石劍雄

遼寧省鞍山市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧鞍山 114001

自身免疫性肝?。ˋILD）是指肝臟組織在免疫應(yīng)答以及免疫功能異常的自身免疫系統(tǒng)攻擊下引發(fā)的一種慢性肝病，其起病隱匿、臨床表現(xiàn)多樣，患者通常會(huì)出現(xiàn)腹脹、乏力、肝區(qū)不適、食欲減退以及皮膚鞏膜黃染等癥狀特征，但單純據(jù)此診斷較為困難[1-3]。有研究表明，不同類(lèi)型與病理特征的AILD 各有特點(diǎn)，采取AILD 抗體譜檢測(cè)能夠做到有效的診斷[4-5]。為進(jìn)一步明確AILD 抗體譜檢測(cè)對(duì)AILD的鑒別診斷價(jià)值，本研究就近年來(lái)收治的部分AILD患者資料進(jìn)行相關(guān)分析和比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年3月～2020年1月本院收治的自身免疫性肝炎（AIH）患者、原發(fā)性膽汁性肝?。≒BC）患者、原發(fā)性硬化膽管?。≒SC）患者各30例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《自身免疫性肝病基礎(chǔ)與臨床》[6]中關(guān)于AIH、PBC 或PSC 的判斷依據(jù)；②患者知情同意，且醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已批準(zhǔn)研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝腫瘤、酒精性肝硬化等肝臟疾病；②拒絕參與研究等。AIH組中，男17例，女13例；年齡22～65歲，平均（46.43±5.87）歲。PBC組中，男16例，女14例；年齡21～66歲，平均（47.08±5.94）歲。PSC組中，男16例，女14例；年齡23～65歲，平均（46.71±6.03）歲。選取同期的30例無(wú)重要臟器疾?。ㄐ?、肝、肺等）健康體檢者作為健康受檢組，其中男15例，女15例；年齡22～65歲，平均（46.92±5.79）歲。四組受檢對(duì)象的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

在晨起空腹下采集靜脈血3 ml，并使用真空采血管予以保存，經(jīng)10 min 離心（轉(zhuǎn)速：3000 r/min）處理后，將獲取到的血清存放于冰箱中備用，設(shè)置溫度為-20℃。本研究所用抗體譜免疫球蛋白G（IgG）試劑盒產(chǎn)自歐盟醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)有限公司，檢測(cè)過(guò)程按照抗體譜IgG 試劑盒說(shuō)明書(shū)逐步完成。

1.2.1 間接免疫熒光法檢測(cè) 血清抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、抗平滑肌抗體（SMA）抗體由間接免疫熒光法測(cè)定，抗原選用HEp-2 細(xì)胞基質(zhì)以及大鼠胃基質(zhì)的冰凍生物薄片，按照1∶100 的比例對(duì)待檢血清進(jìn)行配比后，將基質(zhì)置入溫浴半小時(shí)，洗滌后將羊抗人IgG（有異硫氰酸熒光素標(biāo)記）放入，持續(xù)半小時(shí)后洗片、封片，借助熒光顯微鏡對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察。ANA 或AMA 陽(yáng)性判斷：組織或細(xì)胞內(nèi)有特異性黃綠色熒光出現(xiàn)。

1.2.2 免疫印跡法檢測(cè) 抗可溶性肝抗原/肝胰抗原（SLA/LP）、抗肝腎微粒體抗體Ⅰ型（LKM-Ⅰ）抗體由免疫印跡法進(jìn)行測(cè)定，于硝酸纖維薄膜層對(duì)基因重組表達(dá)的LKM-1、SLA/LP 抗原做包被，并對(duì)5種相對(duì)分子質(zhì)量各異的AMA-M2 亞型抗原進(jìn)行包被。按照1∶50 的比例對(duì)待檢血清進(jìn)行配比，并取用30 μl 與稀釋液1.5 ml 混合，觀察膜反應(yīng)；在常規(guī)溫度下做持續(xù)1 h 的振蕩孵育，洗膜后將抗人IgG（有酶標(biāo)記）滴入，在常規(guī)溫度下水平晃動(dòng)1 h后洗膜，給予NBT/BC IP顯色10 min，通過(guò)蒸餾水結(jié)束反應(yīng)。SLA/LP、LKM-Ⅰ陽(yáng)性判斷：與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照條帶圖進(jìn)行比對(duì)，可見(jiàn)特定區(qū)域條帶著色，且顏色清晰明確。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SSPS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t 檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組受檢者血清ANA、AMA抗體測(cè)定結(jié)果的比較

AIH組、PBC組、PSC組的血清ANA陽(yáng)性率高于健康受檢組，AIH組的血清ANA 陽(yáng)性率高于PBC組、PSC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PBC組與PSC組的血清ANA 陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。PBC組的血清AMA 陽(yáng)性率高于AIH組、PSC組、健康受檢組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AIH組、PSC組及健康受檢組均無(wú)AMA抗體陽(yáng)性檢出（表1）。

表1 四組受檢者血清ANA、AMA抗體測(cè)定結(jié)果的比較[n（%）]

