陳海燕 張娟 劉小華

摘 要：為分析某市市售食品中環(huán)境雌激素（EEs）的污染狀況，本研究采用單純隨機(jī)抽樣方法——隨機(jī)對(duì)2個(gè)超市和2個(gè)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中的肉類、水產(chǎn)品、蔬菜類和糧谷類食品進(jìn)行采樣，使用液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)樣品中的4種環(huán)境雌激素含量，包括雙酚A（BPA）、雌二醇（E2）、壬基酚（NP）和炔雌醇（EE2），并通過(guò)試驗(yàn)比較4種食品中環(huán)境雌激素的檢出率和平均檢出量。結(jié)果顯示，4種常見食品中均有樣品檢出EEs，且4種食品中E2和BPA的檢出率比較差異與NP和E2的檢出量比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。因此得出結(jié)論，不同食物中環(huán)境雌激素的檢出率和檢出量存在一定差異，顯示出不同食物對(duì)EEs的蓄積作用存在一定的異質(zhì)性。

關(guān)鍵詞：環(huán)境雌激素 ?雙酚A ?雌二醇 ?壬基酚 ?炔雌醇

隨著現(xiàn)代社會(huì)的不斷發(fā)展，民眾愈發(fā)關(guān)注環(huán)境問(wèn)題，近年來(lái)，食品中環(huán)境雌激素（environmemal estrogens，EEs）的污染狀況引起了人們的普遍重視[1]。EEs是指環(huán)境中一種具有類似生物體雌激素活性的內(nèi)分泌干擾物質(zhì)，其主要來(lái)源于農(nóng)業(yè)有機(jī)氯殺蟲劑的使用、日常生活垃圾的焚燒，以及醫(yī)療衛(wèi)生部門中己烯雌酚藥物的使用等[2]。低濃度的EEs可通過(guò)食物鏈等多種途徑進(jìn)入人體，并模擬內(nèi)源性雌激素樣生理、生化作用等干擾體內(nèi)正常的內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，進(jìn)而對(duì)生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)等造成嚴(yán)重?fù)p傷[3，4]。因此，調(diào)查食品中EEs的膳食暴露情況能夠?yàn)樘接慐Es的污染物種類和來(lái)源，以及進(jìn)行污染物的監(jiān)管和控制提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

C18色譜柱（2.1×100mm，1.7μm）;乙酸銨、甲醇，色譜級(jí);雙酚A標(biāo)準(zhǔn)品，BPA;雌二醇（E2）標(biāo)準(zhǔn)品;壬基酚（NP）標(biāo)準(zhǔn)品;炔雌醇（EE2）標(biāo)準(zhǔn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集

采用單純隨機(jī)抽樣方法在2個(gè)超市和2個(gè)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)進(jìn)行隨機(jī)采樣，采集肉類（雞肉、豬肉）、水產(chǎn)類（帶魚、蝦）、蔬菜類（白菜、西紅柿）及糧谷類（大米、面條）食品各3小份（0.5kg），避光保存。將食品洗凈后自然晾干，經(jīng)充分切碎研磨后制得初級(jí)樣品，置于4℃保存。

1.2.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取5.00g樣品置于50mL離心管中，分別加入pH值5.2的乙酸-乙酸鈉緩沖液10mL、β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸脂酶溶液100μL，渦旋混勻后于37℃過(guò)夜進(jìn)行酶解。次日取出進(jìn)行提取操作——加入乙酸乙酯溶液20mL，混勻后超聲20min，3500rpm離心10min，取上清液重復(fù)一次;利用氮吹儀對(duì)上清液進(jìn)行濃縮，以甲醇定容至2mL，旋渦混勻2min后靜置，備樣待測(cè)。

1.2.3 環(huán)境雌激素含量檢測(cè)

采用液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相為乙酸銨和甲醇，將柱溫設(shè)置為35℃，進(jìn)樣速度為0.2mL/min，進(jìn)樣量為10μL。質(zhì)譜分析時(shí)，以ESI（-）為離子源，方式選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），毛細(xì)管電壓為-2.5kV，離子源溫度為120℃，脫溶劑溫度為350℃。

1.3 回收率實(shí)驗(yàn)

取高濃度的4種標(biāo)準(zhǔn)品，按色譜條件重復(fù)進(jìn)樣3次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品的回收率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS24.0，非正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)采用M（P25，P75）表示，多組間比較方法為秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)及率描述，組間比較利用卡方檢驗(yàn);α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 方法的回收率

各樣品的回收率在83.6%～96.7%之間，RSD在4.6%～10.0%之間，說(shuō)明本方法能較好地滿足樣品測(cè)定要求，結(jié)果較為可靠。

2.2 常見食品中環(huán)境雌激素的檢出率

檢測(cè)結(jié)果顯示，4種常見食品中均有樣品被檢測(cè)出環(huán)境雌激素，但檢出率不盡相同。將4種食品中的NP和EE2的檢出率進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;E2和BPA的檢出率進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），詳見表1。

