石劍雄

遼寧省鞍山市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧鞍山 114001

自身免疫性肝?。ˋILD）是指肝臟組織在免疫應答以及免疫功能異常的自身免疫系統(tǒng)攻擊下引發(fā)的一種慢性肝病，其起病隱匿、臨床表現多樣，患者通常會出現腹脹、乏力、肝區(qū)不適、食欲減退以及皮膚鞏膜黃染等癥狀特征，但單純據此診斷較為困難[1-3]。有研究表明，不同類型與病理特征的AILD 各有特點，采取AILD 抗體譜檢測能夠做到有效的診斷[4-5]。為進一步明確AILD 抗體譜檢測對AILD的鑒別診斷價值，本研究就近年來收治的部分AILD患者資料進行相關分析和比較，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年3月～2020年1月本院收治的自身免疫性肝炎（AIH）患者、原發(fā)性膽汁性肝?。≒BC）患者、原發(fā)性硬化膽管?。≒SC）患者各30例。納入標準：①符合《自身免疫性肝病基礎與臨床》[6]中關于AIH、PBC 或PSC 的判斷依據；②患者知情同意，且醫(yī)學倫理委員會已批準研究。排除標準：①肝腫瘤、酒精性肝硬化等肝臟疾病；②拒絕參與研究等。AIH組中，男17例，女13例；年齡22～65歲，平均（46.43±5.87）歲。PBC組中，男16例，女14例；年齡21～66歲，平均（47.08±5.94）歲。PSC組中，男16例，女14例；年齡23～65歲，平均（46.71±6.03）歲。選取同期的30例無重要臟器疾?。ㄐ?、肝、肺等）健康體檢者作為健康受檢組，其中男15例，女15例；年齡22～65歲，平均（46.92±5.79）歲。四組受檢對象的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

在晨起空腹下采集靜脈血3 ml，并使用真空采血管予以保存，經10 min 離心（轉速：3000 r/min）處理后，將獲取到的血清存放于冰箱中備用，設置溫度為-20℃。本研究所用抗體譜免疫球蛋白G（IgG）試劑盒產自歐盟醫(yī)學診斷技術有限公司，檢測過程按照抗體譜IgG 試劑盒說明書逐步完成。

1.2.1 間接免疫熒光法檢測 血清抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、抗平滑肌抗體（SMA）抗體由間接免疫熒光法測定，抗原選用HEp-2 細胞基質以及大鼠胃基質的冰凍生物薄片，按照1∶100 的比例對待檢血清進行配比后，將基質置入溫浴半小時，洗滌后將羊抗人IgG（有異硫氰酸熒光素標記）放入，持續(xù)半小時后洗片、封片，借助熒光顯微鏡對結果進行觀察。ANA 或AMA 陽性判斷：組織或細胞內有特異性黃綠色熒光出現。

1.2.2 免疫印跡法檢測 抗可溶性肝抗原/肝胰抗原（SLA/LP）、抗肝腎微粒體抗體Ⅰ型（LKM-Ⅰ）抗體由免疫印跡法進行測定，于硝酸纖維薄膜層對基因重組表達的LKM-1、SLA/LP 抗原做包被，并對5種相對分子質量各異的AMA-M2 亞型抗原進行包被。按照1∶50 的比例對待檢血清進行配比，并取用30 μl 與稀釋液1.5 ml 混合，觀察膜反應；在常規(guī)溫度下做持續(xù)1 h 的振蕩孵育，洗膜后將抗人IgG（有酶標記）滴入，在常規(guī)溫度下水平晃動1 h后洗膜，給予NBT/BC IP顯色10 min，通過蒸餾水結束反應。SLA/LP、LKM-Ⅰ陽性判斷：與標準對照條帶圖進行比對，可見特定區(qū)域條帶著色，且顏色清晰明確。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SSPS 20.0 統(tǒng)計學軟件處理數據，計數資料用頻數或百分率表示，采用χ2檢驗；計量資料用均數±標準差（±s）表示，采用t 檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 四組受檢者血清ANA、AMA抗體測定結果的比較

AIH組、PBC組、PSC組的血清ANA陽性率高于健康受檢組，AIH組的血清ANA 陽性率高于PBC組、PSC組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；PBC組與PSC組的血清ANA 陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。PBC組的血清AMA 陽性率高于AIH組、PSC組、健康受檢組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；AIH組、PSC組及健康受檢組均無AMA抗體陽性檢出（表1）。