2.2 四組受檢者SMA滴度≥1/320、SLA/LP與LKM-Ⅰ抗體測(cè)定結(jié)果的比較

AIH組的SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ陽(yáng)性率高于PBC組、PSC組、健康受檢組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PBC組、PSC組及健康受檢組的SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。

表2 四組受檢者SMA滴度≥1/320、SLA/LP與LKM-Ⅰ抗體測(cè)定結(jié)果的比較[n（%）]

3 討論

AILD 根據(jù)組織病理學(xué)與免疫學(xué)劃分，通常可分為AIH、PBC 與PSC 等多種病型。目前，臨床關(guān)于該病的發(fā)病機(jī)制雖然未達(dá)成統(tǒng)一的見(jiàn)解，但臨床學(xué)者普遍支持抗原被激活的說(shuō)法[7-8]，至于其誘發(fā)原因，則多認(rèn)為與病毒感染等因素密切相關(guān)[19]。肝組織在遭受麻疹、乙肝病毒（HBV）等感染后，肝細(xì)胞膜表層人白細(xì)胞抗原（HIA）大量活化，可刺激自身B 細(xì)胞釋放自身抗體，損害人體的肝臟組織功能，發(fā)展至一定程度后則可誘發(fā)肝硬化或肝功能衰竭，嚴(yán)重危及患者的生命健康。因其普遍存在特異性自身抗體，且自身抗體的滴度水平通常較高，故對(duì)AILD患者采取自身抗體譜檢測(cè)是鑒別與診斷疾病的一種可行途徑。

肖倩等[10]的研究指出，血清AMA 在檢測(cè)PBC 方面有高度的特異性，而SLA/LP 在對(duì)AIH 診斷方面的敏感度也較高，故實(shí)施自身抗體譜檢測(cè)對(duì)于AILD患者的早期診治臨床意義顯著。不同病型AILD 對(duì)血清ANA水平的影響各有差異，其中以AIH 造成的影響最為明顯[11]。本研究通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，AIH組的血清ANA陽(yáng)性率高達(dá)96.7%，PBC組、PSC組的血清ANA抗體水平也有一定程度的改變，檢測(cè)陽(yáng)性率分別為63.3%與60.0%；而健康受檢組無(wú)一例血清ANA 呈陽(yáng)性，與上述研究看法基本吻合。在自身抗體譜檢測(cè)中，血清ANA抗體的高敏感性能夠用于篩查AILD，可作為檢測(cè)AILD的一個(gè)重要標(biāo)志物。

血清AMA 是一種無(wú)器官、無(wú)種屬特異性的自身抗體，其在PBC患者中的檢測(cè)水平一般呈高表達(dá)[12]。劉小慧[13]的研究報(bào)道顯示，該抗體在PBC患者中的陽(yáng)性率約為90%；尤其是AMA-M2，還可視為PBC 血清的一個(gè)特征性自身抗體。本研究通過(guò)對(duì)120例自愿參與的受檢對(duì)象進(jìn)行血清AMA抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有93.3%的PBC患者血清AMA 呈陽(yáng)性，其余肝病患者以及健康體檢者血清AMA抗體均呈陰性，與上述研究及黃程勇等[14]的觀點(diǎn)基本一致，由此可斷定，血清AMA抗體用于PBC 篩查有較高的價(jià)值，是診斷PBC的一項(xiàng)敏感指標(biāo)。

PSC 是除AIH、PBC 外的另一種自身免疫性肝病常見(jiàn)類(lèi)型，但目前臨床對(duì)該病的診斷仍缺少有效的手段[15]。本研究通過(guò)對(duì)30例PSC患者實(shí)施自身抗體譜檢測(cè)，并與30例AIH患者、30例PBC患者以及30例健康受檢者的檢測(cè)報(bào)告進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在血清ANA陽(yáng)性率方面，PSC組僅為60.0%，未見(jiàn)一例患者血清AMA 呈陽(yáng)性；同時(shí)對(duì)于SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ等的檢測(cè)，結(jié)果均無(wú)陽(yáng)性病例報(bào)告。針對(duì)PSC患者的鑒別與診斷仍然是臨床檢測(cè)AILD 工作的難點(diǎn)[16]。對(duì)于該疾病類(lèi)型患者的檢測(cè)，根據(jù)既往臨床經(jīng)驗(yàn)，筆者認(rèn)為需要結(jié)合患者的既往肝病史以及臨床影像報(bào)告等資料進(jìn)行綜合判斷，通過(guò)聯(lián)合診斷的方式以進(jìn)一步提高臨床診斷PSC 的準(zhǔn)確性。

綜上所述，自身抗體譜檢測(cè)是臨床篩查肝臟疾病的常用手段，用于AILD的鑒別與診斷同樣意義重大，重視結(jié)合AILD患者的自身抗體譜檢測(cè)結(jié)果、臨床癥狀以及其他生化指標(biāo)，能夠?yàn)榕R床制訂可行的診療方案提供參考，從而提高對(duì)AILD的綜合治療水平。