2.3 常見食品中環(huán)境雌激素的檢出量

將4種常見食品的EE2和BPA檢出量進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;NP和E2的檢出量進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），詳見表2。

3 討論

BPA是目前使用最廣泛的低毒性工業(yè)化合物之一，也是生產(chǎn)聚氯乙烯、環(huán)氧樹脂等多種高分子材料的重要原料[5]。E2和EE2因與天然雌二醇具有相同的藥理作用而在工業(yè)上被大量生產(chǎn)和使用，但二者皆為具有雌激素效應(yīng)的典型內(nèi)分泌干擾物質(zhì)[6，7]，且EE2是口服避孕藥的主要活性成分。NP是一種典型的內(nèi)分泌干擾物質(zhì)，其被廣泛應(yīng)用于紡織印染行業(yè)，并具有“精子殺手”的稱號(hào)[8]。此外，這4類環(huán)境雌激素與乳腺癌、性早熟、惡性腫瘤、免疫失調(diào)及神經(jīng)系統(tǒng)損害等疾病的發(fā)生率增加相關(guān)[9-11]。本研究對(duì)市售食品中的4類環(huán)境雌激素（BPA、E2、NP、EE2）的含量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，肉類、水產(chǎn)類、蔬菜類、糧谷類這4種常見食物中均有樣品檢測(cè)出環(huán)境雌激素，其中NP和E2的檢出率較高，最高可達(dá)100.0%。此外，4類食物中的E2和BPA的檢出率差異較大（P<0.05），EE2和NP的檢出率幾乎無(wú)差異（P>0.05）;4種食物中NP和E2的平均檢出量不同（P<0.05），EE2和BPA的檢出量幾乎無(wú)差異（P>0.05）。由此可見，不同食物中環(huán)境雌激素的蓄積作用存在一定的異質(zhì)性——肉類和水產(chǎn)類對(duì)NP和E2的蓄積作用較強(qiáng)，蔬菜類中NP、E2和BPA的蓄積中作用較為明顯，糧谷類中的NP和BPA檢出量較高。環(huán)境雌激素蓄積作用的差異與不同動(dòng)植物生長(zhǎng)過(guò)程中相關(guān)化學(xué)品的使用，以及其自身的吸收和利用率有關(guān)。例如，NP是殺蟲劑和生物殺傷劑的主要輔助成分，BPA主要用于增塑劑、農(nóng)藥等化工產(chǎn)品的生產(chǎn)中。

綜上所述，本研究采用液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)食品中的4種環(huán)境雌激素進(jìn)行了檢測(cè)，該方法的回收率較高，可滿足食品檢測(cè)工作的需要。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同食品中4種環(huán)境雌激素的檢出率和平均檢出量有所差異。此外，想要深入探索環(huán)境雌激素的來(lái)源及是否會(huì)對(duì)人體造成危害則需要更多的環(huán)境流行病學(xué)及毒理學(xué)作用機(jī)制等資料，故可作為今后研究的方向。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙靜，劉億鑫，邵征，等.城鎮(zhèn)污水二級(jí)處理和再生水三級(jí)處理過(guò)程的雌激素活性變化[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2020，15（2）：81-86.

[2] 趙桃桃，李聰，俞亭超.甾體類環(huán)境雌激素污染現(xiàn)狀及去除方法研究[J].給水排水，2014，40（3）：154-160.

[3] 孫沛雯，王中衛(wèi)，李翔宇，等.不同水體中環(huán)境類雌激素污染狀況調(diào)查與分析[J].干旱環(huán)境監(jiān)測(cè)，2020，34（1）：44-48.

[4] 馮磊，張韓特，李響，等.IL-4協(xié)同雌二醇對(duì)小鼠乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用及其機(jī)制[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2020，46（3）：536-542.

[5] 張石磊，包佳鷺，史萬(wàn)玉，等.環(huán)境雌激素雙酚A暴露干擾仔鼠卵巢發(fā)育的研究[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2020，28（1）：108-118.

[6] 王菊，廣斌，信瑜，等.環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對(duì)金魚性腺組織學(xué)影響[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）.2018，38（11）：67-76.

[7] 朱艷瓊，韓寶三.天然雌激素雌酮、雌二醇和雌三醇的分析檢測(cè)進(jìn)展[J].化學(xué)世界，2020，61（4）：237-244.

[8] 孟沅，徐文博，李清釗，等.壬基酚對(duì)雄性小鼠生精能力及睪酮的影響[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2015（11）：1067-1070.

[9] 季曉亞，李娜，袁圣武，等.環(huán)境雌激素生物效應(yīng)的作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2017，12（1）：38-51.

[10] 王娟，劉文龍，趙苒，等.雙酚A聯(lián)合己烯雌酚對(duì)未成年雌性SD大鼠的雌激素效應(yīng)[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2018，44（4）：731-735.

[11] 郝鵬，張喜慶，嵇少澤，等.環(huán)境雌激素17β-雌二醇降解研究進(jìn)展[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù)，2019（S02）：61-68.