表1 四組受檢者血清ANA、AMA抗體測定結果的比較[n（%）]

2.2 四組受檢者SMA滴度≥1/320、SLA/LP與LKM-Ⅰ抗體測定結果的比較

AIH組的SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ陽性率高于PBC組、PSC組、健康受檢組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；PBC組、PSC組及健康受檢組的SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表2）。

表2 四組受檢者SMA滴度≥1/320、SLA/LP與LKM-Ⅰ抗體測定結果的比較[n（%）]

3 討論

AILD 根據組織病理學與免疫學劃分，通?？煞譃锳IH、PBC 與PSC 等多種病型。目前，臨床關于該病的發(fā)病機制雖然未達成統(tǒng)一的見解，但臨床學者普遍支持抗原被激活的說法[7-8]，至于其誘發(fā)原因，則多認為與病毒感染等因素密切相關[19]。肝組織在遭受麻疹、乙肝病毒（HBV）等感染后，肝細胞膜表層人白細胞抗原（HIA）大量活化，可刺激自身B 細胞釋放自身抗體，損害人體的肝臟組織功能，發(fā)展至一定程度后則可誘發(fā)肝硬化或肝功能衰竭，嚴重危及患者的生命健康。因其普遍存在特異性自身抗體，且自身抗體的滴度水平通常較高，故對AILD患者采取自身抗體譜檢測是鑒別與診斷疾病的一種可行途徑。

肖倩等[10]的研究指出，血清AMA 在檢測PBC 方面有高度的特異性，而SLA/LP 在對AIH 診斷方面的敏感度也較高，故實施自身抗體譜檢測對于AILD患者的早期診治臨床意義顯著。不同病型AILD 對血清ANA水平的影響各有差異，其中以AIH 造成的影響最為明顯[11]。本研究通過比較發(fā)現，AIH組的血清ANA陽性率高達96.7%，PBC組、PSC組的血清ANA抗體水平也有一定程度的改變，檢測陽性率分別為63.3%與60.0%；而健康受檢組無一例血清ANA 呈陽性，與上述研究看法基本吻合。在自身抗體譜檢測中，血清ANA抗體的高敏感性能夠用于篩查AILD，可作為檢測AILD的一個重要標志物。

血清AMA 是一種無器官、無種屬特異性的自身抗體，其在PBC患者中的檢測水平一般呈高表達[12]。劉小慧[13]的研究報道顯示，該抗體在PBC患者中的陽性率約為90%；尤其是AMA-M2，還可視為PBC 血清的一個特征性自身抗體。本研究通過對120例自愿參與的受檢對象進行血清AMA抗體檢測，發(fā)現有93.3%的PBC患者血清AMA 呈陽性，其余肝病患者以及健康體檢者血清AMA抗體均呈陰性，與上述研究及黃程勇等[14]的觀點基本一致，由此可斷定，血清AMA抗體用于PBC 篩查有較高的價值，是診斷PBC的一項敏感指標。

PSC 是除AIH、PBC 外的另一種自身免疫性肝病常見類型，但目前臨床對該病的診斷仍缺少有效的手段[15]。本研究通過對30例PSC患者實施自身抗體譜檢測，并與30例AIH患者、30例PBC患者以及30例健康受檢者的檢測報告進行比較，發(fā)現在血清ANA陽性率方面，PSC組僅為60.0%，未見一例患者血清AMA 呈陽性；同時對于SMA滴度≥1/320、SLA/LP、LKM-Ⅰ等的檢測，結果均無陽性病例報告。針對PSC患者的鑒別與診斷仍然是臨床檢測AILD 工作的難點[16]。對于該疾病類型患者的檢測，根據既往臨床經驗，筆者認為需要結合患者的既往肝病史以及臨床影像報告等資料進行綜合判斷，通過聯合診斷的方式以進一步提高臨床診斷PSC 的準確性。

綜上所述，自身抗體譜檢測是臨床篩查肝臟疾病的常用手段，用于AILD的鑒別與診斷同樣意義重大，重視結合AILD患者的自身抗體譜檢測結果、臨床癥狀以及其他生化指標，能夠為臨床制訂可行的診療方案提供參考，從而提高對AILD的綜合治療水平。