洗脫速率下,解吸率均較低。這是因為在較低流速下,不能完全洗脫樹脂上的黃酮;當流速過快時,由于洗脫劑與黃酮接觸時間太短,無法徹底從樹脂上洗脫。因此,選擇洗脫速率1.5 mL/min進行后續(xù)試驗。

        由圖8可得:當乙醇用量為40 mL~100 mL時,隨著乙醇用量的增加,解吸率逐漸增加;當乙醇用量為100 mL時,樹脂的解吸率最高為95%;繼續(xù)增大乙醇用量,解吸率反而降低。這是因為洗脫劑乙醇用量低時,樹脂對黃酮的吸附作用使其難以完全解吸,造成洗脫不徹底,當洗脫用量過大時,樹脂未能對黃酮完全吸附,并在淋洗過程中造成泄漏損失[19-20]。因此,選擇乙醇用量100 mL進行后續(xù)試驗。

        2.3 艾草總黃酮純化前后純度比較

        純化前后艾草總黃酮的純度比較結果見表2。

        表2 純化前后艾草總黃酮的純度比較Table 2 Comparison of purity before and after purification

        由表2可知,經過純化艾草總黃酮的純度由(36.1±0.50)%增加至(75.43±0.93)%,純度提高了近 2倍,說明純化效果良好。

        2.4 抗氧化試驗結果

        艾草總黃酮粗提物、純化物和VC的總還原力比較見圖9。艾草總黃酮粗提物、純化物和VC對DPPH·的清除能力見圖10。艾草總黃酮粗提物、純化物和VC對·OH清除能力見圖11。艾草總黃酮粗提物、純化物和VC對O2-·清除能力見圖12。

        由圖9可得:物質的還原力可反映其抗氧化能力,當某物質的還原力很強時,其供應的電子可還原氧化性物質,還可與其自由基反應,形成穩(wěn)定性較強的物質,因此,還原力越強代表物質抗氧化性越強[21]??傸S酮粗提物、純化物和VC的總還原力均與質量濃度呈正相關,即濃度越大,還原力越強,表明總黃酮溶液具有一定的還原力;在同一濃度下,純化物總還原力大于粗提物,但粗提物和純化物的還原力均小于VC。

        圖9 艾草總黃酮粗提物、純化物和VC總還原力比較Fig.9 Total reduction force of VC,purified substance and flavonoid crude extract

        圖10 艾草總黃酮粗提物、純化物和VC對DPPH·清除能力的比較Fig.10 The ability to eliminate DPPH radical of flavonoids from VC,purified substance and flavonoid crude extract

        圖11 艾草總黃酮粗提物、純化物和VC對·OH的清除率Fig.11 ·OH clearance rate of flavonoids crude extract,VCand purified substance

        圖12 艾草總黃酮粗提物、純化物和VC對O2-·的清除率Fig.12 O2-·clearance rate of flavonoids crude extract,VCand purified substance

        由圖10可得:DPPH·是用于測定植物提取液抗氧化能力的一種快速、簡便的方法,其溶解性好,性質穩(wěn)定,在有機溶劑中是一種較穩(wěn)定的自由基,抗氧化劑供質子的能力決定了DPPH自由基的清除能力[22]。隨濃度的增大,艾草總黃酮粗提物和純化物、VC對DPPH·的清除率均呈上升趨勢,當濃度為0.1 mg/mL~0.4 mg/mL時,艾草總黃酮粗提物和純化物對應的清除率增加明顯,增幅分別為41.6 mg/mL和31.7 mg/mL;當濃度為1.6 mg/mL時,黃酮粗提物和純化物對DPPH·的清除率達到最大值,分別為67.1%、80.8%。在相同濃度下,艾草總黃酮純化物清除DPPH·的能力高于粗提物。綜上,艾草總黃酮粗提物和純化物對DPPH·均有一定的清除能力,純化物的清除效果優(yōu)于粗提物,但均弱于VC。

        由圖11可得:羥基自由基是氧自由基中的一種對細胞及大分子生物破壞作用較強的自由基,它會與體內如氨基酸、糖類、脂類等一系列物質發(fā)生反應,從而引起機體組織核酸斷裂、脂質過氧化和蛋白質聚合等生化反應,導致機體細胞組織發(fā)生病變,引發(fā)各類疾病產生和加快機體衰老速度[23-24]。隨著質量濃度的增加,黃酮粗提物、純化物和VC對·OH的清除率不斷增大,當濃度為0.1 mg/mL~1.6 mg/mL時,艾草總黃酮粗提物的清除率從18.01%提高至65.03%,純化物的清除率從28.04%提高至86.01%。在質量濃度相同的條件下,對·OH清除率由高到低的排序為:VC>純化物>粗提物。

        由圖12可得:艾草總黃酮粗提物、純化物和VC對O2-·清除能力。超氧陰離子自由基是代謝過程中產生的第一氧自由基,自身具有強烈的毒害物質,其生成的衍生物(羥自由基和過氧化氫)具有一定的細胞毒性[25]。隨著質量濃度的增加,黃酮粗提物、純化物和VC對O2-·的清除率不斷增大,濃度為0.6 mg/mL時三者對應的清除率均達最大值,粗提物和純化物的清除率分別為49.92 mg/mL和58.03 mg/mL;當濃度>0.6 mg/mL時,三者清除率無明顯變化。在質量濃度相同的條件下,對O2-·清除率由高到低的排序為:VC>純化物>粗提物。

        3 結論

        通過比較6種大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附和解吸附效果,結果表明AB-8大孔吸附樹脂的綜合效果最佳,其最佳工藝條件為:上樣液濃度為2.5 mg/mL,上樣液pH值為4,吸附溫度為20℃,上樣速度為1.5 mL/min,選用80%乙醇進行洗脫,洗脫流速為1.5 mL/min,洗脫用量為100 mL。在此吸附和解吸條件下,艾草總黃酮的純度由36.1%上升至75.43%,純度提高了近2倍。該方法成本低、選擇性好、產品純度高、樹脂可再生、工藝簡單利于實現(xiàn)大規(guī)模生產等優(yōu)點。體外抗氧化試驗表明:艾草總黃酮具有良好的體外抗氧化能力。純化物總還原力和DPPH·、·OH、O2-·清除能力均強于粗提物,但都弱于VC。

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